论文题目: 蛋白质酪氨酸磷酸酶PRL-3与结肠癌的转移
论文类型: 博士论文
论文专业: 生物化学与分子生物学
作者: 李招发
导师: 李青山,付学奇
关键词: 结肠癌,转移
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTPs)是细胞信号传导中最重要的酶之一,它们和人的病理生理现象密切相关。最近研究表明,蛋白质酪氨酸磷酸酶PRL-3(肝再生磷酸酶-3)与结肠癌的转移密切相关,PRL-3、PRL-1 和PRL-2能促进细胞的生长、分化和癌变。本论文在研究PRL-3 的同时,也研究PRL-2 和PRL-1。本研究表达和纯化了PRLs,PRLs 包括PRL-1、PRL-2、PRL-3 和CePRL(CePRL 是线虫体内唯一的PRL 蛋白酪氨酸磷酸酶)。用pNPP 作为底物,对PRLs 进行了酶学表征。研究表明:PRLs 具有米氏酶特征,离子强度、金属离子和PTPs(蛋白酪氨酸磷酸酶)抑制剂对PRLs 的影响与其它PTPs 相同。PRLs 的最适pH 值为7.7,而其它PTPs 最适pH 值为5.0。利用Westen blotting技术分析了结肠癌细胞SW480和SW620中PRLs的表达,并利用免疫组化技术分析正常结肠组织、结肠癌原位组织和淋巴节转移中PRL-3 的表达与定位。利用基因操作技术对PRLs 基因进行C104S 失活突变,转染结肠癌细胞SW480 和SW620。研究了PRLs 对SW480 和SW620 细胞扩散、粘附和增殖的影响。实验表明:PRLs 具有促进SW480 和SW620 细胞的扩散、粘附和增殖的作用。最后研究了大蒜提取液对SW480 和SW620 细胞粘附、扩散和增殖的影响。实验证明:大蒜提取液能抑制SW480 和SW620 结肠癌细胞的扩散和增殖,为进一步研究大蒜防癌和抗癌的机理提供了理论依据。
论文目录:
第一章 前言
第一节 蛋白质酪氨酸磷酸化概述
1 蛋白质酪氨酸磷酸化的意义
2 蛋白质酪氨酸磷酸酶(PTP)
2.1 PTP 的发现阶段
2.2 PTP 家族及其结构特点
2.3 PTP 与疾病的关系
2.4 PTP 作为治疗靶点的前景
第二节 结肠癌概述
1 结肠癌发病的诱因和症状
2 与结肠癌转移相关的基因和蛋白质
2.1 IV 型胶原与结肠癌
2.2 CD44 与结肠癌
2.3 Smad4 与结肠癌
2.4 MADR2 和 DCC 与结肠癌
2.5 PTEN
2.6 PRL-3 与结肠癌
第三节 酪氨酸磷酸酶 PRL-3 的概述
1 PRL-3 的发现
2 PRLs 家族及其结构特点
3 PRL-3 与结肠癌转移的关系
4 PRL-3 作为治疗靶点的前景
第四节 大蒜素
1 近代研究发现大蒜有六大保健功效
2 现代研究证实大蒜的医疗活性主要成分
3 大蒜抑制肿瘤作用
4 大蒜防治肿瘤机理
第五节 本论文的设想、研究目的和理论意义
1 本论文的设想
2 研究目的和理论意义
参考文献
第二章 PRLs 的分子克隆、表达、纯化和表征
第一节 PRLs 的分子克隆
1 实验材料
2 实验方法
2.1 PCR 克隆PRLs cDNA
2.2 PRLs cDNA 回收
2.3 PRLs cDNA 与pBluescript II KS 质粒连接得到pKS-PRLs
2.4 用氯化钙制备和转化大肠杆菌(DH5a)感受态细胞
2.5 提取pKS-PRLs 质粒
2.6 构建pGex-2T-PRLs 质粒
3 结果与讨论
第二节 PRLs 的表达和纯化
1 实验材料
2 实验方法
2.1 重组工程菌的培养和PRLs 的纯化
2.2 蛋白浓度测定
2.3 酶活力分析
2.4 纯度鉴定
3 结果与讨论
第三节 PRLs 的表征
1 实验材料
2 实验方法
2.1 温度对PRLs 酶活力的影响试验
2.2 pH 对 PRLs 酶活力的影响试验
2.3 离子强度对PRLs 酶活力的影响试验
2.4 PRLs 酶动力学常数的表征
2.5 不同金属阳离子对PRLs 酶的影响
3 结果与讨论
本章小结
参考文献
第三章 PRLs 多克隆抗体的制备和结肠癌细胞、结肠癌组织与正常结肠组织中 PRLs 表达的分析
第一节 制备 PRLs 多克隆抗体
1 实验材料
2 实验方法
2.1 PRLs 多克隆抗体的制备
2.2 PRLs 多克隆抗体的纯化
2.3 CLEIA(化学发光免疫法)检测 PRLs 抗体效价
3 结果与讨论
第二节 分析结肠癌细胞、组织和正常结肠组织中的PRLs 的表达
1 实验材料
2 实验方法
2.1 使用纯化的抗 PRLs 的多克隆抗体,应用 Western blotting 技术分析结肠癌细胞SW480 和SW620 中的PRLs 的表达
2.2 使用纯化的抗 PRLs 的多克隆抗体,应用免疫组化技术分析结肠癌组织中的PRLs 酶的表达和在结肠组织中的定位
3 结果与讨论
本章小结
参考文献
第四章 PRLs 对结肠癌细胞扩散、粘附和增殖的影响
第一节 PRLs 的分子克隆、细胞培养和转染
1 实验材料
2 实验方法
2.1 用PCR 技术定点突变制备pKS-PRLsm(C1045)
2.2 回收pKS-PRLsm
2.3 用BamHI
2.4 转染和筛选高表达PRLs 和PRLsm 的SW480 和SW620 细胞株
2.5 使用纯化的抗PRLs 的多克隆抗体,应用Western blotting 技术分析转染后SW480 和SW-620 中的PRLs 酶的表达
3 结果与讨论
第二节 转染PRLs 对SW480 和 SW620 细胞的扩散、粘附和增殖的影响
1 实验材料
2 实验方法
2.1 转染PRLs 的结肠癌细胞SW480 和SW620 的培养
2.2 PRLs 对SW480 和SW620 细胞扩散影响的试验
2.3 PRLs 对SW480 和SW620 细胞粘附影响的试验
2.4 PRLs 对SW480 和SW620 细胞增殖影响的试验
3 结果与讨论
本章小结
参考文献
第五章 大蒜提取液抑制人结肠癌细胞SW480 和SW620 的增殖和扩散
1 实验材料
2 实验方法
2.1 大蒜提取液对SW480 和SW620 细胞扩散影响的试验
2.2 大蒜提取液对SW480 和SW620 细胞粘附影响的试验
2.3 大蒜提取液对 SW480 和 SW620 细胞增殖影响的试验
3 结果与讨论
本章小结
参考文献
第六章 总结
攻博期间发表的学术论文及其他成果
中文摘要
英文摘要
致谢
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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