益骨胶囊含药血清对共育体系中破骨细胞活性和凋亡的影响

论文摘要

目的:研究益骨胶囊含药血清对成骨细胞-破骨细胞共育体系中破骨细胞活性、破骨细胞凋亡以及由成骨细胞表达的对破骨细胞活性和凋亡有重要调节作用的OPGmRNA的影响,从不同角度探讨益骨胶囊防治骨质疏松症的作用机制。 方法: 1.运用琼脂糖凝胶和孔径为0.45μm微孔滤膜建立平面式成骨细胞-破骨细胞共育体系。 2.将10月龄SD雌性大鼠分为益骨胶囊灌胃组（高、中、低剂量）和生理盐水对照组,制备含药血清和对照血清。 3.用MTT法检测各剂量组不同浓度含药血清在共育体系中对成骨细胞增殖的最佳量效关系,并以此为基础进行以下的研究。 4.运用甲苯胺蓝染色法观察含药血清对成骨细胞-破骨细胞共育体系中OC形成骨吸收陷窝的影响。 5.运用重氮盐法检测含药血清对成骨细胞.破骨细胞共育体系中OC分泌抗酒石酸酸性磷酸酶（TRCAP）的影响。 6.倒置相差显微镜下观察和荧光显微镜下观察含药血清对共育体系中破骨细胞存活和破骨细胞凋亡的影响。 7.运用FQ-PCR法检测含药血清对成骨细胞-破骨细胞共育体系中OB分泌OPGmRNA的影响。 结果: 1.经考马斯亮蓝法检测蛋白质弥散情况,显示,在8小时内,蛋白质可以从OB培养室经过隔膜弥散到OC培养室,表明平面式共育体系的建立是成功的。 2.含药血清对OB的增殖呈一定的量效关系,其中高剂量组25%和30%浓度对共育体系中OB的增殖有较明显的促进作用,与其他各剂量组比较有显著差异（P<0.01）。 3.含药血清共育组在成骨细胞-破骨细胞共育体系中所形成骨吸收陷窝的数目明显低于空白血清共育组,差异在统计学上有显著意义（P<0.01）。

论文目录

• 主要缩略语中英文对照表
• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1. 成骨细胞对破骨细胞活性的影响
• 1.1 成骨细胞与破骨细胞的祸联及动态平衡
• 1.2 破骨细胞内生物分子的活动与变化及影响因素
• 1.3 成骨细胞对破骨细胞活性的调节
• 2. 成骨细胞对破骨细胞凋亡的影响
• 2.1 破骨细胞凋亡的表现
• 2.2 破骨细胞凋亡对骨吸收的影响
• 2.3 成骨细胞对破骨细胞凋亡的调节
• 3. 成骨细胞-破骨细胞共育体系的研究
• 3.1 直接接触方式
• 3.2 间接接触方式
• 4. 益骨胶囊防治骨质疏松症的研究
• 5. 本实验研究的思路和方法
• 实验一 共育体系的建立及益骨胶囊含药血清对成骨细胞增殖的量效关系
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 2.1 主要试剂配制方法
• 2.2 成骨细胞的分离及鉴定
• 2.3 破骨细胞的分离及鉴定
• 2.4 成骨细胞-破骨细胞平面式共育体系的建立
• 2.5 两组血清的对成骨细胞增殖的量效关系
• 3. 实验结果
• 3.1 成骨细胞鉴定
• 3.2 破骨细胞鉴定
• 3.3 成骨细胞-破骨细胞共育体系的建立
• 3.4 含药血清在共育体系中对成骨细胞增殖的量效关系
• 4. 实验讨论
• 4.1 平面式成骨细胞-破骨细胞共育体系的建立及应用
• 4.2 中药血清药理学方法探讨
• 4.3 益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞增殖的量效关系
• 5. 实验小结
• 实验二 益骨胶囊含药血清对共育体系中破骨细胞活性的影响
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 2.1 主要试剂配制方法
• 2.2 成骨细胞的分离及鉴定
• 2.3 破骨细胞的分离及鉴定
• 2.4 成骨细胞-破骨细胞共育体系的建立
• 2.5 血清的制备
• 2.6 两组血清对共育体系中破骨细胞活性的影响
• 3. 实验结果
• 3.1 二组血清对共育体系中TRACP的影响
• 3.2 两组血清对共育体系中骨吸收陷窝数的影响
• 4. 实验讨论
• 4.1 共育体系中破骨细胞TRACP的检测和意义
• 4.2 共育体系中破骨细胞骨吸收陷窝的检测和意义
• 5. 实验小结
• 实验三 益骨胶囊含药血清对共育体系中破骨细胞凋亡的影响
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 2.1 主要试剂配置方法
• 2.2 成骨细胞的分离及鉴定
• 2.3 破骨细胞的分离及鉴定
• 2.4 成骨细胞-破骨细胞共育体系的建立
• 2.5 血清的制备
• 2.6 两组血清OC凋亡情况
• 3. 实验结果
• 3.1 光镜观察
• 3.2 倒置荧光显微镜观察
• 3.3 两组血清对共育体系中OC存活数的影响
• 3.4 两组血清对破骨细胞凋亡数的影响
• 4. 实验讨论
• 4.1 OC凋亡检测方法的选择
• 4.2 两组血清对共育体系中OC凋亡数的影响
• 5. 实验小结
• 实验四 益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞表达OPGmRNA的影响
• 1. 实验材料
• 2. 实验方法
• 2.1 主要试剂配置方法
• 2.2 成骨细胞的分离及鉴定
• 2.3 破骨细胞的分离及鉴定
• 2.4 成骨细胞-破骨细胞共育体系的建立
• 2.5 血清的制备
• 2.6 FQ-PCR法检测两组血清OPGmRNA的表达
• 3. 实验结果
• 3.1 解链曲线
• 3.2 解链曲线分析
• 3.3 测定的荧光定量阳性标准品梯度扩增曲线
• 3.4 测定的荧光定量阳性标准曲线分析
• 3.5 两组血清对共育体系中成骨细胞表达OPGmRNA的影响
• 4. 讨论
• 4.1 OPG对破骨细胞活性和凋亡的调节作用
• 4.2 两组血清对共育体系中成骨细胞表达OPGmRNA的影响
• 5. 实验小结
• 结语
• 参考文献
• 附图
• 附录
• 致谢