组织蛋白酶L介导Ox-LDL诱导单层HUVECs通透性增加及其机制探讨

论文摘要

【目的】观察组织蛋白酶L（cathepsin L,CATL）在氧化低密度脂蛋白（oxidized lowdensity lipoprotein, Ox-LDL）诱导单层脐静脉内皮细胞（HUVECs）通透性增加中的作用及其机制探讨。【方法】（1）用不同浓度Ox-LDL处理HUVECs24h，Transwell和荧光分光光度法检测HUVECs通透性变化；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印记技术（Western blot）分别检测HUVECs CATL、TET2、VE-cadherin、自噬和凋亡指标的mRNA及蛋白表达情况；用CATL活性检测试剂盒检测HUVECs CATL活性水平；MDC染色观测HUVECs自噬水平，Hochest染色和流式细胞术检测HUVECs凋亡水平。（2）用不同浓度CATL inhibitor预孵育HUVECs24h，再加入50mg/LOx-LDL处理24h，检测指标同前（1）。（3）用TET2siRNA转染HUVECs，Western blot检测Beclin-1、LC3、Caspase-3和VE-cadherin蛋白表达。【结果】（1）用Ox-LDL（0、25、50和75mg/L）处理HUVECs，实验结果显示：随着Ox-LDL浓度的增加，CATL mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05），但其蛋白表达及活性显著增加（P<0.01）；VE-cadherin蛋白表达减少（P<0.05），单层HUVECs通透性增加（P<0.05）。Beclin-1mRNA和蛋白表达明显增加，LC3mRNA表达差异无显著性，但LC3Ⅰ/LC3Ⅱ明显增加；MDC染色结果显示自噬囊泡染色增加；Caspase-3mRNA表达在50mg/L Ox-LDL组显著上调（P<0.001）；Ox-LDL处理组Caspase-3蛋白表达显著高于对照组（P<0.05）；Caspase-9mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）；Bcl-2mRNA表达呈Ox-LDL处理浓度依赖性降低（P<0.01）；Hochest染色和流式细胞术结果显示Ox-LDL促进HUVECs凋亡。（2）用不同浓度CATL inhibitor预孵育HUVECs24h，再加入50mg/LOx-LDL处理24h，实验结果显示：随着CATL inhibitor预处理浓度的增加，Ox-LDL诱导的单层HUVECs通透性降低（P<0.01）；VE-Cadherin表达增加（P<0.01）；Beclin-1和LC3mRNA表达差异不显著（P>0.05），Beclin-1蛋白表达及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ降低（P<0.01）；MDC染色结果显示自噬囊泡减少；Caspase-3mRNA和蛋白表达上调（P<0.05），Caspase-9mRNA表达差异无显著性（P>0.05）； Bcl-2mRNA表达增加（P<0.01）；Hoechst染色和流式细胞术结果显示CATL inhibitor上调Ox-LDL诱导的HUVECs凋亡。（3）Ox-LDL呈剂量依赖性下调TET2mRNA和蛋白表达（P<0.05），CATLinhibitor呈剂量依赖性上调Ox-LDL处理的HUVECs TET2mRNA和蛋白表达。TET2siRNA显著上调HUVECs Beclin-1蛋白表达（P<0.001）和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ（P<0.01）， TET2siRNA下调HUVECs Caspase-3蛋白表达（P<0.01）；但TET2siRNA对HUVECs VE-Cadherin蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。【结论】CATL介导Ox-LDL对血管内皮细胞自噬和凋亡的调节以及内皮细胞单层通透性的改变，TET2参与此过程。

论文目录

• 主要缩略词英文索引
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 第一部分 组织蛋白酶 L 对 Ox-LDL 诱导 HUVECs 通透性增加的影响
• 一 材料与方法
• 二 实验结果
• 三 实验结论
• 第二部分 组织蛋白酶 L 对 Ox-LDL 诱导 HUVECs 自噬和凋亡的影响
• 一 材料与方法
• 二 实验结果
• 三 实验结论
• 第三部分 TET2 在组织蛋白酶 L 参与 Ox-LDL 诱导 HUVECs 通透性增加的作用
• 一 材料与方法
• 二 实验结果
• 三 实验结论
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 硕士期间发表的论文
• 致谢
• 基金资助