论文摘要
齐口裂腹鱼是长江上游特有的亚冷水性名贵经济鱼类，市场价值和开发潜力较大。2005年12月至2006年4月，雅安、攀枝花等地多个齐口裂腹鱼网箱养殖场的齐口裂腹鱼鱼种先后出现一以背鳍一侧皮肤破裂、肌肉溃烂现象为特征的疾病，给养殖生产造成了很大的经济损失。通过细菌学常规分离鉴定方法和分子生物学方法对致病菌进行鉴定，找出了引起该病的病原；同时研究了该病原的特性和发病鱼的病理学变化，并进行了相关的药敏试验，发现该细菌对氯霉素、头孢克诺等抗生素敏感；戊二醛和新洁尔灭联用能够显著提高对该菌外杀灭效果。从自然发病的齐口裂腹鱼中分离到一株病原菌D060501。该菌株在TSA平板上生长呈边缘光滑、有光泽的圆形白色菌落，在兔血平板上培养24h形成透明的β溶血环。显微镜下为革兰氏阴性短杆菌。该菌具运动性，能发酵葡萄糖；脂酶、氧化酶和精氨酸双水解酶反应阳性；能利用葡萄糖产气，阿拉伯糖产酸；麦芽糖、氰化钾和V-P反应阳性；硫化氢、DNA酶和尿素反应阴性。应用细菌通用PCR引物，扩增出D060501菌株的16SRNA的互补DNA片段，该片段大小为1591bp。将获得的序列在RDP数据库进行在线Classifer。结果表明，该菌属于气单胞菌属的细菌，再将获得的序列与GenBank中已报道的的7株嗜水气单胞菌16SrRNA序列用DNAstar软件进行多序列比对分析和构建系统发育树。结果证实，D060501分离株与其他嗜水气单胞菌形成一个簇群，同源性高达99.1％以上。由D060501菌株的系统进化树分析可见，该菌与其他7株菌在进化上距离小于0.5，故确定该菌为嗜水气单胞菌。以D060501株通过肌肉注射、划痕浸泡和浸泡试对齐口裂腹鱼进行了人工感染，并研究了病理变化。结果表明，验检测该菌对齐口裂腹鱼的毒力，前两种方式出现与自然发病鱼相似的体表溃疡症状，并引起死亡；在无菌条件下，从人工感染发病的齐口裂腹鱼病灶周围肌肉和肝脏中分离到与D060501株形态与生化特性一致的相同的病原细菌，表明嗜水气单胞菌D060501株是齐口裂腹鱼皮肤溃烂病的病原。镜下可见病灶周边骨骼肌水肿，间隙增宽，伴有大量炎性细胞浸润，肌纤维断裂溶解成空泡状，严重的仅残存少量的肌膜。组织切片可见肾小管上皮细胞肿胀，轻微的空泡变性；由于肾小管的扩张导致肾间质区域被挤压变小，部分区域间质细胞成分明显减少；肾小球毛细血管扩张充血；肝脏细胞水肿，严重空泡变性，大量肝细胞坏死；脾脏严重出血，淋巴细胞大量减少，且可见大量含铁血黄素。对嗜水气单胞菌D060501株的药敏试验表明，氯霉素、头孢克诺、庆大霉素、红霉素、氟哌酸对此菌有较强的抑制作用，其中氯霉素的作用最强，其抑菌圈达22mm。在3ml细菌生长液中添加0.8ml的20％戊二醛能够有效杀灭细菌，而同样的条件20％戊二醛+20％新洁尔灭组只需要0.08ml，在戊二醛中添加新洁尔灭能够显著的提高药物的体外杀菌效果，其杀菌活性比单纯用戊二醛高10倍。