钙转运蛋白基因沉默联合顺铂治疗胃肠肿瘤的机制探讨

论文摘要

目的:探讨钙转运蛋白基因沉默联合顺铂治疗胃肠肿瘤的机制。方法:根据RNAi设计原理以及基因重组技术构建siRNA-CaT1表达载体,转染人胃癌细胞株BGC-823细胞中,通过MTT观察CaT1-RNAi、顺铂及二者联合作用对人胃癌细胞株BGC-823细胞增殖的抑制作用,通过RT-PCR、Westernblot观察凋亡相关基因及NF-κB的表达。结果:（1）成功地构建了针对CaT1基因的siRNA载体,转染细胞后可抑制Cat1基因表达。（2）MTT实验证明siRNA-CaT1及顺铂均能明显抑制人胃癌细胞株BGC-823细胞的增殖,二者联合作用的效果更明显。（3）siRNA-CaT1及顺铂联合作用能明显增加Bax/Bcl-2的比值及Caspase-3的表达,同时明显抑制Akt的表达。（4）siRNA-CaT1及顺铂联合作用能明显抑制IκB的表达,从而增加NFκBp65的表达。结论:在成功构建siRNA-CaT1有效表达质粒的基础上,证明siRNA-CaT1能够明显抑制人胃癌细胞株BGC-823细胞的增殖,且与顺铂具有协同作用。其机制可能与其抑制细胞存活基因Akt的表达有关,此外与其抑制IκB的表达,从而增加NFκBp65的表达,增加Bax/Bcl-2的比值、促进Caspase-3等凋亡相关基因表达有关。

论文目录

• 提要
• 引言
• 第一章 文献综述
• 第一节 钙转运蛋白的研究进展
• 一、 CaT1 蛋白的概述
• 2+与肿瘤'>二、 CaT1 蛋白及Ca²⁺与肿瘤
• 2+与细胞凋亡'>三、 CaT1 蛋白及Ca²⁺与细胞凋亡
• 第二节 细胞凋亡在肿瘤治疗中的作用
• 一、 细胞凋亡与肿瘤
• 二、 细胞凋亡的调控
• 第三节 RNAi在肿瘤治疗中的作用
• 一、 RNA i的发现
• 二、 RNAi 作用的特点
• 三、 RNA i 的设计
• 四、 RNAi 在肿瘤基因治疗中的应用
• 第二章 材料与方法
• 第一节 主要材料
• 第二节 实验方法
• 第三章 实验结果
• 一. pSH1Si-CaT1 表达载体的构建及鉴定
• 二. siRNA-CaT1 及顺铂对 BGC-823 细胞的增殖抑制作用
• 三. siRNA-CaT1 及顺铂对 BGC-823 细胞 Akt mRNA 表达的影响
• 四. siRNA-CaT1 及顺铂对 BGC-823 细胞 Bax 及 Bcl-2 表达的影响
• 五. siRNA-CaT1 及顺铂对 BGC-823 细胞 Caspase-3 蛋白表达的影响
• 六. siRNA-CaT1 及顺铂对 BGC-823 细胞 NF-κB 各亚基表达的影响
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 攻读博士学位期间发表文章
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢