水蛭溶栓注射剂的研制

论文摘要

本文采用生物酶提取法提取水蛭,在单因素考察的基础上,参考相关研究文献,以TAME效价为指标,利用正交实验设计优选了水蛭中活血化瘀有效部位的提取工艺,运用膜分离技术、葡聚糖凝胶分离技术等手段,对水蛭的有效部位进行纯化,将水蛭抗凝活性部位制成注射剂,并对其进行了初步毒理学及药效学研究;通过色谱法、考马斯亮蓝法、TAME效价测定法初步建立了制剂质量标准。初步药效学实验证明,本文工艺制备的水蛭溶栓注射剂,与重组水蛭素的药理活性相似,是作用很强的凝血酶特异性抑制剂,具有抗凝、抗血栓、降低血粘等作用,可防止实验性血栓的形成,对具有高凝状态的疾病疗效良好,是一种很有前途的抗凝抗栓药物。

论文目录

• 提要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 研究动态综述
• 1 中药水蛭的研究进展
• 1.1 化学成分方面
• 1.2 药理作用方面
• 1.3 制剂研究方面
• 2 生物酶提取法
• 3 生物大分子分离纯化方法
• 3.1 综述
• 3.2 中性盐沉淀
• 3.3 超滤
• 4 冷冻干燥
• 5 小分子肽的近年研究
• 5.1 肽类药物的口服吸收
• 5.2 国外小分子肽研究动态
• 5.3 小结
• 第二部分 水蛭酶提取工艺的研究
• 1 试验材料与仪器
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验仪器
• 2 实验内容
• 2.1 提取工艺考察
• 3 小结
• 第三部分 水蛭有效部位纯化工艺研究
• 1 试药和仪器
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器
• 2 检测方法
• 2.1 TAME 效价测定法
• 2.2 超滤膜透过速率的测定
• 3 精制方法的选择
• 3.1 有机溶剂萃取
• 3.2 微孔滤膜过滤
• 3.3 超滤
• 3.4 超滤工艺设计
• 3.5 药效分布
• 4 盐析
• 5 脱盐
• 6 SEPHADEX G-25 葡聚糖凝胶柱过滤层析纯化水蛭活血化瘀低肽
• 6.1 NA2HP04—NAH2P04 缓冲液的配制
• 6.2 凝胶过滤柱的选择
• 6.3 填料的选择
• 6.4 凝胶的溶胀处理
• 6.5 装柱
• 6.6 样品上柱
• 6.7 洗脱及主分的收集
• 6.8 分析方法
• 7 冷冻干燥
• 8 小结
• 第四部分 水蛭溶栓注射剂的制剂工艺
• 1 工艺流程
• 2 工艺流程图
• 3 工艺验证性试验
• 第五部分 有效部位结构初步研究
• 1 毛细管电泳法测定2 号峰光谱
• 2 低肽结构研究
• 第六部分 毒理学考察
• 1 急性毒性实验
• 2 溶血试验
• 3 血管刺激性检查
• 4 过敏试验
• 5 热原检测试验
• 第七部分 药效学研究
• 1 对小鼠全血凝血时间影响
• 2 对小鼠断尾出血时间的影响
• 3 体外血栓测定
• 3.1 材料
• 3.2 实验方法
• 4 结果
• 第八部分 质量标准的研究
• 1 定性鉴别
• 2 含量测定方法学的建立
• 2.1 原理
• 2.2 操作步骤
• 2.3 精密度试验
• 2.4 稳定性试验
• 2.5 加样回收实验
• 3 TAME 效价测定
• 3.1 试验材料与试剂
• 3.2 试验仪器
• 3.3 标准曲线的绘制
• 3.4 供试品的 TAME 效价测定
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 查新报告