两种枕大池注血法致兔脑血管痉挛模型的建立及对比观察

论文摘要

目的利用B超定位下经皮枕大池单次和两次注血技术，建立蛛网膜下腔出血（subarachnoid hemorrhage, SAH）模型；在出血后不同时间点对比观察单次注血、两次注血模型实验动物的神经功能损伤、基底动脉和基底静脉管径以及组织学变化，为建立理想的SAH后脑血管痉挛模型提供依据。方法①选取新西兰兔105只，随机分为对照组（26只）、单次注血组（39只）和两次注血组（40只），B超定位下经皮穿刺枕大池，对照组将生理盐水注入枕大池，单次和两次注血组将自体动脉血注入枕大池，造模后1天行CT扫描观察血凝块存在情况。②各组实验动物分别于造模前和造模后1、3、5、7、9、11天行神经功能评分，采用磁共振血管成像（magnetic resonance angiography, MRA）技术观测基底动脉、基底静脉管径的变化情况。③各组实验动物分别于造模前和造模后1、3、5、7、9、11天取脑，收集基底动脉、基底静脉标本，应用HE染色、免疫荧光化学单标法，观察基底动脉、基底静脉管壁内皮层和平滑肌层的形态学特征。结果1. B超定位下SAH模型的建立：对照组无动物死亡，单次注血组动物死亡率为5.13%，两次注血组为7.50%，三组动物死亡率差异无统计学意义（P﹥0.05）；造模后1天CT检查显示血液均到达蛛网膜下腔。2.行为学观察和神经功能损伤评分：单次注血组于造模后3天神经功能损伤最为明显，评分为6.05±0.89分；两次注血组于造模后5天神经功能损伤症状最为明显，评分为7.05±0.82分，其中造模后5天、7天神经功能损伤较单次注血组严重（P﹤0.05）。3.显微解剖与磁共振影像对比：显微解剖显示基底动脉走行于脑干腹侧面正中，TOF-MRA图像与显微解剖一致；大脑大静脉与直窦之间未见明显界限， SWI图像与显微解剖一致。4.基底动脉、基底静脉的MRA观察：①基底动脉MRA显示单次注血组造模后3天管径最为狭窄，为造模前管径的68.18%；两次注血组造模后5天管径最为狭窄，为造模前管径的56.72%。与单次注血组相比较，两次注血组造模后5天、7天基底动脉狭窄更加明显（P﹤0.05）。②基底静脉MRA显示单次注血组造模后5天管径最为狭窄，为造模前管径的68.42%；两次注血组造模后5天管径最为狭窄，为造模前管径的55.00%。与单次注血组相比较，两次注血组造模后3天、5天、7天狭窄更加明显（P﹤0.05）。5.一般组织学观察：①基底动脉HE染色显示单次注血组在造模后3天、5天管腔狭窄，管壁可见较为明显的内皮层皱折和平滑肌层增厚，3天尤为明显；两次注血组在造模后3天、5天、7天皆出现明显管腔狭窄，管壁有明显的内皮层皱折和平滑肌层增厚，5天尤为明显。②基底静脉HE染色显示单次注血组、两次注血组在造模后5天管腔均最为狭窄，管壁未见内膜皱折和中膜增厚。6.免疫荧光化学观察：①基底动脉vWF标记显示单次注血组基底动脉在造模后3、5天有较为明显的内皮皱折，3天尤为明显；两次注血组在造模后3、5、7天皆出现明显的内皮皱折，5天尤为明显。基底动脉a-SMA标记显示单次注血组基底动脉管壁a-SMA平均光密度在造模后3、5、7天较造模前增高；两次注血组在造模后3、5、7天出现更为明显的增高。②基底静脉vWF标记显示单次注血组、两次注血组的基底静脉造模前后管壁vWF表达均为阴性结果；基底静脉a-SMA标记显示单次注血组、两次注血组的基底静脉造模前后管壁a-SMA表达均为阴性结果。结论①B超定位下枕大池穿刺注血法死亡率低、成功率高，是建立SAH模型的理想手段。②与一次注血法相比较，两次注血法引起的脑血管痉挛程度更强烈，时间更持久，是一种建立SAH后脑血管痉挛模型的良好方法。③MRA和组织学均可见SAH后基底静脉管径变细，提示SAH后基底静脉可能出现痉挛。

论文目录

• 英文缩略词
• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验动物分组
• 2.2 兔SAH动物模型的制作
• 2.3 兔SAH动物模型的CT观察
• 2.4 动物行为学观察与神经功能评分
• 2.5 兔脑血管MRA的采集与观测
• 2.6 兔脑血管显微解剖学观察
• 2.7 兔脑血管一般组织学观察
• 2.8 兔脑血管免疫荧光化学单标观察
• 2.9 统计学处理
• 3 结果
• 3.1 B超定位下SAH模型的建立
• 3.2 动物行为学观察及神经功能评分
• 3.3 兔脑血管的显微解剖学与MRA对照观察
• 3.4 基底动脉和基底静脉的MRA观测结果
• 3.5 基底动脉和基底静脉的一般组织学结果
• 3.6 基底动脉和基底静脉免疫荧光化学单标vWF和a-SMA结果
• 4 讨论
• 4.1 B超定位下枕大池穿刺注血法建立兔SAH模型
• 4.2 兔脑血管显微解剖与磁共振影像对照观察的意义
• 4.3 枕大池单次注血法与两次注血法建立的SAH后脑血管痉挛的比较
• 5 结论
• 6 展望
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 综述
• 参考文献