导读:本文包含了液压冲击脑损伤论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:Nrf2,ERS,液压冲击脑损伤,姜黄素
液压冲击脑损伤论文文献综述
赵奇韬[1]（2019）在《Nrf2对液压冲击脑损伤内质网应激凋亡的调控作用及机制》一文中研究指出第一部分Nrf2基因敲除对液压冲击脑损伤内质网应激凋亡的影响及机制目的:创伤性颅脑损伤(traumatic brain injury,TBI)具有高致死和高致残的特点,已成为40岁以下青壮年致死致残的主要病因。目前大量研究证实内质网应激性神经细胞凋亡在创伤性脑损伤中扮演重要角色。本研究拟通过蛋白印迹法(Western Blot)检测Nrf2(+/+)和Nrf2(-/-)小鼠液压冲击脑损伤后Nrf2的表达及与凋亡相关的调控因子的变化,并通过流式细胞术检测神经细胞凋亡变化,探讨Nrf2基因敲除对液压冲击脑损伤抗神经细胞凋亡的影响及机制。方法:本实验采用雄性ICR种系Nrf2基因敲除纯合子Nrf2(-/-)型和野生型纯合子Nrf2(+/+)型小鼠(由河北医科大学第二医院河北省神经科学重点实验室惠赠),饲养于河北医科大学第二医院动物中心22~25°C和50~70%湿度环境下,采用近交系繁殖,12小时光/暗循环,自由进食水。实验前剪取尾尖组织提取DNA,采用PCR法进行基因鉴定,设计引物分别为:50-TGACGACTATTGAAGGCTG-30、50-CGCCTTTT CAGTAGGAGG-30和50-GGGGGACCGTAATG-GATAGG-30。选取体重30±2克雄性小鼠,Nrf2(-/-)型及Nrf2(+/+)各16只,分别随机分为2组:假手术组(sham组)8只,脑损伤组(TBI组)8只。戊巴比妥钠(100mg/kg)腹腔注射麻醉后,sham组头颅开骨窗,不行液压冲击;TBI组麻醉后头颅开骨窗,制作液压冲击脑损伤动物模型。各组在造模成功后24小时行神经功能缺损评分(m NSS),其后过度麻醉处死,冰板上快速留取脑组织,取损伤区前缘约100mg脑组织标本以干湿重法测量脑组织含水量;去除挫伤区完全破碎的脑组织,冠状切取挫伤灶范围内的的半暗带脑皮质(约2-3mm),迅速液氮冷冻,然后存储于-80℃冰箱,其后行GRP78、P-PERK、P-eif2α、ATF4、P-JNK、CHOP、GSK-3β、P-GSK-3β(Ser9)、P-GSK-3β(tyr216)、Caspase3、Caspase12、Nrf2核蛋白及胞浆蛋白Western Blot检测。同样方法制作另一组液压冲击脑损伤动物模型,处死后快速取脑,去除挫伤区完全破碎的脑组织,冠状切取挫伤灶范围内的的半暗带脑皮质,即刻行流式细胞学检测。结果:1.神经功能缺损评分(mNSS)1)TBI各组小鼠在伤后24小时出现明显神经功能缺损症状,主要表现为呼吸不规则,前/后肢的屈曲,向偏瘫侧歪斜等。Nrf2(-/-)小鼠(9.98±0.896,P<0.05)m NSS评分高于Nrf2(+/+)小鼠(9.67±0.817,P<0.05)差异有统计学意义(P<0.05)。2)TBI各组m NSS评分明显高于相应sham组,差异有统计学意义。(P<0.05)3)sham各组小鼠神经功能缺损症状不明显。2.脑组织含水量检测1)TBI各组小鼠伤后24小时,Nrf2(-/-)小鼠的脑组织含水量(82.96±0.36,P<0.05)高于Nrf2(+/+)小鼠(80.78±0.45,P<0.05),差异具有统计学意义(P<0.05)。2)sham组Nrf2(-/-)小鼠的脑组织含水量为(77.35±0.18,P<0.05),与Nrf2(+/+)小鼠的脑组织含水量(77.27±0.09,P<0.05),差异无统计学意义(P>0.05)。3)TBI各组小鼠脑组织含水量明显高于相应sham组。3.流式细胞学检测1)TBI各组小鼠伤后24小时,Nrf2(-/-)小鼠的神经细胞早期凋亡率(15.05%±0.32%,P<0.05)高于Nrf2(+/+)小鼠(11.67%±0.42%,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。2)sham组Nrf2(-/-)小鼠和Nrf2(+/+)小鼠的神经细胞早期凋亡率差异无统计学意义(P>0.05)。3)TBI各组小鼠神经细胞早期凋亡率明显高于相应sham组。4.Western Blot检测Nrf2:Nrf2(+/+)小鼠伤后24小时,TBI组的Nrf2核蛋白表达(0.56±0.07,P<0.05)高于sham组(0.191±0.03,P<0.05);而与之相反的是,TBI组Nrf2胞浆蛋白的表达(0.67±0.06,P<0.05)显着低于sham组(0.83±0.03,P<0.05),差异均有统计学意义(P<0.05)。Nrf2(-/-)小鼠各组无明显Nrf2表达。GRP78、P-PERK、ATF4、P-eif2α:TBI组小鼠伤后24小时,Nrf2(-/-)小鼠GRP78、P-PERK、ATF4、P-eif2α(0.84±0.06,0.88±0.08,0.73±0.11,0.47±0.07,P<0.05)的表达与Nrf2(+/+)小鼠(0.75±0.09,0.45±0.06,0.60±0.08,0.44±0.04,P<0.05)相比差异有统计学意义(P<0.05)。Nrf2(-/-)小鼠TBI组GRP78、P-PERK、ATF4、P-eif2α蛋白表达高于sham组(0.48±0.06,0.36±0.04,0.50±0.03,0.18±0.02,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05);而Nrf2(+/+)小鼠TBI组GRP78、P-PERK、ATF4、P-eif2α蛋白表达也高于sham组(0.33±0.03,0.14±0.02,0.40±0.04,0.15±0.02,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。P-JNK:TBI组小鼠伤后24小时,P-JNK的表达情况是:Nrf2(-/-)小鼠(0.74±0.05,P<0.05)与Nrf2(+/+)小鼠(0.74±0.03,P<0.05)相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Nrf2(-/-)小鼠TBI组P-JNK蛋白表达高于sham组(0.40±0.03,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05);Nrf2(+/+)小鼠TBI组P-JNK蛋白表达也高于sham组(0.40±0.02,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。CHOP:TBI组小鼠伤后24小时,CHOP的表达情况是:Nrf2(-/-)小鼠(0.80±0.06,P<0.05)高于Nrf2(+/+)小鼠(0.71±0.05,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。Nrf2(-/-)小鼠TBI组CHOP蛋白表达高于sham组(0.40±0.03,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05);Nrf2(+/+)小鼠TBI组CHOP蛋白表达也高于sham组(0.26±0.02,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。GSK-3β:GSK-3β在各组的表达均无明显差别(P>0.05)P-GSK-3β(ser9):TBI组小鼠伤后24小时,P-GSK-3β(ser9)的表达情况是:Nrf2(-/-)小鼠(0.27±0.11,P<0.05)与Nrf2(+/+)小鼠(0.26±0.02,P<0.05),差异无统计学意义(P>0.05)。Nrf2(-/-)小鼠TBI组P-GSK-3β(ser9)蛋白表达低于sham组(0.46±0.06,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05);Nrf2(+/+)小鼠TBI组P-GSK-3β(ser9)蛋白表达也低于sham组(0.47±0.10,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。P-GSK-3β(tyr216):TBI组小鼠伤后24小时,P-GSK-3β(tyr216)的表达情况是:Nrf2(-/-)小鼠(0.56±0.07,P<0.05)与Nrf2(+/+)小鼠(0.55±0.09,P<0.05),差异无统计学意义(P>0.05)。Nrf2(-/-)小鼠TBI组P-GSK-3β(tyr216)蛋白表达高于sham组(0.31±0.05,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05);Nrf2(+/+)小鼠TBI组P-GSK-3β(tyr216)蛋白表达也高于sham组(0.30±0.07,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase3、Caspase12:TBI组小鼠伤后24小时,Nrf2(-/-)小鼠Caspase3及Caspase12的表达(0.64±0.03,0.75±0.08,P<0.05)均高于Nrf2(+/+)小鼠(0.50±0.04,0.68±0.06,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。Nrf2(-/-)小鼠TBI组Caspase3及Caspase12蛋白表达高于sham组(0.35±0.02,0.39±0.03,P<0.05);Nrf2(+/+)小鼠TBI组Caspase3及Caspase12蛋白表达也高于sham组(0.33±0.03,0.27±0.02,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.液压冲击脑损伤后,内质网应激及凋亡通路标志性蛋白明显升高,神经细胞凋亡明显增多,小鼠神经功能缺损明显加重,说明液压冲击脑损伤后出现内质网应激,并诱导神经细胞凋亡。2.液压冲击脑损伤激活了Nrf2通路,Nrf2是机体防御外界损伤的反应之一;利用Nrf2基因敲除小鼠建立液压冲击脑损伤模型,模拟阻断Nrf2通路后,发现Nrf2基因敲除小鼠液压冲击脑损伤后神经细胞凋亡明显较野生型小鼠严重,说明Nrf2具有抑制内质网应激性神经细胞凋亡的作用。3.对比野生型小鼠及Nrf2基因敲除小鼠在内质网应激标志性蛋白、CHOP及JNK、Caspase12、GSK-3β凋亡通路标志性蛋白表达上的差异,发现Nrf2可通过抑制内质网应激关键蛋白的表达及CHOP、caspase12凋亡通路进而抑制内质网应激性神经细胞凋亡,但与JNK、GSK-3β凋亡通路无明显关系。4.液压冲击脑损伤后,P-GSK-3β(ser9)表达明显降低,而P-GSK-3β(tyr216)的表达出现升高,说明液压冲击脑损伤后GSK-3β通路被激活。第二部分Nrf2通路激活对液压冲击脑损伤内质网应激凋亡的影响及机制目的:探讨Nrf2通路被姜黄素激活后对大鼠液压冲击脑损伤后内质网应激诱导的神经细胞凋亡的影响并探讨其机制方法:健康成年SD大鼠24只(购于河北医科大学动物中心),体重300±50克,随机分为3组:假手术组(sham组)、脑损伤组(TBI+vehicle组)、姜黄素干预组(TBI+Curcumin组),每组8只。戊巴比妥钠(100mg/kg)腹腔注射麻醉后,sham组头颅开骨窗,不行液压冲击;TBI+vehicle组麻醉后头颅开骨窗,制作液压冲击脑损伤动物模型,麻醉清醒后立即给予腹腔注射生理盐水1ml。TBI+Curcumin组于麻醉清醒后立即给予姜黄素腹腔注射,浓度为100mg/kg。各组在造模成功后24小时行神经功能缺损评分(m NSS),其后过度麻醉处死,冰板上快速留取脑组织,取损伤区前缘约100mg脑组织标本以干湿重法测量脑组织含水量;去除挫伤区完全破碎的脑组织,冠状切取挫伤灶范围内的的半暗带脑皮质(约2-3mm),迅速液氮冷冻,然后存储于-80℃冰箱,其后行GRP78、P-PERK、P-eif2α、ATF4、P-JNK、CHOP、GSK-3β、P-GSK-3β(Ser9)、P-GSK-3β(tyr216)、Caspase3、Caspase12、Nrf2核蛋白及胞浆蛋白Western Blot检测。同样方法制作另一组液压冲击脑损伤动物模型,处死后快速取脑,去除挫伤区完全破碎的脑组织,冠状切取挫伤灶范围内的的半暗带脑皮质,即刻行流式细胞学检测。结果:1.神经功能评分与TBI+vehicle组相比,TBI+Curcumin组神经功能评分明显降低(10.763±1.357,8.073±1.263),差异有统计学意义(P<0.05)。2.脑组织含水量测定与TBI+vehicle组比较,TBI+Curcumin组脑组织含水量明显降低(82.143±0.304,78.204±0.318),差异有统计学意义(P<0.05)。3.流式细胞学检测神经细胞凋亡TBI+Curcumin组(7.7%±1.3%,P<0.05)大鼠神经细胞凋亡程度明显低于TBI+vehicle组(13.6%±2.2%,P<0.05)。差异有统计学意义(P<0.05)4.Western Blot检测Nrf2:伤后24小时,TBI+vehicle组Nrf2核蛋白(0.58±0.05,P<0.05)表达明显高于sham组(0.27±0.06,P<0.05)但低于TBI+Curcumin(0.79±0.03,P<0.05)组;而胞浆蛋白(0.63±0.07,P<0.05)的表达显着低于sham组(0.89±0.09,P<0.05),但高于TBI+Curcumin组(0.49±0.07,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。GRP78、P-PERK、ATF4、P-eif2α:伤后24小时,TBI+Curcumin组GRP78、P-PERK、ATF4、P-eif2α蛋白(0.18±0.04,0.56±0.07,0.22±0.03,0.29±0.02,P<0.05)表达低于TBI+vehicle组(0.27±0.03,0.75±0.05,0.48±0.04,0.39±0.03,P<0.05),但高于sham组(0.15±0.02,0.22±0.03,0.18±0.03,0.11±0.01,P<0.05),差异均有统计学意义(P<0.05)。P-JNK:伤后24小时,TBI+Curcumin组P-JNK蛋白(0.61±0.03,P<0.05)表达与TBI+vehicle组(0.61±0.05,P<0.05)比较差异无统计学意义(P>0.05),但二者均高于sham组(0.38±0.02,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。CHOP:伤后24小时,TBI+Curcumin组CHOP蛋白(0.40±0.02,P<0.05)表达低于TBI+vehicle组(0.43±0.04,P<0.05),但二者均高于sham组(0.27±0.02,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。GSK-3β:GSK-3β在各组的表达均无明显差别(P>0.05)。P-GSK-3β(ser9):伤后24小时,TBI+vehicle组P-GSK-3β(ser9)蛋白(0.27±0.06,P<0.05)表达明显低于sham组(0.58±0.09,P<0.05);TBI+Curcumin组P-GSK-3β(ser9)蛋白(0.39±0.06,P<0.05)表达高于TBI+vehicle组,但仍低于sham组。以上差异均有统计学意义(P<0.05)。P-GSK-3β(tyr216):伤后24小时,TBI+vehicle组P-GSK-3β(tyr216)蛋白(0.58±0.07,P<0.05)表达明显高于sham组(0.34±0.03,P<0.05);TBI+Curcumin组P-GSK-3β(tyr216)蛋白表达(0.45±0.06,P<0.05)低于TBI+vehicle组,但仍高于sham组。差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase3、Caspase12:伤后24小时,TBI+Curcumin组caspase3及caspase12蛋白(0.66±0.05,0.49±0.02,P<0.05)表达明显高于sham组(0.16±0.02,0.27±0.03,P<0.05)但低于TBI+vehicle组(0.84±0.07,0.63±0.06,P<0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:1.通过建立大鼠液压冲击脑损伤模型,姜黄素干预治疗后,Nrf2通路被激活,而相应的内质网应激性凋亡相关蛋白csapase12表达明显降低,说明Nrf2激活后对内质网应激性神经细胞凋亡具有更显着的抑制作用。该作用是通过抑制内质网应激关键蛋白的表达及CHOP、caspase12凋亡通路实现的,与JNK通路无明显关系。2.姜黄素可以促进GSK-3βser9的位点的磷酸化,而对tyr216位点磷酸化有抑制作用,进而抑制GSK-3β,这可能也是姜黄素脑保护作用的机制之一。(本文来源于《河北医科大学》期刊2019-05-01）
高梦颖,何永昌,孙国柱,徐伟,武利伟[2]（2016）在《大鼠液压冲击脑损伤Nrf2、HO-1和NQO-1动态表达变化及意义》一文中研究指出目的探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NADPH quinineoxidoreductase-1,NQO-1)的表达变化及其意义。方法成年雄性SD大鼠56只制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d用干湿质量法测定脑组织含水量,Western blot测定Nrf2胞浆、胞核蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白;用实时荧光定量PCR测定Nrf2 mRNA表达。结果自冲击伤后6 h,脑组织含水量开始增加,24h达高峰,持续至3 d,然后开始下降(P<0.05)。组织学观察印证了脑水肿趋势。Western blot检测结果显示胞浆Nrf2蛋白于伤后12 h开始持续降低,而胞核Nrf2蛋白则于1h开始升高,24 h达到高峰,3 d时降低,7 d后明显降低,但仍高于NC组(P<0.05)。HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致。实时荧光定量PCR显示TBI组术后各时间点Nrf2 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论液压冲击伤后出现核因子Nrf2转位激活,可能通过上调HO-1、NQO-1蛋白表达发挥神经保护作用。(本文来源于《第叁军医大学学报》期刊2016年18期）
徐伟[3]（2016）在《EGCG激活Nrf2-ARE通路对液压冲击脑损伤的神经保护作用及其机制》一文中研究指出目的:通过观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对液压冲击脑损伤后核因子E2相关因子2(Nrf2)、caspase-3、caspase-12及炎性细胞因子表达变化的影响,探讨EGCG在液压冲击脑损伤所发挥的抗凋亡、抗炎的神经保护作用及其机制。方法:1体重为250g±50g的成年雄性SD大鼠24只,随机分成3组:假手术组(Sham Group)、脑损伤溶媒组(TBI+Vehicle Group)以及脑损伤干预组(TBI+EGCG Group),每组8只。后两组均实施麻醉后,于颅骨矢状缝右侧、冠状缝后约5mm处磨取骨窗,直径约4mm,常规行液压冲击,其中TBI+Vehicle组磨骨窗、液压冲击后给予腹腔注射生理盐水1ml,TBI+EGCG组磨骨窗、液压冲击后给予腹腔注射EGCG 50mg/kg+1ml生理盐水;Sham组大鼠常规麻醉后,头颅磨除骨窗,保持硬膜完整,但不行液压冲击伤。2所有动物在24h进行m NSS神经功能缺损评分,并过度麻醉,断头处死后迅速开颅取出脑组织。在大鼠脑组织损伤区前部切取大约100mg,应用Elliot公式测量大鼠脑组织中的含水量;在脑组织损伤区切取3-4mm左右冠状脑组织片,将其固定于多聚甲醛中,HE染色观察组织学变化、采用免疫组化法检测Nrf2及凋亡蛋白caspase-3、caspase-12的表达变化、采用原位末端标记法观察大鼠神经细胞的凋亡变化;将大鼠损伤区后部的脑组织迅速取出并置于液氮中储存,应用蛋白质印迹法来检测胞核胞浆Nrf2以及凋亡蛋白caspase-3、caspase-12含量变化,利用酶联免疫吸附法检测炎性细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达变化。结果:1神经功能缺损评分液压冲击脑损伤24h后,SD大鼠出现明显的神经功能缺损症状,四肢肌张力增高、呼吸暂停、心率增快,弓背、竖毛、前肢屈曲和后肢强直。与Sham组相比较,TBI+Vehicle组在伤后24h神经功能缺损评分明显升高(9.500±0.926),TBI+EGCG组在伤后24h神经功能缺损评分也升高(7.875±0.835),但TBI+EGCG组在伤后24h神经功能缺损评分比TBI+Vehicle组降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。2大鼠脑组织含水量测定与Sham组相比,TBI+Vehicle组在伤后24h脑组织含水量明显升高(83.305±0.539),TBI+EGCG组在伤后24h脑组织含水量亦明显升高(80.846±0.550),但TBI+EGCG组低于TBI+Vehicle组,差异具有统计学意义(P<0.05)。3 HE染色组织学观察显微镜下脑组织切片HE染色可见,Sham组大鼠脑组织结构完整,细胞排列有序,胞核清晰,核膜完整,无水肿、出血。TBI+Vehicle组大鼠术后24h可见挫伤灶点状出血和水肿,挫伤灶周围脑组织可见组织结构高度疏松,细胞高度水肿,神经元间隙明显增大,神经元变性,细胞体积明显增大,胞浆淡染,细胞空泡样变明显,周围伴随有炎细胞浸润及胶质细胞增生。TBI+EGCG组大鼠术后24h挫伤灶周围脑组织亦可见组织结构疏松,细胞轻度水肿,神经元间隙增大,部分神经元变性,部分局部出现空泡样变,但TBI+EGCG组与TBI+Vehicle组相比较,细胞水肿显着减弱。4免疫组化法测定Nrf2及caspase-3、caspase-12表达Nrf2蛋白表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组大鼠挫伤灶周围脑组织中神经元和神经胶质细胞中的Nrf2表达显着增高,但TBI+EGCG组(0.391±0.060)高于TBI+Vehicle组(0.282±0.055),差异具有统计学意义(P<0.05)。caspase-3蛋白表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组大鼠挫伤灶周围脑组织中caspase-3阳性细胞平均光密度值显着增高,但TBI+EGCG组(0.264±0.029)低于TBI+Vehicle组(0.371±0.038),差异具有统计学意义(P<0.05)。caspase-12蛋白表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组大鼠挫伤灶周围脑组织中caspase-12阳性细胞平均光密度值显着增高,但TBI+EGCG组(0.324±0.046)低于TBI+Vehicle组(0.426±0.036),差异具有统计学意义(P<0.05)。5原位末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞Sham组中仅能见极少量阳性细胞。与Sham组相比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组大鼠挫伤灶周围脑组织中凋亡阳性细胞数量显着增多,TBI+EGCG组(21.374±2.887)凋亡指数低于TBI+Vehicle组(29.548±2.919),差异具有统计学意义(P<0.05)。6蛋白质印迹法测定胞核、胞浆Nrf2及凋亡蛋白caspase-3、caspase-12含量胞核Nrf2蛋白表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组动物挫伤灶周围脑组织中胞核Nrf2表达显着增多,TBI+EGCG组胞核Nrf2蛋白表达(0.554±0.052)高于TBI+Vehicle组(0.337±0.058),差异具有统计学意义(P<0.05)。胞浆Nrf2蛋白表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组动物挫伤灶周围脑组织中胞浆Nrf2表达显着减少,TBI+EGCG组胞浆Nrf2蛋白表达(0.405±0.040)低于TBI+Vehicle组(0.537±0.032),差异具有统计学意义(P<0.05)。caspase-3蛋白表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组动物挫伤灶周围脑组织中caspase-3表达显着增多,TBI+EGCG组caspase-3蛋白的表达(0.664±0.023)低于TBI+Vehicle组(0.814±0.028),差异具有统计学意义(P<0.05)。caspase-12蛋白表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组动物挫伤灶周围脑组织中caspase-12表达显着增多,TBI+EGCG组caspase-12蛋白表达(0.545±0.018)低于TBI+Vehicle组(0.764±0.030),差异具有统计学意义(P<0.05)。7 ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-αIL-1β表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组大鼠挫伤灶周围脑组织中IL-1β表达明显增高,TBI+EGCG组IL-1β表达(576.078±55.986)低于TBI+Vehicle组(809.422±68.577),差异具有统计学意义(P<0.05)。IL-6表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组大鼠挫伤灶周围脑组织中IL-6表达明显增高,TBI+EGCG组IL-6表达(251.603±9.500)低于TBI+Vehicle组(306.207±13.524),差异具有统计学意义(P<0.05)。TNF-α表达:与Sham组比较,TBI+Vehicle组与TBI+EGCG组大鼠挫伤灶周围脑组织中TNF-α表达明显增高,TBI+EGCG组TNF-α表达(23.167±4.068)低于TBI+Vehicle组(31.800±2.103),差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1液压冲击脑损伤后出现Nrf2、caspase-3、caspase-12及炎性细胞因子表达增高,在继发性脑损伤发病机制中发挥重要作用。2 EGCG通过上调Nrf2的活性,抑制凋亡蛋白caspase-3、caspase-12和炎性细胞因子的表达,发挥抗神经细胞凋亡、抗炎的神经保护作用。(本文来源于《河北医科大学》期刊2016-03-01）
张林会,李胜超,孙国柱[4]（2014）在《液压冲击脑损伤大鼠炎性因子的表达及意义》一文中研究指出目的观察液压冲击脑损伤大鼠炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、ICAM-1的表达变化。方法成年雄性SD大鼠48只,应用Dixon法制作颅脑损伤模型,术后1、6、12、24 h、3、7 d用干湿重法、免疫组化法分别测定水肿脑组织含水量及其IL-1β、IL-6、TNF-α、ICAM-1表达。结果模型组脑组织含水量6 h时稍升高(79.11±1.28)%,12 h显着升高(80.26±1.47)%,24 h至3 d达到高峰(82.74±1.10)%,(82.04±1.70)%,7 d时降低(80.72±1.87)%。组织学观察印证了脑组织的水肿趋势。免疫组化显示水肿脑组织IL-6、IL-1β、TNF-α、ICAM-1的表达均6 h开始增高,24 h至3 d达到高峰,7 d后降低。线性相关性分析发现四者表达与脑含水量呈正相关(r=0.805,r=0.763,r=0.927,r=0.866,P<0.05)。结论颅脑液压冲击伤大鼠IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α均出现高表达,抑制其表达可能有助于减轻继发性脑损伤。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2014年23期）
马波涛[5]（2014）在《Nrf2在液压冲击脑损伤抗神经细胞凋亡中的作用》一文中研究指出目的：观察Nrf2基因敲除小鼠液压冲击脑损伤后水肿脑组织中凋亡蛋白Casepase-3、Casepase-12表达变化和神经细胞凋亡改变，探讨Nrf2在液压冲击脑损伤中所发挥的抗神经细胞凋亡作用。方法：用雄性Nrf2基因正常和基因敲除小鼠制作液压冲击脑损伤模型。选取成年小鼠32只，其中Nrf2+/+、Nrf2-/-各16只，体重约28-32g，随机分为4组：Nrf2+/+对照组（Nrf2+/+NC组，n=8）、Nrf2+/+损伤组（Nrf2+/+TBI组，n=8）和Nrf2-/-对照组（Nrf2-/-NC组，n=8）、Nrf2-/-损伤组（Nrf2-/-TBI组，n=8）。其中，对照组仅头颅开窗不进行液压冲击损伤；损伤组头颅开窗并常规制作液压冲击脑损伤模型。各实验组小鼠于24h后采用神经功能缺损评分（NSS）方法进行评分，然后过度麻醉，断头，留取组织标本。迅速从损伤区前缘取重约50mg水肿脑组织，采用干湿重法测量脑组织含水量；经损伤区切成约4mm薄层冠状脑组织，用多聚甲醛固定，采用HE染色观察组织形态学变化；免疫组织化学染色方法检测Caspase-3、Caspase-12的表达；原位末端荧光标记（TUNEL）法检测神经细胞的凋亡情况；取损伤区域后缘脑组织采用免疫蛋白印迹法（Western Blot）检测Caspase-3、Caspase-12蛋白含量。结果：1神经功能缺损评分脑损伤后，小鼠出现了神经功能缺损症状。与对照组（NC）比较，损伤各组（TBI）在损伤后24h神经功能评分明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；但是Nrf2+/+TBI组（5.25±0.89）与Nrf2-/-TBI组（5.88±1.36）比较无统计学意义（P>0.05）。2组织学观察Nrf2+/+NC组和Nrf2-/-NC组肉眼观察：脑组织软脑膜完整表面光滑，脑沟及脑回清晰可见，脑表面及颅底无挫伤、出血、充血等表现。镜下观察：脑组织细胞结构完整，排列有序，核膜完整，核仁蓝色淡染。Nrf2+/+TBI组和Nrf2-/-TBI组肉眼观察：可见打击侧皮层局部挫伤，脑沟回存在积血，切面观察可见皮层下有散在点状出血，严重者可见脑室内出血。镜下观察：挫伤灶周围细胞出现水肿且水肿程度明显，胞浆淡染，部分出现空泡样变性伴胶质细胞增生。3脑组织含水量测定采用Elliot公式对小鼠脑组织含水量进行测定。与对照组相比，损伤各组小鼠脑组织含水量明显增高；Nrf2+/+NC组（78.37±0.18）与Nrf2-/-NC组（78.32±0.13）比较无差别（P>0.05），Nrf2+/+TBI组（81.55±0.40）与Nrf2-/-TBI组（82.89±0.20）之间有明显差别（P<0.05）。4免疫组化技术检测Caspase-3和Caspase-12表达Nrf2+/+NC组和Nrf2-/-NC组小鼠Caspase-3和Caspase-12阳性细胞很少，Nrf2+/+TBI组和Nrf2-/-TBI组小鼠则明显增多。与Nrf2+/+NC组比较，Nrf2+/+TBI组动物挫伤灶周围脑组织内Caspase-3（28.892±5.865），Caspase-12（28.619±2.547）阳性细胞明显增多，且染色也较深（P<0.05）；与Nrf2-/-NC组比较，Nrf2-/-TBI组动物挫伤灶周围脑组织内Caspase-3（56.884±5.819），Caspase-12（51.196±4.563）阳性细胞数量增多，且染色也加深（P<0.05）；与Nrf2+/+TBI组相比，Nrf2-/-TBI组动物挫伤灶周围脑组织Caspase-3，Caspase-12阳性细胞同样明显增多（P<0.05）。5TUNEL法检测神经细胞凋亡Nrf2+/+NC组和Nrf2-/-NC组TUNEL阳性细胞很少，Nrf2+/+TBI组和Nrf2-/-TBI组TUNEL阳性细胞表达均较对照组明显增多，且Nrf2-/-TBI组（59.30±9.90）明显高于Nrf2+/+TBI组（31.11±5.31），具有统计学意义（P<0.05)。6Western Blot测定Caspase-3和Caspase-12蛋白表达情况Nrf2+/+NC组和Nrf2-/-NC组小鼠Caspase-3和Caspase-12蛋白表达较少，但Nrf2+/+TBI组和Nrf2-/-TBI组小鼠表达明显增多。与Nrf2+/+NC组比较，Nrf2+/+TBI组动物挫伤灶周围脑组织内Caspase-3（0.8857±0.0226），Caspase-12（0.6327±0.0080）明显增加，差异有统计学意义（P<0.05）；与Nrf2-/-NC组比较，Nrf2-/-TBI组动物挫伤灶周围脑组织内Caspase-3（1.0894±0.2479），Caspase-12（1.0290±0.1421）也明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）；与Nrf2+/+TBI组相比，Nrf2-/-TBI组动物挫伤灶周脑组织的Caspase-3，Caspase-12蛋白表达显着增多，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1野生型（Nrf2+/+）小鼠液压冲击脑损伤后水肿脑组织内Caspase-3和Caspase-12表达增多，神经细胞凋亡加重，提示液压冲击脑损伤后Caspase-3和Caspase-12上调表达，诱导神经细胞凋亡。2液压冲击伤后Nrf2基因敲除型（Nrf2-/-）小鼠脑损伤后Caspase-3和Caspase-12表达和神经细胞凋亡明显高于野生型（Nrf2+/+）小鼠，表明Nrf2基因可通过抑制Caspase依赖凋亡途径，发挥抗神经细胞凋亡的神经保护作用。(本文来源于《河北医科大学》期刊2014-03-01）
朱小辉[6]（2014）在《去骨办减压对大鼠液压冲击脑损伤神经凋亡及其调控机制的影响》一文中研究指出目的：观察去骨瓣减压术对大鼠液压冲击脑损伤Nrf2蛋白表达、神经细胞凋亡及其相关调控因子caspase-3和caspase-12表达的影响，探讨去骨瓣减压术在液压冲击脑损伤中发挥抗凋亡作用的机制。方法：成年、雄性SD大鼠24只，体重350g±50g(约9周龄)，随机分为3个组：假手术组（sham组）、脑损伤复骨瓣组（DC-组）和脑损伤去骨瓣减压组（DC+组），每组各8只。sham组常规麻醉开颅，剪开硬膜，但不行液压冲击；后两组均常规麻醉，头颅开骨窗，行液压冲击脑损伤，并剪开硬膜，其中DC-组开骨窗打击后，放回原骨瓣，并用牙科丙烯酸水泥粘合固定，缝合头皮切口； DC+组开骨窗打击后20分钟内用骨钳从冠状缝向菱形缝方向扩展咬开5mm，使骨窗的内侧和外侧分别是矢状缝和上颞线，取出的骨瓣不再放回，缝合头皮切口。所有动物术后24h进行神经系统功能评分，并过度麻醉、断头处死，开颅取脑，从损伤区前缘取大约100mg脑组织应用干湿重法测脑组织含水量；经损伤区切成约3-4mm厚冠状脑组织片，多聚甲醛固定，HE染色行组织学观察，免疫组织化学染色方法检测Nrf2、caspase-3和caspase-12蛋白表达变化，原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡情况；将损伤区域后缘脑组织迅速置于液氮中，用Western Blot方法检测Nrf2核蛋白、caspase-3蛋白和caspase-12蛋白含量。结果：1神经系统功能评分与sham组相比较， DC+组在术后24h神经功能评分较低（4.13±0.641)，DC-组在术后24h神经功能评分也较低（2.25±0.707)，但DC+组在伤后24h神经功能评分比DC-组高，差异具有统计学意义（P<0.05)。2组织学观察与sham组相比，DC-组和DC+组动物挫伤灶周脑组织24h见细胞水肿明显,体积明显增大,细胞核膨大，胞浆淡染，局部呈现空泡样变，周围伴随胶质细胞增生，但DC-组比DC+组更明显。而sham组细胞胞体完整，胞核清晰，胞浆均匀，大小均匀适中。3大鼠脑组织含水量检测与sham组对比，DC+组在伤后24h脑组织含水量明显升高(80.638±0.602)， DC-组在伤后24h脑组织含水量亦明显升高(83.203±0.434)，但DC+组明显低于DC-组，差异具有统计学意义(P<0.05)。4Nrf2、Caspase-3和Caspase-12的免疫组织化学检测Nrf2蛋白表达：主要表达于神经元细胞和神经胶质细胞的细胞核，在正常脑组织中表达为阴性或弱阳性。sham组Nrf2蛋白表达量很少。与sham组比较，后两组神经元、胶质细胞胞核中Nrf2的表达明显增高，但DC+组（42.120±5.333）明显高于DC-组（28.036±4.662），差异具有统计学意义(P<0.05)。Caspase-3蛋白表达：与sham组比较，后两组动物脑挫伤灶周脑组织中Caspase-3阳性细胞数及其着色深度明显增高，且DC+组Caspase-3阳性细胞数（31.082±5.661）明显低于DC-组（49.927±4.691），差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase-12蛋白表达：与sham组比较，后两组动物脑挫伤灶周脑组织中Caspase-12阳性细胞数和其着色程度明显增高，且DC+组Caspase-12阳性细胞数（29.687±4.728）明显低于DC-组（48.137±3.523），差异具有统计学意义(P<0.05)。5Western Blot检测细胞核Nrf2蛋白，caspase-3和caspase-12蛋白与sham组比较，后两组动物脑挫伤灶周脑组织中Nrf2核蛋白表达明显增高, DC+组为（0.759±0.024），DC-组为（0.575±0.049），DC+组Nrf2蛋白表达明显高于DC-组，差异有统计学意义(P<0.05)。与sham组比较，后两组大鼠脑挫伤灶周脑组织中caspase-3蛋白表达明显增高，DC+组为(0.721±0.069)，DC-组为(0.933±0.0465)，DC+组caspase-3蛋白表达明显低于DC-组，差异具有统计学意义(P<0.05)。与sham组比较，后两组大鼠脑挫伤灶周围脑组织中caspase-12蛋白表达明显增高，DC+组为(0.634±0.055)，DC-组为(0.827±0.027), DC+组caspase-12蛋白表达明显低于DC-组，差异有统计学意义(P<0.05)。6TUNEL荧光检测法检查凋亡细胞叁组动物均可见TUNEL阳性细胞，其中，sham组仅见少量的阳性细胞。与sham组比较，后两组脑挫伤灶周围脑组织中TUNEL阳性凋亡细胞数量明显升高，且DC+组（32.102±5.824）凋亡指数明显低于DC-组（45.186±6.536），差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：去骨瓣减压术能够上调Nrf2的活性，通过抑制caspase-3及caspase-12表达，发挥抗神经细胞凋亡的神经保护作用。(本文来源于《河北医科大学》期刊2014-03-01）
杨连琦[7]（2013）在《Nrf2对液压冲击脑损伤炎性细胞因子表达的调控作用以及姜黄素对其的影响》一文中研究指出第一部分：Nrf2对液压冲击脑损伤炎性细胞因子表达的调控作用目的：观察大鼠液压冲击脑损伤Nrf2表达规律，探讨Nrf2对液压冲击脑损伤炎性细胞因子表达的调控作用。方法：成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠56只，体重250～350g，随机分为2组：对照组(NC组)和外伤组（TBI组），其中TBI组大鼠又根据伤后1h，6h，12h，24h，3d，7d六个时间点随机分为6个亚组，每组8只。TBI组常规麻醉开颅，制备液压冲击伤动物模型；NC组只行开颅但不给予液压打击。NC组于术后，TBI组于打击后相应时间点进行神经功能评分后，再以过量的10%水合氯醛麻醉，断头处死，开颅取脑，取100mg左右损伤区前缘脑组织测定脑组织含水量。经损伤区切成厚约4mm冠状脑片，置于4％多聚甲醛中固定24h后，常规进行脱水、石蜡包埋处理，予以4μm切片，行HE染色、组织学观察。应用免疫组织化学染色方法检测Nrf2、ICAM-1表达变化。损伤区脑组织后缘分为3部分，用Western blot检测Nrf2核蛋白变化，RT-PCR检测Nrf2mRNA变化，用酶联免疫吸附法检测IL-1β、IL-6、TNF-α变化。结果：1神经功能评分与NC组比较，TBI组在伤后6h评分降低（2.50±0.53，P<0.05)；12h（3.63±0.52）较6h稍升高，但仍低于NC组（P<0.05)；24h时评分又降低（2.65±0.32，P<0.05)；3d神经功能评分升高（4.75±0.71，P<0.05),7d时评分继续升高（6.88±0.83，P<0.05)，但仍低于NC组。2组织学观察TBI组大鼠脑损伤后6h损伤灶周神经细胞开始出现水肿，12h神经细胞水肿较前加重，24h时神经细胞水肿最为明显，神经细胞体积明显增大，胞浆淡染，甚至出现空泡变性，并伴有胶质细胞的增生和炎性细胞浸润，3d时神经元及神经胶质细胞水肿程度减轻，7d时水肿明显减退，但胶质细胞增生逐渐显着。3大鼠脑含水量与NC组相比，TBI组在1h时稍升高，差异无统计学意义(74.87±2.31，P>0.05)，6h-12h明显升高(80.23±1.11,81.91±0.83, P<0.05)，24h达到高峰(84.01±0.99, P<0.05)，3d开始下降（81.82±1.26，P<0.05），7天明显下降（80.65±1.32，P<0.05）。4免疫组化检测Nrf2和ICAM-1表达Nrf2表达：主要表达于神经元细胞和神经胶质细胞的细胞核，在正常脑组织中表达为阴性或弱阳性，液压冲击脑损伤后其表达升高：1h即开始升高（3.25±1.04，P<0.05），6-12h逐渐升高（4.50±0.93，5.00±1.07，P<0.05），24h达高峰（5.75±0.71，P<0.05），3天后出现下降（5.00±1.07，P<0.05），7d后明显降低(3.75±1.28, P<0.05)，但仍高于正常。ICAM-1表达：与NC组相比，TBI组自伤后1h开始升高(3.38±1.41，P<0.05)，伤后6h-12h仍继续上升(4.50±0.93，5.38±1.92，P<0.05)，伤后24h达高峰(7.25±1.39，P<0.05)，3d开始逐渐减低(4.00±1.51，P<0.05)，7d后仍高于NC组(3.75±1.04，P<0.05)。5Western Blot检测Nrf2核蛋白与NC组相比，TBI组动物水肿脑组织Nrf2核蛋白表达从1h开始增高(1.19±0.09, P<0.05)，6h-12h逐渐升高(1.38±0.08,1.51±0.09P<0.05)，24h达到高峰(1.59±0.08, P<0.05)，3d时降低(1.41±0.09, P<0.05)，7d后明显降低(1.24±0.10)，但仍高于正常(P<0.05)。6RT-PCR检测Nrf2mRNANrf2mRNA表达：与NC组相比，TBI组动物水肿脑组织Nrf2mRNA表达各亚组间比较均无差异(P<0.05)。7ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-αIL-1β表达：与NC组对比，TBI组1h无明显增高（32.76±3.59），6h开始增高(41.72±2.13, P<0.05)，12h继续升高(42.17±3.30, P<0.05)，24h达到高峰(44.22±3.97, P<0.05)，3d开始降低(41.71±3.09)，7d后仍降低(39.94±2.98)，仍高于对照组(P<0.05)。各亚组间比较均有差异(P<0.05)。IL-6表达：与NC组对比，TBI组从6h（103.59±3.67P<0.05）开始增高，12h继续升高(109.25±5.68, P<0.05)，24h达到高峰(120.21±10.00,P<0.05)，3d开始降低(112.60±6.71, P<0.05)，7d后降低(101.25±5.00)，仍高于对照组(P<0.05)。各亚组间比较均有差异(P<0.05)。TNF-α表达：NC组对比，TBI组1h开始增高（36.61±4.01），6h为(38.98±1.07，P<0.05)，12h至24h达到高峰(41.02±1.49,45.74±3.48，P<0.05)，3d开始降低(41.15±1.20，P<0.05)，7d时与对照组比较无差别(30.49±4.12)。结论：1大鼠液压冲击伤水肿脑组织Nrf2蛋白呈升高趋势，Nrf2mRNA表达无明显变化，炎性细胞因子表达也呈增高趋势。2大鼠液压冲击脑损伤后Nrf2蛋白表达增高，可能是一种对抗包括脑水肿、炎性损伤的机体防御机制。3上调Nrf2可能是治疗TBI后继发性脑损伤的一个新靶点。第二部分：姜黄素激活Nrf2对液压冲击脑损伤炎性细胞因子表达的影响目的：探讨姜黄素激活Nrf2对液压冲击脑损伤炎性细胞因子表达的影响。方法：雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠144只，体重250～350g，随机分为3组：单纯损伤组（TBI组）、姜黄素I组（C I组）和姜黄素II组（CII组）。其中，各组再根据冲击伤后1h，6h，12h，24h，3d，7d分别分为6个亚组，每个亚组8只大鼠。TBI组、CI组和CII组常规行液压冲击制作脑损伤模型，其中，CI组和CII组分别立即腹腔注射姜黄素50mg/kg/d、100mg/kg/d，再于术后第1h、6h、12h、24h、3d和7d行神经功能评分，均以过量10%水合氯醛麻醉，断头处死，开颅取脑，经损伤区切取3mm厚冠状脑片，行HE染色观察组织形态。取100mg左右损伤区前缘脑组织应用干湿重法测定大鼠脑组织含水量。应用免疫组织化学染色方法检测Nrf2、ICAM-1变化。损伤区脑组织后缘矢状分为2部分，用Western blot检测Nrf2核蛋白在各组中的变化，用酶联免疫吸附法检测IL-6、IL-1β、TNF-α变化。结果：1神经功能评分与TBI组比较，除1h时外CI组和CII组神经功能评分各时间点均有所增加，差异有统计学意义(P<0.05)。CI组和CII组组间比较，于6h、（2.75±0.46，3.50±0.53）、12h（4.50±0.53，5.25±0.71）、24h（3.00±0.76，3.63±0.52）3d(6.25±0.463.63±0.52)差别有统计学意义(P<0.05)。与NC组相比，TBI组、CI组和CII组除1h（9.000±0.00，8.375±0.744，8.500±0.535，8.625±0.518）外差异有统计学意义(P<0.05)。2组织学观察与TBI组比较，姜黄素I组和姜黄素II组大鼠在各个时间点除1h外，脑组织神经元和神经胶质细胞水肿程度有所减轻，水肿的面积有所减小，炎细胞渗出减少，胶质细胞增生减弱，神经元及神经胶质细胞周围间隙缩小。除1h、6h、7d外CII组各时间点与CI组比神经细胞水肿均减轻。3脑含水量测定与TBI组比较，CI组和CII组脑含水量1h时均稍低于TBI组，但无统计学意义(P>0.05)；CI组和CII组脑含水量6h时明显低于TBI组(80.27±1.56,77.76±2.19,76.48±2.36)，差异具有统计学意义(P<0.05)，CI组和CII组间比较无统计学意义(P>0.05)；12h时叁组脑含水量继续增高（82.15±2.27,79.25±2.65,76.70±2.27），叁组间比较均有统计学意义(P<0.05)；24h时脑水含量均达最高(83.23±2.24,80.37±2.31,77.06±2.27)，且叁组间比较均有统计学意义(P<0.05)；3d开始均下降(82.76±2.52,79.39±3.28,76.23±2.51, P<0.05)，叁组间比较仍有统计学意义；7d时明显降低(80.38±1.89，76.92±2.73,76.13±1.92), CI组、CII组仍稍高于TBI组，差异有统计学意义(P<0.05)，但CI组与CII组组间比较，无统计学差异(P>0.05)。4免疫组化测定Nrf2和ICAM-1Nrf2蛋白表达：TBI组、C I组和C II组Nrf2表达均呈升高趋势。与TBI组比较，C I组和C II组在1h差异均无统计学意义(P>0.05)，余各时间点均高于TBI组，以12h（5.88±1.55，7.88±1.55，4.50±0.93）、24h（4.75±1.04，6.13±1.36，8.25±1.39）、3d（6.00±0.00，7.00±1.07，4.50±0.93）最为明显(P<0.05)。CII组则于12h、24h、3d明显高于CI组，差别有统计学意义(P<0.05)。ICAM-1表达：与TBI组比较，C I组和C II组ICAM-1表达均降低。1h时叁组无统计学意义（3.50±0.93，3.25±0.71，3.75±1.28），其余各时间点叁组间均有统计学意义(P<0.05)。除1h（3.25±0.71，3.50±0.93）、6h（3.88±0.99，4.25±0.89）、7d（1.88±0.83，2.13±0.99）C II组与C I组无统计学意义(P>0.05)，其余时间点C II组均低于C I组。5Western Blot测定Nrf2Nrf2核蛋白表达：TBI组、CI组和CII组Nrf2表达均呈上升趋势。与TBI组比较，C I组和C II组在1h（1.21±0.13，1.24±0.05，1.18±0.09）差别无统计学意义(P>0.05)，其他时间点差别均有统计学意义(P<0.05)。CII组于12h（1.86±0.09，2.17±0.17）、24h（2.17±0.10，2.76±0.10）、3d（1.91±0.12，2.49±0.16）均高于CI组，差别有统计学意义(P<0.05)。6ELISA测定IL-1β、IL-6、TNF-αIL-1β表达：与TBI组比较，C I组和C II组IL-1β表达呈下降趋势。在1h（32.12±2.74，36.05±2.63，36.16±3.69）时叁组相比无统计学意义(P>0.05)，其余各时间点均有统计学意义(P<0.05)。除1h（32.12±2.74，36.05±2.63）、6h（32.20±2.53，37.94±3.28）外，其他时间点C II组均低于C I组，差异有统计学意义(P<0.05)。IL-6表达：与TBI组比较，C I组和C II组IL-6表达均下降，但在1h（86.88±6.09，90.06±4.14，92.27±1.53）、7d时（86.51±7.86，94.03±9.33，95.24±3.30）无统计学意义(P>0.05)，其余各时间点比较均有统计学意义(P<0.05)。除1h（86.88±6.09，90.06±4.14）、6h（90.78±5.91，96.18±6.31）、7d（86.51±7.86，94.03±9.33）外，C II组与C I组比较降低，且有统计学意义(P<0.05)。TNF-α表达：与TBI组比较，C I组和C II组TNF-α表达降低，在1h（32.90±2.28，34.37±2.81，35.57±1.01）、7d（32.28±1.40，34.73±2.63，35.39±3.08）时差异无统计学意义，其余各时间点比较均有统计学意义(P<0.05)。除1h（32.90±2.28，34.37±2.81）、6h（33.08±2.59，34.55±3.23）、7d（32.28±1.40，34.73±2.63）外，C II组与C I组比较降低，且差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1大鼠液压冲击脑损伤后，姜黄素可上调Nrf2蛋白表达，继而下调炎性细胞因子的表达，减轻继发性脑损伤。2姜黄素对Nrf2的激动作用存在着一定的量-效关系，在一定范围内其用量越大效果越明显。(本文来源于《河北医科大学》期刊2013-03-01）
陈盼虎[8]（2013）在《Nrf2在液压冲击脑损伤抗神经细胞凋亡中的作用以及姜黄素对其的影响》一文中研究指出第一部分Nrf2在液压冲击脑损伤抗神经细胞凋亡中的作用目的：观察大鼠液压冲击脑损伤后Nrf2的表达和神经细胞凋亡及其相关调控因子的变化，探讨Nrf2在液压冲击脑损伤抗神经细胞凋亡中的作用。方法：成年、雄性SD大鼠56只，体重300g±50g，随机分为2个组：对照组（NC组）8只，常规麻醉头颅开骨窗，不行液压冲击；脑损伤组（TBI组）48只，按伤后1h，6h，12h，24h，3d，7d六个时间点再随机分为6个亚组，每组8只，常规麻醉头颅开骨窗，制作液压冲击脑损伤动物模型。NC组在开骨窗后24h进行神经系统评分后，TBI组于术后相应时间点进行神经功能评分后，两组动物均过度麻醉处死，开颅取脑，从损伤区前缘取大约100mg脑组织应用干湿重法测脑组织含水量；经损伤区切成约3mm厚冠状脑组织片，多聚甲醛固定，HE染色行组织学观察，免疫组织化学染色方法检测Nrf2、caspase-3和caspase-12，原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡变化；损伤区域后缘脑组织矢状分为两份，其中一份用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Nrf2mRNA的表达，另外一份用免疫蛋白印迹（Western Blot）检测Nrf2核蛋白、Nrf2胞浆蛋白、caspase-3蛋白和caspase-12蛋白含量。结果：1神经功能评分与NC组相比较，TBI组在伤后6h神经功能评分较低（2.75±0.707，P<0.05)；12h（4.50±0.756）稍有所升高，但仍低于NC组（P<0.05)；24h（2.25±0.707，P <0.05)评分又开始下降；3d（5.75±0.916，P<0.05)评分逐渐升高，到7d（7.750±0.707，P<0.05）仍低于NC组。2组织学观察TBI组动物挫伤灶灶周脑组织6h开始出现细胞水肿，于12h时较前有所加重，24h见细胞体积比12h明显增大，水肿程度最明显，胞浆淡染，部分出现空泡样变性，伴随有胶质细胞增生，3d细胞水肿的程度稍减轻，7d胶质细胞逐渐显着增生细胞水肿明显减退。3大鼠脑组织含水量测定与NC组相比，TBI组脑组织含水量1h时无差异(P>0.05)，6h稍升高（78.937±0.125, P<0.05），12h时明显升高(81.801±0.601, P<0.05)，24h时达到高峰(83.234±0.321, P<0.05)，3d时开始下降（82.143±0.304，P<0.05），7天明显下降（81.290±0.305，P<0.05），仍高于NC组。4免疫组化检测Nrf2、Caspase-3和Caspase-12Nrf2表达：NC组脑组织Nrf2有少量表达，主要位于胶质细胞和神经元胞浆中。与NC组比较，TBI组动物损伤侧的脑皮质神经细胞核中Nrf2表达明显升高，伤后1h（0.307±0.023，P<0.05）表达开始增高，24h（1.288±0.015，P<0.05）达到高峰，随后逐渐降低。Caspase-3表达：与NC组比较，TBI组挫伤灶周脑组织中Caspase-3阳性细胞数于6h（0.560±0.014，P<0.05）开始增多，12h（0.795±0.019，P<0.05）阳性细胞不但数量增加，而且着色也加深，24h（2.047±0.022，P<0.05）阳性细胞数量及着色程度达到最高峰，并维持至3d（1.757±0.023，P<0.05），7d（0.920±0.031， P<0.05）阳性细胞数目及着色程度下降，但仍高于NC组。Caspase-12表达：TBI组动物挫伤灶灶周脑组织中Caspase-12阳性细胞数于6h开始增多（0.585±0.021，P<0.05），12h较前增加（0.878±0.019，P<0.05），而且着色程度逐渐增加,至24h阳性细胞数和着色深度达到最高峰（1.989±0.015，P<0.05），以后逐渐降低。5Western Blot测定胞浆、胞核Nrf2蛋白，caspase-3、caspase-12蛋白与NC组相比，TBI组动物挫伤灶灶周脑组织中Nrf2核蛋白表达从1h开始增高(0.563±0.026, P<0.05)，6h继续增高(0.814±0.039, P<0.05)，12h(1.043±0.039, P<0.05)持续增高，24h达到高峰(1.408±0.031, P<0.05)，3d时降低(1.111±0.045, P<0.05)，7d后明显降低(0.803±0.027)，但仍高于NC组(P<0.05)。与NC组相比，TBI组Nrf2胞浆蛋白表达各时间点无明显差异(P>0.05)。与NC组相比，TBI组caspase-3蛋白表达于6h开始增高（0.801±0.029,P<0.05），12h（1.142±0.029, P<0.05）继续增高，24h达到高峰(1.413±0.042,P<0.05)，3d时降低(1.151±0.100, P<0.05)，7d后明显降低(0.834±0.022)，但仍高于NC组(P<0.05)。与NC组相比，TBI组caspase-12蛋白表达于6h开始逐渐增高(0.756±0.124, P<0.05)，12h(1.098±0.051, P<0.05)继续增高，24h达到高峰(1.382±0.110, P<0.05)，3d时开始降低(0.814±0.041, P<0.05)，7d后明显降低(0.567±0.017)，但仍高于正常(P<0.05)。6RT-PCR测定Nrf2mRNA表达NC组中，Nrf2mRNA有少量的表达。TBI组各时间点相比，Nrf2mRNA水平在损伤后各时间点无明显变化，且与NC组相比也无明显差异(P>0.05)。7TUNEL检测神经细胞凋亡两组术后各时间点均可见TUNEL阳性细胞，其中，NC组仅见少量的阳性细胞。TBI组6h（27.385±0.158, P<0.05）凋亡细胞开始增多，12h（42.366±0.303, P<0.05）较前明显提高，24h（55.222±0.124, P<0.05）达高峰，3d（48.207±0.149, P<0.05）开始降低，7d（22.226±0.273, P<0.05）继续降低仍高于NC组。8Nrf2、神经细胞凋亡与caspase-3蛋白和caspase-12蛋白表达相关性分析TBI组caspase-3和caspase-12表达与神经细胞凋亡呈正相关(rcaspase-3=0.871, P<0.01，rcaspase-12=0.916, P<0.01)。caspase-3和caspase-12表达也与Nrf2核蛋白表达呈正相关(rcaspase-3=0.918, P<0.01和rcaspase-12=0.961,P<0.01)。结论：1液压冲击脑损伤后Nrf2蛋白、神经细胞凋亡，caspase-3及caspase-12蛋白均呈高表达。2TBI后Nrf2被激活，可能通过抑制caspase-3及caspase-12表达，进而抑制细胞凋亡发挥神经保护作用。第二部分：姜黄素对液压冲击脑损伤Nrf2抗神经细胞凋亡影响目的：观察不同剂量姜黄素对液压冲击脑损伤Nrf2及其神经细胞凋亡的影响，并探讨其机制。方法：健康成年雄性SD大鼠144只，体重300g±50g，随机分为3组：脑损伤组（TBI组）、姜黄素低剂量组（LC组）和姜黄素高剂量组（HC组）组。每组再根据脑损伤后1h，6h，12h，24h，3d，7d六个时间点分为6个亚组，每个亚组8只大鼠。LC组和HC组分别于制作模型术后，往大鼠腹腔注射姜黄素，浓度分别为50㎎/㎏和100㎎/㎏。TBI组、LC组和HC组大鼠常规进行液压冲击脑组织损伤模型，各亚组按对应时间点进行神经功能学评分，再用10%水合氯醛注射过度麻醉，断头处死，开颅取脑，从损伤区的前缘取100mg左右脑组织应用干湿重法测脑组织含水量，经损伤区域切成3mm左右冠状脑片，HE染色，免疫组化检测Nrf2、caspase-3和caspase-12，原位末端标记法（TUNEL）检测神经细胞凋亡变化；损伤区域后缘按矢状方向分为两部分，一部分用免疫蛋白印迹（Western Blot）检测Nrf2核蛋白、Nrf2胞浆蛋白、caspase-3蛋白和caspase-12蛋白含量。另外一部分用于RT-PCR检测Nrf2mRNA变化。结果：1神经功能评分与TBI组相比，LC组和HC组神经功能评分各时间点均有所增加，差异有统计学意义(P<0.05)。LC组和HC组组间比较，仅于12h（4.750±0.886，4.875±0.835）、24h（2.500±0.926，2.875±0.991）、3d（6.125±1.126，6.375±1.685）差别有统计学意义(P<0.05)。2组织学观察LC组和HC组各个对应时间点与脑损伤组相比较，脑组织水肿的范围变小，程度有所减轻，胶质细胞的增生变弱，炎性细胞渗出变少，神经元的周围间隙也缩小。HC组各时间点神经细胞水肿程度均轻于LC组。3大鼠脑组织含水量测定与TBI组比较，LC组和HC组1h无差别（78.204±0.318,78.154±0.244,78.105±0.263，P>0.05)，6h明显低于脑损伤组(78.937±0.125,78.553±0.179,78.121±0.327)，差异具有统计意义(P<0.05)，LC组和HC组之间无差别，(P>0.05)，12h叁组之间两两比较均有差异(P<0.05)，脑水含量分别为（81.801±0.601,80.763±0.159,79.449±0.798），24h时脑水含量均达最高，且叁组之间比较均有差异(P<0.05)，脑水含量分别为(83.234±0.321,82.218±0.257,80.945±0.084)，3d开始下降，叁组之间比较同样有差异(82.143±0.304,81.178±0.181,79.939±0.025, P<0.05)，7d时明显降低(81.290±0.305，80.344±0.158,79.702±0.194), LC组、HC组仍稍高于TBI组，差异有统计学意义(P<0.05)，但LC组与HC组组间比较，差异无统计学意义(P>0.05)。4免疫组织化学检测Nrf2、Caspase-3和Caspase-12与TBI组相比，LC组和HC组Nrf2蛋白表达各时间点均高于TBI组，以12h（0.742±0.074，1.198±0.151，0.581±0.061）、24h（1.532±0.052，1.278±0.051，2.058±0.045）、3d（1.301±0.025，1.102±0.071，1.980±0.214）最为明显(P<0.05)。LC组和HC组各时间点比较差异均有统计学意义(P<0.05)，HC组明显高于LC组。Caspase-3蛋白表达，与TBI组相比，LC组和HC组除1h（0.353±0.026，0.350±0.028，0.347±0.021，P>0.05)外其他各时间点均低于TBI组，以12h（0.565±0.025，0.423±0.025，0.802±0.029）、24h（1.597±0.165，1.202±0.306，1.997±0.051）、3d（1.285±0.023，1.040±0.031，1.801±0.034）最为明显(P<0.05)。HC组明显低于LC组。Caspase-12蛋白表达，与TBI组相比，LC组和HC组除1（h0.451±0.033，0.432±0.106，0.443±0.102，P>0.05)外其他各时间点均低于TBI组，以12h（0.881±0.026,0.671±0.034,0.585±0.106）、24h（1.990±0.045，1.548±0.036，1.058±0.027）、3d（1.779±0.037，1.333±0.026，0.938±0.027）最为明显(P<0.05)。HC组明显低于LC组。5Western Blot测定胞浆、胞核Nrf2蛋白，caspase-3、caspase-12蛋白TBI组、LC组和HC组之间各时间点Nrf2核蛋白表达比较均有明显差异，以12h（1.056±0.027,1.173±0.018,1.287±0.018）、24h（1.415±0.041，1.619±0.029，1.840±0.028）、3d（1.087±0.038，1.257±0.196，1.427±0.021）最为明显(P<0.05)。且HC组高于LC组和TBI组，LC组也高于TBI组，差异均有统计学意义(P<0.05)。叁组之间各时间点胞浆Nrf2蛋白表达比较无明显差异，差异无统计学意义(P>0.05)。Caspase-3蛋白表达，TBI组、LC组和HC组叁组相比1（h0.557±0.031，0.555±0.024，0.547±0.102）无明显差异(P>0.05)，6h （1.242±0.039，1.139±0.103，1.033±0.005）开始有差别，以12h(1.662±0.121,1.385±0.028,1.237±0.018),24h （2.113±0.041，1.625±0.029，1.269±0.028）、3d(2.017±0.038，1.625±0.196，1.251±0.021)最为明显(P<0.05)。且HC组高于LC组和TBI组，LC组也高于TBI组，差异均有统计学意义(P<0.05)。Caspase-12蛋白表达，TBI组、LC组和HC组叁组相比1h（0.563±0.027，0.536±0.120，0.543±0.024）无明显差异(P>0.05)，6h(1.024±0.101，0.823±0.054,0.648±0.051)开始有差别，以12h(1.180±0.042,1.037±0.161,0.931±0.005),24h(1.359±0.045,1.225±0.024,1.147±0.057),3d(1.276±0.101,1.015±0.101,0.937±0.103)最为明显(P<0.05)。且HC组高于LC组和TBI组，LC组也高于TBI组，差异均有统计学意义(P<0.05)。6RT-PCR测定Nrf2mRNATBI组、LC组和HC组各时间点相比Nrf2mRNA表达无明显差异(P>0.05)。7TUNEL检测细胞凋亡结果显示，TBI组相比，LC组和HC组除1h（11.611±0.075，11.571±0.345，11.308±0.155，P>0.05)外其他各时间点均低于TBI组，以12h(42.310±0.024,39.658±0.241,36.376±1.024),24h(54.149±0.126,52.391±0.241,47.945±0.255),3d(48.307±0.260，45.319±0.132，42.486±0.321)最为明显(P<0.05)。HC组明显低于LC组。结论：1大鼠液压冲击脑损伤后，早期应用姜黄素可以激活Nrf2高表达，抑制神经细胞凋亡发挥神经保护作用。2高剂量姜黄素（100㎎/㎏）干预对液压冲击脑损伤的神经保护作用更明显。(本文来源于《河北医科大学》期刊2013-03-01）
张兴光,季泰令,王目纲[9]（2011）在《甲泼尼龙和地塞米松在治疗大鼠液压冲击脑损伤的对比研究》一文中研究指出目的研究甲泼尼龙琥珀酸钠和地塞米松在成年大鼠液压冲击脑损伤中的疗效比较。方法将29只SD大鼠随机分为两组,A创伤组(n=9)和B治疗组(n=20),B组又分为B1甲泼尼龙琥珀酸钠组(n=10)和B2地塞米松组(n=10)。利用液压冲击脑损伤装置建立液压冲击脑损伤模型,A组损伤后不给予特殊处理。B组于损伤1h、12h及24h分别给与腹腔注射甲泼尼龙琥珀酸钠和地塞米松。伤后72h干湿重法测定脑组织水含量,机械法制备单细胞悬液并用流式细胞术检测CD11b平均荧光强度。结果 B组脑组织含水量降低,而且B2高于B1组(P<0.05),各组CD11b表达高低与脑组织水含量趋势一致。结论与地塞米松比较,甲泼尼龙琥珀酸钠更有效降低脑水肿和小胶质细胞/巨噬细胞的过度激活。(本文来源于《柳州医学》期刊2011年02期）
张兴光,季泰令,王目纲[10]（2011）在《甲泼尼龙和地塞米松治疗大鼠液压冲击脑损伤的对比研究》一文中研究指出目的研究甲泼尼龙琥珀酸钠和地塞米松在成年大鼠液压冲击脑损伤中的疗效比较。方法将29只SD大鼠随机分为两组,A创伤组(n=9)和B治疗组(n=20),B组又分为B1甲泼尼龙琥珀酸钠组(n=10)和B2地塞米松组(n=10)。利用液压冲击脑损伤装置建立液压冲击脑损伤模型,A组损伤后不给予特殊处理。B组于损伤1 h、12 h及24 h分别腹腔注射甲泼尼龙琥珀酸钠和地塞米松。伤后72 h干湿重法测定脑组织水含量,机械法制备单细胞悬液并用流式细胞术检测CD11 b平均荧光强度。结果 B组脑组织含水量降低,而且B2高于B1组(P<0.05),各组CD11b表达高低与脑组织水含量趋势一致。结论与地塞米松比较,甲泼尼龙琥珀酸钠更能有效降低脑水肿和小胶质细胞/巨噬细胞的过度激活。(本文来源于《成都医学院学报》期刊2011年01期）
液压冲击脑损伤论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨大鼠液压冲击伤后水肿脑组织核因子2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1(NADPH quinineoxidoreductase-1,NQO-1)的表达变化及其意义。方法成年雄性SD大鼠56只制作液压冲击颅脑损伤模型,术后1 h、6 h、12 h、24 h、3 d、7 d用干湿质量法测定脑组织含水量,Western blot测定Nrf2胞浆、胞核蛋白以及HO-1、NQO-1蛋白;用实时荧光定量PCR测定Nrf2 mRNA表达。结果自冲击伤后6 h,脑组织含水量开始增加,24h达高峰,持续至3 d,然后开始下降(P<0.05)。组织学观察印证了脑水肿趋势。Western blot检测结果显示胞浆Nrf2蛋白于伤后12 h开始持续降低,而胞核Nrf2蛋白则于1h开始升高,24 h达到高峰,3 d时降低,7 d后明显降低,但仍高于NC组(P<0.05)。HO-1和NQO-1蛋白表达与胞核Nrf2蛋白趋势一致。实时荧光定量PCR显示TBI组术后各时间点Nrf2 mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。结论液压冲击伤后出现核因子Nrf2转位激活,可能通过上调HO-1、NQO-1蛋白表达发挥神经保护作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
液压冲击脑损伤论文参考文献
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[9].张兴光,季泰令,王目纲.甲泼尼龙和地塞米松在治疗大鼠液压冲击脑损伤的对比研究[J].柳州医学.2011
[10].张兴光,季泰令,王目纲.甲泼尼龙和地塞米松治疗大鼠液压冲击脑损伤的对比研究[J].成都医学院学报.2011