论文摘要
脑血管病是临床的常见病,其发病率高、致残率高、死亡率高,严重危害人类健康,其中,缺血性脑血管病的发病占70 %,多见于60岁以上的老年患者。随着我国人口老龄化步伐的加快,脑血管疾病带来的经济和社会负担严重影响着老年人口的健康状况和生活质量,因此,寻求高效低毒的药物已成为实验研究的重点。缺血性脑血管病包括脑梗塞、脑血栓形成和脑血管痉挛,一旦脑缺血超过6 min,由于能量的耗竭,信号传导发生异常,即可引发线粒体功能障碍,从而导致大脑高级机能进行性的不可逆性的全面损伤。脑缺血再恢复血流供应时,器官组织的细胞功能、代谢障碍及结构破坏不但没有得到恢复反而加重的现象,称为再灌注损伤。在前期研究的基础上,本实验复制急性脑缺血再灌注模型,观察丹酚酸B对脑缺血再灌注神经元自由基和凋亡调控蛋白的影响,探讨其作用机制,为丹酚酸B治疗缺血性脑病提供科学依据。实验分两部分第一部分:丹酚酸B对脑缺血再灌注小鼠自由基的影响实验分为四组:假手术组、模型组、丹酚酸B组和尼莫地平组。选用健康NIH小鼠,体重25±3 g。采用夹闭双侧颈总动脉的方法建立小鼠脑缺血再灌注模型。术前30 min给药,模型组给予等体积生理盐水。各组在术后24 h取脑皮层组织,分别测定NOS、SOD、MDA和T-AOC,观察丹酚酸B对脑缺血再灌注小鼠大脑皮层自由基的影响。实验结果:1.丹酚酸B对脑缺血再灌注小鼠脑组织SOD、MDA和T-AOC的影响模型组与假手术组相比MDA含量增加（P﹤0.05）,SOD活性明显降低（P﹤0.01）,而丹酚酸B和尼莫地平能不同程度的减少MDA生成,提高SOD活性和总抗氧化能力,与模型组相比,有显著性差异（P﹤0.05 0.01）。2.丹酚酸B对脑缺血再灌注小鼠脑组织NOS的影响模型组NOS活性显著高于假手术组（P﹤0.01）,丹酚酸B和尼莫地平能抑制NOS的活性,与模型组相比有显著性差异（P﹤0.01）。第二部分:丹酚酸B对脑缺血再灌注小鼠Bcl-2和Bax的影响实验分组及模型复制:同第一部分。常规HE染色,计数海马CA1区神经元及病理形态观察;免疫组化观察皮层及海马神经元Bcl-2和Bax蛋白表达的变化。实验结果:1形态学观察光镜下观察小鼠海马CA1区锥体细胞。假手术组:神经元形态及排列正常,神经纤维走行清晰;模型组:神经元数量减少,细胞内及细胞外略有水肿,神经纤维消失;丹酚酸B组和尼莫地平组:神经元水肿减轻,神经纤维较正常,形态接近正常组。2丹酚酸B对海马CA1区细胞数的影响与假手术组相比,模型组小鼠海马CA1区细胞数低于假手术组（P﹤0.05）;与模型组相比,丹酚酸B和尼莫地平能抑制再灌注损伤引起的细胞数减少（P﹤0.050.01）。3丹酚酸B对海马CA1区Bax蛋白表达的影响假手术组:阳性颗粒表达不明显;模型组:阳性颗粒广泛分布;丹酚酸B组:阳性颗粒接近正常组;尼莫地平组:阳性颗粒明显减少。4丹酚酸B对海马CA1区Bcl-2蛋白表达的影响假手术组:棕黄色阳性颗粒均匀分布在细胞核周围;模型组:阳性颗粒弥散,表达较少;丹酚酸B组:棕黄色颗粒成弥漫分布;尼莫地平组:部分神经元呈强阳性表达。5丹酚酸B对海马CA1区Bcl-2和Bax蛋白表达的图像分析模型组Bax蛋白表达显著高于假手术组（P﹤0.01）,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax的比值明显低于假手术组。分别用丹酚酸B、尼莫地平治疗能增加Bcl-2和抑制Bax蛋白的表达,与模型组比较有显著性差异（P﹤0.050.01）。6丹酚酸B对皮层Bax蛋白表达的影响假手术组:阳性颗粒表达少,染色较浅;模型组:阳性颗粒广泛分布,呈深棕黄色;丹酚酸B组:少数神经细胞有浅色阳性颗粒;尼莫地平组:少数神经细胞有棕黄色颗粒。7丹酚酸B对皮层Bcl-2蛋白表达的影响假手术组:神经元有广泛的阳性颗粒表达;模型组:仅有部分细胞有表达;丹酚酸B组:阳性颗粒表达较多;尼莫地平组:阳性颗粒表达较多,部分神经细胞呈深棕黄色。8丹酚酸B对皮层Bcl-2和Bax蛋白表达的图像分析模型组Bax蛋白表达明显高于假手术组（P﹤0.01）,Bcl-2蛋白表达和Bcl-2/Bax的比值明显低于假手术组（P﹤0.01）。丹酚酸B和尼莫地平能不同程度的上调Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,提高二者的比值,与模型组比较有显著性差异（P﹤0.050.01）。结论:丹酚酸B具有保护脑缺血再灌注神经元的作用,其机制可能是:丹酚酸B通过提高SOD活性,减少MDA生成,同时抑制iNOS生成大量NO,以提高机体总抗氧化能力,并通过调节凋亡调控因子,减少神经细胞的凋亡,起到保护神经元的作用。
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