论文摘要
目的:探讨环境内分泌干扰物六氯苯对PC-12细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用体外细胞培养方法,5 % CO2 37℃恒温条件下,将PC-12细胞培养于含10%灭活胎牛血清的高糖DMEM培养基中。取对数生长期PC-12细胞分别经不同浓度组（0.1、1、10、20、100、200μmol/L）六氯苯,并设立对照组（DMSO）和只含培养基的空白组,继续培养24小时后,按照CCK-8试剂盒说明书的步骤加入试剂,37度孵育1小时,多功能酶标仪（TECON）检测吸光度值。计算各浓度组细胞增殖凋亡率,数据录入SigmaPlot软件,经Hill方程曲线拟合IC50,为进一步研究建立细胞模型。对数生长期PC-12细胞,72μmol/L六氯苯锌染毒24 h后,应用Hoechst33258核染色结合荧光照相技术检测细胞核形态改变,正常细胞核表现为弥漫均匀的低强度荧光,凋亡细胞核呈浓染致密固缩状态或颗粒状荧光。培养PC-12细胞经不同浓度组（0、1、50、100μmol/L）六氯苯染毒24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,六氯苯浓度依赖性的提高PC-12细胞凋亡率。后收集细胞沉淀提取总蛋白,Western blot检测p-ERK1/2、p-PLCγ蛋白表达变化。结果:随着六氯苯浓度增加,凋亡率升高,呈剂量依赖关系;数据录入SigmaPlot软件,经Hill方程曲线拟合,IC50为72μmol/L,h系数为1.37。为进一步研究提供细胞凋亡模型;Hoechst33258染色可见细胞核膨大、染色质边集浓染等凋亡特征;Western blot检测结果发现,与对照组相比p-ERK1/2及p-PLCγ表达均降低,呈剂量依赖效用。结论:六氯苯能够诱导PC-12细胞凋亡, p-PLCγ及p-ERK1/2信号通路可能在此过程中发挥作用。第二部分、代森锰锌对PC-12细胞凋亡的影响目的:探讨环境内分泌干扰物代森锰锌对PC-12细胞凋亡的影响及其机制。方法:采用体外细胞培养方法,5 % CO2 37℃恒温条件下,将PC-12细胞培养于含10%灭活胎牛血清的高糖DMEM培养基中。0、1、10、30、60、120μmol/L代森锰锌处理组[1],每组设3组复孔,培养24 h后应用Cell Counting Kit-8 （CCK-8）试剂盒进行代森锰锌对PC-12细胞增殖和毒性分析,实验重复3次;流式细胞术FITC-AnnexinV/PI双染检测细胞凋亡率; Hoechst33258染色及倒置荧光显微镜拍摄细胞平片,观察细胞形态学改变;免疫印记法（Western blot）检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达以及ERK蛋白磷酸化水平变化,结果进行积分灰度值分析。结果:随着代森锰锌浓度增加,与对照组相比较,各浓度组晚期凋亡率升高,呈剂量依赖关系,IC50为49.95μmol/L,120μmol/L组细胞晚期凋亡率为90.46±3.94%,与对照组相比有统计学差异（P < 0.05）;Hoechst33258染色可见细胞核膨大、染色质边集浓染等凋亡特征;与对照组相比Bcl-2/Bax比值逐渐降低,p-ERK1/2表达增高, 120μmol/L组相对灰度值分别为128.04±2.51和178.40±4.04。结论:代森锰锌能够诱导PC-12细胞凋亡,ERK信号通路可能在此过程中发挥作用。
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标签：环境内分泌干扰物论文; 六氯苯论文; 细胞论文; 凋亡论文; 代森锰锌论文;