Tweens修饰猪胰脂酶及其对酶促酯交换反应的影响

论文摘要

本文研究了醇水比、Tweens添加量和搅拌时间等因素对Tweens修饰PPLipase的影响，并讨论了溶剂体系中Tweens修饰的PLipase对催化酯交换反应的影响，初步研究了Tweens修饰的PPLipase催化酯交换反应时对棕榈酸、硬脂酸和油酸选择性的影响。Tweens修饰PPLipase的最佳修饰条件分别为：Tween20：醇水比1:2（v/v），添加量5%（Tween20占Tween20和PPLipase总重的百分比，下同），搅拌时间15min；Tween40：醇水比1:2（v/v），添加量10%，搅拌时间15min；Tween60：醇水比1:2（v/v），添加量5%，搅拌时间30min；Tween65：醇水比1:2（v/v），添加量5%，搅拌时间15min；Tween80：醇水比1:3（v/v），添加量5%，搅拌时间15min；Tween85：醇水比1:3（v/v），添加量5%，搅拌时间30min。修饰PPLipase可以提高其在溶剂体系中的热稳定性。在溶剂体系下Tweens-PPLipase和PPLipase催化酯交换反应的结果显示：T60-PPLipase、T80-PPLipase、T85-PPLipase在40℃、50℃、60℃、70℃时催化反应的酯交换量均高于PPLipase，且催化反应的酰基位移率不高于PPLipase。加酶量对Tweens-PPLipase催化酯交换反应的研究表明，在一定的酶浓度范围内，反应的酯交换量随加酶量的增加而提高。T20-PPLipase、T40-PPLipase、T60-PPLipase、T65-PPLipase、T80-PPLipase和T85-PPLipase的最佳加酶量均为15%。Tweens-PPLipase和PPLipase催化酯交换反应中对棕榈酸、硬脂酸和油酸的选择性的研究表明，Tweens对PPLipase的修饰并没有改变其对脂肪酸的选择性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 主要符号表
• 第一章 前言
• 1.1 本课题研究意义
• 1.2 国内外研究现状
• 1.2.1 脂肪酶研究现状
• 1.2.2 化学修饰脂肪酶的研究现状
• 1.2.3 表面活性剂修饰脂肪酶研究现状
• 1.3 本课题的研究目的
• 1.4 研究目标和内容
• 1.4.1 研究目标
• 1.4.2 研究内容
• 第二章 Tweens在醇溶液体系中修饰猪胰脂酶
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料与方法
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 主要实验试剂
• 2.2.3 主要实验仪器
• 2.2.4 实验方法
• 2.2.4.1 Tweens 修饰 PPLipase 的方法
• 2.2.4.2 Tweens 修饰后的 PPLipase 的催化活性评价
• 2.2.4.3 薄层板的制备方法
• 2.2.4.4 甲醇钠（0.5mol/L）的配置方法
• 2.2.4.5 甘三酯脂肪酸组成分析方法
• 2.2.4.6 简易简式甲酯化分析
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 醇水比例对修饰效果的影响
• 2.3.2 Tweens 添加量对修饰效果的影响
• 2.3.3 搅拌时间对修饰效果的影响
• 2.3.4 Tweens-PPLipase 和 PPLipase 的热稳定性研究
• 2.4 本章小结
• 第三章 Tweens修饰的PPLipase在溶剂体系中催化酯交换反应
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料与方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验试剂
• 3.2.3 实验仪器
• 3.2.4 实验方法
• 3.2.4.1 Tweens 修饰 PPLipase 的制备方法
• 3.2.4.2 简易碱式甲酯化分析全样脂肪酸的方法
• 3.2.4.3 薄层板的制备方法
• 3.2.4.4 甲醇钠（0.5mol/L）的配置方法
• 3.2.4.5 酯交换量的评价
• 3.2.4.6 产物甘三酯 sn-2 位脂肪酸组成
• 3.2.4.7 酰基位移率的评价
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 溶剂体系中加酶量对Tweens-PPLipase催化酯交换反应的影响
• 3.3.1.1 溶剂体系中加酶量对T20-PPLipase催化酯交换反应的影响
• 3.3.1.2 溶剂体系中加酶量对T40-PPLipase催化酯交换反应的影响
• 3.3.1.3 溶剂体系中加酶量对T60-PPLipase催化酯交换反应的影响
• 3.3.1.4 溶剂体系中加酶量对T65-PPLipase催化酯交换反应的影响
• 3.3.1.5 溶剂体系中加酶量对T80-PPLipase催化酯交换反应的影响
• 3.3.1.6 溶剂体系中加酶量对T85-PPLipase催化酯交换反应的影响
• 3.3.2 溶剂体系中Tweens修饰的PPLipase对催化酯交换反应的影响
• 3.3.2.1 溶剂体系中T20-PPLipase对催化酯交换反应的影响
• 3.3.2.2 溶剂体系中T40-PPLipase对催化酯交换反应的影响
• 3.3.2.3 溶剂体系中T60-PPLipase对催化酯交换反应的影响
• 3.3.2.4 溶剂体系中T65-PPLipase对催化酯交换反应的影响
• 3.3.2.5 溶剂体系中T80-PPLipase对催化酯交换反应的影响
• 3.3.2.6 溶剂体系中T85-PPLipase对催化酯交换反应的影响
• 3.4 本章小结
• 第四章 酯交换体系中Tweens-PPLipase对脂肪酸选择性的影响
• 4.1 引言
• 4.2 验材料与方法
• 4.2.1 实验材料与主要设备
• 4.2.1.1 实验材料与试剂
• 4.2.1.2 实验试剂
• 4.2.1.3 实验设备
• 4.2.2 实验方法
• 4.2.2.1 Tweens修饰PPLipase的制备方法见第二章 2.2.3.1
• 4.2.2.2 酶催化酯交换反应对脂肪酸的选择性
• 4.2.2.3 简易碱式甲酯化分析全样脂肪酸的方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 溶剂体系中Tweens-PPLipase催化酯交换反应对棕榈酸和硬脂酸的选择性
• 4.3.1.1 PPLipase对棕榈酸和硬脂酸的选择性
• 4.3.1.2 T20-PPLipase对棕榈酸和硬脂酸的选择性
• 4.3.1.3 T40-PPLipase对棕榈酸和硬脂酸的选择性
• 4.3.1.4 T60-PPLipase对棕榈酸和硬脂酸的选择性
• 4.3.1.5 T65-PPLipase对棕榈酸和硬脂酸的选择性
• 4.3.1.6 T80-PPLipase对棕榈酸和硬脂酸的选择性
• 4.3.1.7 T85-PPLipase对棕榈酸和硬脂酸的选择性
• 4.3.2 溶剂体系中Tweens-PPLipase催化酯交换反应对棕榈酸和油酸的选择性
• 4.3.2.1 PPLipase对棕榈酸和油酸的选择性
• 4.3.2.2 T20-PPLipase对棕榈酸和油酸的选择性
• 4.3.2.3 T40-PPLipase对棕榈酸和油酸的选择性
• 4.3.2.4 T60-PPLipase对棕榈酸和油酸的选择性
• 4.3.2.5 T65-PPLipase对棕榈酸和油酸的选择性
• 4.3.2.6 T80-PPLipase对棕榈酸和油酸的选择性
• 4.3.2.7 T85-PPLipase对棕榈酸和油酸的选择性
• 4.4 小结
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 创新点
• 5.3 展望
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历