温化胶囊对人肝癌细胞株Bel-7402凋亡和代谢的影响

论文摘要

目的:研究中药复方制剂温化胶囊对人肝癌细胞株Bel-7402的凋亡和代谢的影响,本次研究力求在原有研究成果的基础上,通过对人肝癌Bel—7402细胞株的体外培养,来进一步观察温化胶囊对于肿瘤细胞的影响,。方法:实验共分四部分。第一部分:对人肝癌细胞株Bel-7402进行体外细胞培养,分设空白对照组、150μg/ml温化胶囊组及750μg/ml温化胶囊组三组,使用流式细胞仪分析温化胶囊对人肝癌细胞株Bel-7402凋亡的影响。利用倒置相差显微镜观察细胞株加药前后的形态学变化。第二部分:速率法检测温化胶囊对Bel-7402细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）水平的影响。第三部分:应用酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）的检测方法检测温化胶囊对Bel-7402细胞培养上清液中血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平的影响。第四部分:应用ELISA的检测方法检测温化胶囊对Bel-7402细胞培养上清液中转化生长因子β1（TGF-β1）水平的影响。结果:流式细胞仪检测显示:与对照组相比较,温化胶囊能够提高Bel-7402细胞的凋亡率,其作用的强度与药物的剂量呈正相关;细胞形态学观察发现,加入温化胶囊后细胞质内出现了空泡样结构,细胞变小、或变细变长,或变圆,部分细胞脱落漂浮于培养基中,且随着药物作用时间的延长和药物浓度的增加,空泡样结构的数量亦呈进行性增加,并可融合成大泡,其漂浮细胞也增多;对LDH细胞因子的检测表明,温化胶囊高剂量组（750μg/ml）的LDH水平明显高于对照组（P＜0.05）,但温化胶囊高剂量组（750μg/ml）和温化胶囊低剂量组（150μg/ml）、温化胶囊低剂量组（150μg/ml）和对照组相比较,二者均没有显著性差异（P＞0.05）,本次研究中温化胶囊高剂量组（750μg/ml）的LDH水平明显高于对照组,有统计学差异,反应出高剂量组的Bel-7402细胞细胞膜的受损程度高于对照组,即温化胶囊对此种细胞株的细胞毒性作用强于对照组。应用ELISA方法检测VEGF和TGF-β1两因子的水平,温化胶囊高剂量组（750μg/ml）与对照组相比,TGF-β1上调,有显著性差异（P＜0.05）,温化胶囊低剂量组（150μg/ml）与对照组比较未见显著性差异（P＞0.05）,而温化胶囊对VEGF的作用不明显,本次实验中对照组、温化胶囊低剂量组（150μg/ml）与温化胶囊高剂量组（750μg/ml）三组相比较,P＞0.05,均无显著性差异。结论:温化胶囊立足《内经》有关肿瘤的论述,通过温阳散寒与化痰活血从而发挥温阳化气散结的作用。全方仅五味药,主要药物为附子、贝母。通过温化胶囊对肝癌细胞系Bel-7402细胞的作用观察,我们发现温化胶囊的诱导凋亡和质膜破坏作用是肯定的。经过温化胶囊处理后细胞形态发生明显变化,流式细胞仪检测提示细胞凋亡率增加,细胞培养上清中的LDH浓度升高,上调细胞分泌的TGF-β1的表达,发挥了诱导凋亡、抑制肿瘤的作用。而对VEGF的作用不明显。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 对象和方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 综述
• 乏氧诱导因子1与肿瘤的乏氧靶向治疗
• 综述参考文献
• 致谢