一、活性氧致精子运动参数变化的观察（论文文献综述）
张继伟[1]（2021）在《金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究》文中进行了进一步梳理背景:全球约有7240万人受生育问题的困扰,特发性弱精子症占24%～30%。目前现代医学治疗特发性弱精子症存在一定局限性,缺乏针对病因的治疗,而中医药在治疗特发性弱精子症方面有一定优势。金龟毓麟方为中国中医科学院西苑医院男科经验方,具补肾填精,疏肝通络功效,对特发性弱精子症（肾虚肝郁型）具有一定疗效,但未对其有效性与安全性进行系统评价,其作用机制亦尚未明确。故设计本课题以验证其有效性与安全性及可能作用机制。本研究分为以下3个部分:研究1金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的有效性与安全性临床研究目的:评价中药复方金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的有效性与安全性。方法:本研究为随机、对照试验,共纳入患者124例,均于2019年12月-2020男12月就诊于中国中医科学院西苑医院男科门诊,均符合特发性弱精子症（肾虚肝郁型）的纳排标准。采用SAS软件产生随机编码,按1:1随机分为试验组（62例）和对照组（62例）。试验组给予金龟毓麟方（制龟甲15g、郁金12g、柴胡12g,熟地黄15g、鹿角胶6g、菟丝子10g、覆盆子10g、生麦芽12g、鸡血藤10g、炙甘草6g）。服用方法:每日2次,一次1袋。对照组给予左卡尼汀口服液（国药准字:H19990372）,服用方法:每次10ml,每日3次。两组用药12周,随访4周。主要疗效指标包括前向运动精子（PR）、精子总活力（PR+NP）;次要疗效指标包括中医证候评分、精子浓度、精液量、受孕率。安全性指标包括血常规、尿常规、肝肾功能（ALT、AST、BUN、CREA）、心电图,入组前和观察完成后各检查一次。结果:本研究共入组患者124例,共脱落11例,其中试验组脱落4例,对照组脱落7例,总脱落率为8.87%。本研究有效性分析只针对符合方案集（PPS）数据进行统计分析。1.主要疗效指标:（1）PR级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后PR级精子活力改变无统计学差异（P>0.05）:治疗8周、12周后可提高PR级精子活力（P<0.05）。与治疗前比较,试验组在治疗4周、8周、12周后均可显着提高PR级精子活力（P<0.05）。②同时期组间比较:与对照组比较,试验组治疗4周后在提高PR级精子活力方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后,在提高PR级精子活力方面优于对照组（P<0.05）。（2）PR+NP级精子:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周后在提高PR+NP级精子方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后可提高PR+NP级精子活力（P<0.05）。与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后均可提高PR+NP级精子活力（P<0.05）。②同时期组间比较:与对照组比较,治疗4周后试验组在提高PR+NP级精子方面无统计学差异（P>0.05）;治疗8周、12周后试验组在提高PR+NP级精子方面均优于对照组（P<0.05）。2.次要疗效指标:（1）中医证候评分:①组内比较:与治疗前比较,对照组治疗4周、8周、12周后,在降低中医证候评分方面均无统计学差异（P>0.05）;与治疗前比较,试验组治疗4周、8周、12周后可显着降低中医证候评分（P<0.05）。②同时期组间比较:试验组治疗4周、8周、12周后在降低中医证候评分方面均优于对照组（P<0.05）。（2）精液量:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精液量方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精液量方面无统计学差异（P>0.05）。（3）精子浓度:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在改善精子浓度方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在改善精子浓度方面无统计学差异（P>0.05）。（4）受孕率:①组内比较:与治疗前比较,对照组与试验组分别在治疗4周、8周、12周后,在受孕率方面均无统计学差异（P>0.05）;②同时期组间比较:与对照组比较,试验组分别治疗4周、8周、12周后在受孕率方面无统计学差异（P>0.05）。3.安全性评价:本研究共发生7例轻度不良事件,其中试验组发生4例,对照组3例,以上不良事件均为轻度,不适症状在给予指导服用方法后自行缓解,未见不良反应。两组血常规、尿常规、肝肾功能（ALT、AST、BUN、CREA）、心电图均未见明显异常。结论:金龟毓麟方在提高特发性弱精子症PR级和PR+NP级精子活力及降低中医证候评分方面均优于左卡尼汀口服液,且未见明显不良反应,表明金龟毓麟方在治疗肾虚肝郁型特发性弱精子症方面安全有效。研究2金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型大鼠的药效学研究目的:观察金龟毓麟方对奥硝唑（Omidazole,ORN）诱导的弱精子症模型大鼠精液质量、睾丸和附睾重量及病理形态、性激素、肝肾功能的影响。方法:将60只雄性SPF级SD大鼠进行编号,采用随机数字表法将其随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组（低剂量组、中剂量组、高剂量组）、左卡尼汀组每组各10只。空白组给予1mL/100g 0.5%的CMC-Na溶液;模型组;400mg/（kg·d）ORN;金龟毓麟方低剂量组:4.9g 生药/kg·d+400 mg/（kg.d）ORN;金龟毓麟方中剂量组:9.7g生药/kg·d+400mg/（kg·d）ORN;金龟毓麟方高剂量组:19.4g 生药/kg.d+400mg/（kg.d）ORN;左卡尼汀组 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN。灌胃时间:实验组上午给予400mg/（kg.d）ORN,下午给予金龟毓麟方浓缩液,灌胃28天。末次给药断食24小时后,腹腔麻醉称体重,取睾丸及附睾称重,计算附睾、睾丸系数。左侧附睾尾部制备附睾匀浆,温浴评估精子活力。大鼠右侧附睾、睾丸固定染色。腹主动脉取血,采用酶联免疫吸附法及生化分析仪分别测定性激素（FSH、LH、T）、肝肾功（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）。结果:1.大鼠一般情况:空白组大鼠饮食无明显改变,体毛浓密光泽,活动度良好,精神状态可,大小便无明显异常。模型组大鼠饮食减少、体毛疏松,光泽度下降,活动度方面部分可见少动、运动迟缓,精神倦怠、萎靡或见易怒,大便稀溏,小便色黄。左卡尼汀组大鼠饮食增加,精神状态较好,活动灵敏,小便颜色正常,大便偶有偏稀。金龟毓麟方组各大鼠饮食较模型组食量增加,体毛疏松但有光泽、活动度较模型组运动量增加,精神状态较模型组灵敏、部分可见易怒现象,大便质地好转,小便颜色恢复正常。中、高剂量组精神状态和饮食量较低剂量组改善明显。2.金龟毓麟方对大鼠精子质量的影响:（1）大鼠精子活力:与模型组比较,中剂量组、高剂量组、左卡尼汀组在提高PR级精子、PR+NP级精子活力方面均有统计学差异（P<0.05）。高剂量组在提高PR+NP级精子方面优于左卡尼汀组（P<0.05）。（2）大鼠精子浓度:各组与模型组比较大鼠精子浓度改变均无统计学差异（P>0.05）。3.大鼠睾丸、附睾重量及脏器指数变化:（1）大鼠睾丸变化情况:各组与模型组比较大鼠睾丸重量、睾丸系数改变均无统计学差异（P>0.05）。（2）大鼠附睾变化情况:与空白组比较,模型组附睾重量、附睾脏器系数下降（P<0.05）。与模型组比较,金龟毓麟方高剂量组可增加附睾重量与附睾系数（P<0.05）。4.金龟毓麟方对大鼠肝肾功的影响:各组与模型组比较大鼠肝肾功能（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）改变均无统计学差异（P>0.05）。结论:1.400 mg/（kg·d）ORN灌胃28天,对大鼠体重、睾丸重量及脏器指数、精子浓度无明显影响,但可引起附睾损伤,造成大鼠精子活力下降。2.金龟毓麟方可改善ORN诱导的弱精子症大鼠附睾损伤,提高大鼠精子活力,对大鼠肝肾功能（ALT、AST、UREA、BUN、CREA）及性激素（FSH、LH、T）无明显影响,初步验证了金龟毓麟方治疗弱精子症的有效性与安全性。研究3 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制目的:从Pink1/Parkin信号通路介导的线粒体自噬角度探讨金龟毓麟方治疗弱精子症的机制,进一步揭示ORN所致弱精子症大鼠的机制以及金龟毓麟方的保护作用。方法:将40只大鼠随机分为空白组、模型组、金龟毓麟方组（低剂量组、高剂量组）,灌胃取材等同研究2。精子氧化应激检测采用SOD、MDA及GSH-Px活性检测试剂盒检测;精子线粒体功能检测采用JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测;采用ATP含量检测试剂盒检测精子线粒体ATP含量。精子线粒体自噬相关指标检测:采用Real-time PCR和Western Blot检测精子Pink1、Parkin、p62 和 LC3 Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1 mRNA 及蛋白表达水平。结果:1.精子氧化应激指标变化:与空白组比较,模型组大鼠附睾精子中MDA含量升高（P<0.01）,SOD与GSH-Px含量降低（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组大鼠附睾精子中MDA含量均降低（P<0.05）,SOD与 GSH-Px 含量均升高（P<0.05,P<0.01）。2.大鼠精子线粒体功能指标变化:（1）线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）:与空白组比较,模型组精子线粒体MMP下降明显,精子早期凋亡率增加（P<0.01,P<0.001）;与模型组比较,金龟毓麟方各组可升高MMP,降低精子早期凋亡率（P<0.05,P<0.01）。（2）线粒体ATP:与空白组比较,模型组精子线粒体ATP含量显着降低（P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组提高精子线粒体ATP方面无统计学差异（P>0.05）;高剂量组可提高精子线粒体ATP含量（P<0.01）。3.线粒体自噬相关指标变化:（1）与空白组比较,模型组大鼠Pink1 mRNA及蛋白表达增加（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组可降低Pink1mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（2）与空白组比较,模型组大鼠Parkin mRNA及蛋白表达均增加（P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低、高剂量组可降低Parkin mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（3）与空白组比较,模型组大鼠p62 mRNA及蛋白表达降低（P<0.01,P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组可增加p62 mRNA及蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。（4）与空白组比较,模型组大鼠LC3 mRNA及LC3 Ⅱ/Ⅰ蛋白表达增加（P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组LC3 mRNA及LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）。（5）与空白组比较,模型组大鼠TOM20 mRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.01）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量组、高剂量组TOM20 mRNA表达增加（P<0.05,P<0.01）;低剂量组TOM20蛋白表达增高（P<0.05）。（6）与空白组比较,模型组大鼠Beclin 1mRNA及蛋白表达增加（P<0.05,P<0.001）。与模型组比较,金龟毓麟方低剂量、高剂量组BeclinlmRNA及蛋白表达降低（P<0.05,P<0.001）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN诱导的弱精子症大鼠可能通过氧化应激损伤,引起线粒体 MMP 与 ATP 下降,导致 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、BeclinlmRNA 及蛋白表达上调,p62、TOM20mRNA及蛋白表达下调,提示ORN通过氧化应激损伤引起线粒体功能障碍,导致精子线粒体自噬激活。2.金龟毓麟方可减轻弱精子症大鼠精子氧化应激损伤,提高精子线粒体MMP 与 ATP 水平,下调 Pink1、Parkin、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1mRNA 及蛋白表达,上调p62、TOM20mRNA及蛋白表达,提示金龟毓麟方通过抑制Pink1/Parkin线粒体自噬通路改善精子活力。
徐冰冰[2]（2021）在《基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究》文中研究表明内蒙古绒山羊是我国重要的地方种质资源。优秀种公羊冷冻精液的生产推广,能够提高种公畜的利用效率,加速育种工作进程,为生产带来更高的经济效益。但内蒙古绒山羊冷冻精液活力不稳定,情期受胎率低,解冻后精液品质具有明显的个体抗冻性差异。为了建立一种高效的内蒙古绒山羊精液冷冻保存体系,本研究以内蒙古绒山羊为研究对象,采集精液,利用统一的冷冻解冻程序进行精液抗冻性筛选,并将其分为高抗冻组（High Freezability,HF）和低抗冻组（Low Freezability,LF）,初步评估精子和精浆对内蒙古绒山羊精液抗冻性的影响。对内蒙古绒山羊HF组和LF组精浆进行蛋白质组-代谢组学联合分析,鉴定精浆中影响精液抗冻性的可能因素,其次利用脂质组学分析方法对内蒙古绒山羊HF组与LF组解冻后精子进行脂质差异表征。主要研究结果如下:（1）内蒙古绒山羊精液在冷冻-解冻后呈现抗冻性的个体差异,HF组冷冻解冻后精子各项运动参数以及结构完整性均显着高于LF组。精子和精浆的差异会影响精液抗冻性。（2）利用TMT（Tandem mass tags）标记定量蛋白质组学分析技术,从蛋白水平检测到HF组和LF组精浆间差异显着表达的蛋白质115个,HF组精浆中上调的蛋白质44个,LF组中上调的蛋白质71个。差异蛋白质GO（Gene Ontology）功能富集到22个生物学过程,14个细胞组分,10个分子功能。通过KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路分析,115个差异蛋白覆盖91条通路。差异表达蛋白中UQCRC1、DNAH1、APOA1、ADAM32、HTT、CADM1、STIP1是内蒙古绒山羊精液抗冻性的潜在生物标记。（3）利用非靶向代谢组学分析技术,从代谢水平检测HF组和LF组精浆间的差异,在正、负离子电离模式下均能很好地将HF组与LF组精浆区分,二者具有明显代谢差异。在正离子模式下鉴定到HF组与LF组间差异代谢物23种,在负离子模式下鉴定到HF组与LF组间差异代谢物18种,富集到17条代谢通路。变量权重值（Variable Importance for the Projection,VIP）最大的前15种差异代谢物是柠檬酸盐、Pro-Arg、酮异己酸、乙酰肉碱、L-谷氨酰胺、次黄嘌呤、L-焦谷氨酸、20-羟基-前列腺素F2a、15-酮-前列腺素E1、L-亮氨酸、酪胺、泛酸、油酸、L-苯丙氨酸和二氢胸腺嘧啶,这些代谢物可以作为内蒙古绒山羊精液抗冻性的潜在生物标记。（4）通过蛋白质组-代谢组学联合分析将得到的差异蛋白质和差异代谢物同时向KEGG通路投射,富集到11条通路,差异蛋白质和差异代谢物在矿物质吸收通路上显着富集,其中包含的差异蛋白为LOC102172488和FTH1,差异代谢物分别是L-谷氨酰胺、L-苯丙氨酸和L-亮氨酸。差异蛋白质TF与LOC102172488具有较高的序列一致性,且TF与FTH1均富集在矿物质吸收通路。TF与FTH1在HF组与LF组解冻后精子中均有表达,且LF组中TF蛋白的表达量显着高于HF组,HF组精子中FTH1蛋白的表达量显着高于LF组。检测HF组与LF组精浆中矿物离子的含量,发现HF组精浆中Fe2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Cr3+含量显着高于LF组。说明Fe的转运、氧化及储存可能影响内蒙古绒山羊精液抗冻性,且精浆中Fe2+、Zn2+、Ca2+、Mg2+、Cr3+的浓度与精液抗冻性有关。（5）利用非靶向脂质组学分析内蒙古绒山羊HF组与LF组冷冻解冻后精子的脂质特征。在正、负离子电离模式下,HF组和LF组精子均能很好的区分,说明两者间存在差异显着的脂质特征。共鉴定到29个脂质亚类,1133个脂质分子,检测到显着差异脂质分子13个,分别其中3个属磷脂酰胆碱亚类（Phosphatidylcholine,PC）,10个属甘油三酯亚类（Triglyceride,TG）。说明精子膜上PC分子和TG分子能够显着影响内蒙古绒山羊精子冷冻耐受性。本研究为阐明内蒙古绒山羊精液抗冻性调控机制,基于多组学联合分析分别研究精浆和精子对抗冻性的影响。发现精子和精浆中均存在影响精液抗冻性的因素,并筛选到精浆中影响精液抗冻性的潜在生物标记,且精浆中矿物质离子含量与抗冻性有关;精子的脂质差异是影响解冻后精子活力的关键。通过以上研究,期望对内蒙古绒山羊精液抗冻性有更好的认识,为提高解冻后精液品质,建立内蒙古绒山羊精液冷冻保存体系提供理论依据。
杨梓涵[3]（2021）在《精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6与精子运动能力及体外受精结局的相关性分析》文中研究指明目的:验证活性氧（ROS）对精子的损伤作用及对精子抗氧化蛋白超氧化物歧化酶2（SOD2）和过氧化物酶6（PRDX6）表达的影响;探究SOD2和PRDX6与弱精症发生和体外受精（in vitro fertilization,IVF）结局的相关性。背景:世界范围内约有六分之一的夫妇受到不孕不育的困扰,且男方因素约占50%。研究表明ROS是男性不育的重要影响因素,过量水平的ROS可损伤精子功能。精子中的抗氧化蛋白SOD2和PRDX6被证明在抵抗ROS的损伤中起到重要作用,但仍然没有足够的临床数据对SOD2和PRDX6与弱精症发生以及IVF的关系进行阐明。我们推测弱精症患者精子运动功能障碍可能与其精子中抗氧化蛋白SOD2和PRDX6的变化有关,且两者在精子中的表达变化可能影响IVF结局。本研究有助于寻找弱精症的发病机制,为临床治疗弱精症,提高体外受精成功率提供实验证据和理论依据。研究方法:1.外源性H2O2处理正常精子,检测精子活力及存活率的变化及对胞内ROS水平和精子细胞凋亡的影响,验证ROS对精子运动能力的损伤作用,以及对精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6表达的影响;2.于重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心收集弱精症患者精液标本（PR<32%,PR+NP<40%,精子密度>15×106/ml）共84例,精子活力正常精液对照标本（PR>32%,PR+NP>40%,精子密度>15×106/ml）共55例。运用计算机辅助分析系统（computer-aided sperm analysis,CASA）检测精液常规参数及精子运动参数;运用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q RT-PCR）和Western Blot同时对精子中SOD2和PRDX6进行定量检测,进一步统计分析SOD2和PRDX6的表达与与精液参数的相关性,并探讨其临床意义。在此基础上利用生物信息学工具预测并验证调控PRDX6的mi RNA,探讨精子中PRDX6的下调机制。3.于重庆医科大学附属第一医院生殖医学中心收集接受IVF治疗患者取卵当天男方精液标本62例。q RT-PCR检测精子SOD2和PRDX6的表达,分析SOD2和PRDX6的表达与IVF结局的相关性并探讨其临床意义。研究结果:1.外源性H2O2处理优选正常精子标本后,精子细胞ROS水平增加,活力和存活率下降,凋亡数量增加,精子各项运动参数呈剂量依赖式下降,表明高浓度的ROS对精子具有毒性损伤作用,可损伤精子运动能力,通过促进精子凋亡使精子存活率下降。精子的抗氧化蛋白SOD2和PRDX6在外源性H2O2刺激后剂量依赖式上调,表明SOD2和PRDX6可被高水平ROS上调而发挥抗氧化作用。2.弱精症患者精子中SOD2和PRDX6m RNA和蛋白水平的表达均低于正常对照,且SOD2和PRDX6m RNA与精子活力有相关性,PRDX6m RNA表达具有预测精子运动能力的潜能。弱精症患者精子mi R-24-3p表达高于正常且与PRDX6蛋白表达及精子活力呈负相关。3.IVF受精率低下患者精子SOD2和PRDX6m RNA表达水平相较正常受精患者降低。结论:本研究验证了ROS对精子的损伤作用,并且证实了ROS可以上调精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6的表达。临床标本数据显示SOD2和PRDX6在弱精症患者精子中表达下调,我们推测正是这两种抗氧蛋白的表达下调导致精子更容易受到ROS的攻击而造成精子运动功能受损,引发弱精症。而mi R-24-3p可能靶向负调控PRDX6的表达而参与弱精症的发生。相关性分析结果提示PRDX6具有预测精子运动能力的潜能。SOD2和PRDX6表达下调影响精子体外受精能力,提示了其抗氧化作用对体外受精过程中的精子仍是不可或缺的。本研究为阐释弱精症的发病机制和IVF失败的原因提供了新的实验数据和理论依据。
常征辉[4]（2021）在《益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究》文中研究表明少弱精子症是常见的男性不育疾病之一,其发病率在近些年逐年升高,亟需安全有效的治疗手段。西医治疗本病存在一定的局限性,疗效欠佳,中医药在男性不育的防治方面有独特优势。益肾兴阳胶囊作为一种中成药,早期主要用于治疗阳痿早泄,现在越来越广泛地用于治疗少弱精子症,因此研究并揭示益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的作用机制具有重要意义。然而,目前尚未对其整体的药效机理形成全面的认识,为此迫切需要有效的研究思路和方法来对其药效物质基础及作用机制进行研究,指导临床安全、合理地用药。论文包括文献综述、网络药理学预测和实验研究。文献综述系统总结了近年来中医药对少弱精子症的研究进展,探讨了传统中医药对少弱精子症的认识、中医辨证分型、中药复方研究等进展;从现代医学角度探讨了少弱精子症的病因、睾丸生精功能的调控机制、治疗方法等。以上内容的探讨,为本课题顺利开展做了铺垫。研究目的:本研究拟通过网络药理学预测益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键靶点、生物通路等相关机制,为动物实验药效机制研究奠定基础。设计动物实验,观察益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型精子质量、生精细胞凋亡、增殖分化、以及精子能量代谢的影响,阐述其作用机制,为益肾兴阳胶囊组方用药及作用机制提供实验探索。研究方法:1.网络药理学通过多个中药成分与靶标数据库收集和筛选益肾兴阳胶囊的化学成分,构建益肾兴阳胶囊作用靶点PPI网络（protein protein interaction network,PPI network）;同时从疾病基因数据库对少弱精子症靶点进行检索及筛选;并将疾病基因映射到PPI网络,获取益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键作用靶点;构建益肾兴阳胶囊来源中药-成分-靶点-模块-通路网络,通过富集分析预测益肾兴阳胶囊的潜在作用机制。2.实验研究。复制环磷酰胺诱导的少弱精子症小鼠模型,采用精液分析、电镜、流式细胞、Western Blot等方法,对正常组、模型组、益肾兴阳胶囊高、中、低剂量组、枸橼酸氯米芬对照组、万艾可对照组、汇仁肾宝对照组进行精子质量、精子腺嘌吟核苷三磷酸（Adenosine triphosphate,ATP）含量、生精细胞周期、睾丸超微结构、睾丸组织 B 细胞淋巴瘤-2 基因（B-cell lymphoma 2,Bcl-2）、Bcl-2 相关 X 蛋白（Bcl-2 Associated X Protein,Bax）、磷脂酶肌醇 3-激酶（Phosphatidylinositol-3-kinase,PI3k）、蛋白激酶B（Protein kinase B,Akt）、干细胞因子（Stem Cell Factor,SCF）、C-Kit 原癌基因（C-Kit proto-oncogeneprotein,C-Kit）、A 细胞凋亡信号调节激酶 1（Apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1）、c-JunN 端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）表达的检测。复制雷公藤多苷诱导的少弱精子症大鼠模型,采用精液分析、ELISA、流式细胞、RT-PCR等方法,对正常组、模型组、益肾兴阳胶囊高、中、低剂量组、枸橼酸氯米芬对照组、万艾可对照组、汇仁肾宝对照组进行精子质量、性激素水平、线粒体膜电位、睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路蛋白、电压依赖性阴离子通道2（Voltage-dependent anion channel 2,VDAC2）、电压依赖性阴离子通道 3（Voltage-dependent anion channel 3,VDAC3）、细胞周期检查点激酶 1（Cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1）、细胞周期检查点激酶 2（Cell cycle checkpoint kinase 2,CHK2）蛋白表达的检测。研究结果:1.网络药理学共得到益肾兴阳胶囊418个化学成分、2447个靶点和少弱精子症134个致病基因;其中17个靶点为益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的关键作用靶点,它们参与了 8个关键模块;中药-成分-靶点-模块-通路网络分析发现,其中有57个成分参与调控了关键的作用靶点和关键模块,有可能影响生精细胞凋亡、增殖分化和精子能量代谢。2.动物实验首先模型建立成功,与正常对照组相比,模型动物少弱精子症成立。小鼠实验药效学研究显示,益肾兴阳胶囊可以改善少弱精子症小鼠模型精子质量和精子ATP含量（P<0.01）;睾丸组织超微结构与模型组相比,益肾兴阳胶囊各组生精细胞、支持细胞线粒体明显增多,轻微肿胀,并且可见正常形态高尔基体,睾丸超微结构改善明显。作用机制研究显示,益肾兴阳胶囊可以调控少弱精子症小鼠模型生精细胞周期、睾丸组织Bcl-2、Bax、PI3k、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK 蛋白表达（P<0.05）。大鼠实验药效学研究显示,益肾兴阳胶囊可以改善少弱精子症大鼠模型精子质量、性激素水平和精子线粒体膜电位（P<0.05）。作用机制研究显示,益肾兴阳胶囊可以调控少弱精子症大鼠模型睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路、VDAC2、VDAC3、CHK1、CHK2蛋白表达（P<0.05）。通过动物实验,验证了网络药理学相关的生物学通路预测。研究结论:1.益肾兴阳胶囊可以显着提高少弱精子症模型精子质量并改善睾丸组织超微结构损伤情况。2.益肾兴阳胶囊可以抑制少弱精子症模型生精细胞凋亡,具体机制可能与调控 Bcl-2、Bax、PI3k、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK 蛋白表达有关。3.益肾兴阳胶囊可以改善睾丸的生精功能,促进生精细胞增殖分化,具体机制可能与调控TGF-β1/Smads信号转导通路以及CHK1、CHK2蛋白表达有关。4.益肾兴阳胶囊可以增强少弱精子症模型精子能量代谢,具体机制可能与提高线粒体膜电位、增强VDAC2、VDAC3蛋白表达有关。综上所述,本研究证实了益肾兴阳胶囊具有补肾精、促生殖的治疗效果,也揭示了益肾兴阳胶囊通过抑制生精细胞凋亡、促进生精细胞增殖分化、增强精子能量代谢治疗少弱精子症的相关作用机制。
刘欢[5]（2021）在《端粒长度及其关联基因多态性对精液质量的影响》文中提出背景近年来,不孕不育在适龄夫妻中的比例越来越高,其中由男性因素导致的不育约占4060%,目前临床上评估男性生殖健康缺乏更为敏感的生物标志物。精子发生过程中精子端粒长度保持不变来维持精子染色体的稳定性,端粒长度的变化与男性精液质量间存在相关性。端粒长度改变可能成为新的和易于衡量的生物标志物,用以检测男性生殖损伤。目的了解目前河南省濮阳市育龄男性精液质量的水平,分析相对端粒长度与男性精液质量的关系,评估其作为男性生殖损伤生物标志物的可能性,研究相关遗传因素与相对端粒长度之间的关联性。方法研究对象来源于濮阳市妇幼保健院生殖健康中心就诊和体检的男性,采用计算机辅助精子分析技术、聚合酶链反应、实时荧光定量PCR方法和限制性片段长度多态性方法,分析了其相对端粒长度及其关联基因多态性对精液质量的影响。结果1.精液质量相关结果随着年龄增大精液量、精子总数、前向运动精子百分率、总活力百分率、前向运动VSL大于35μm/s精子百分率基本呈下降趋势;随BMI增加鞭打频率总体呈下降趋势;饮酒组曲线速度、直线速度、平均路径速度、精子头侧摆幅度高于非饮酒组。2.GSTT1、GSTM1基因缺失与精液质量的分析经单因素Logistic回归分析,GSTM1基因是前向运动精子百分率（OR=1.68,95%CI:1.082.61）的保护因素,GSTT1基因是精子总活力百分率（OR=1.75,95%CI:1.082.83）的保护因素。3.相对端粒长度与精液质量的分析经Spearman相关分析,相对端粒长度与精子总数、精子浓度、前向运动精子百分率、直线速度存在正相关性,与精子畸形指数、颈部缺陷参数之间存在负相关性。经线性回归分析,端粒长度与精子总数（β=2.03（0.08,3.99）,P<0.05）间具有正相关关系。4.基因多态性与端粒长度的分析经多重线性回归分析,POT1 rs1034794基因型AT（β=-7.81（-13.40,-2.21）,P<0.05）、TT（β=-9.51（-15.39,-3.63）,P<0.05）相对于AA端粒长度更短,TERT rs2735940基因型TT（β=4.92（0.04,9.79）,P<0.05）相对于CC端粒长度更长,TERC rs2293607基因型GG（β=-4.56（-8.86,-0.26）,P<0.05）相对于CC端粒长度更短。5.基因多态性与精液质量的分析经单因素Logistic回归分析,POT1 rs1034794基因型AT（OR=3.21,95%CI:1.109.37）、TT（OR=3.90,95%CI:1.3711.15）相对于AA和POT1 rs10250202基因型CC（OR=5.17,95%CI:1.4418.53）相对于AA与前向运动精子百分率的增加相关;POT1 rs10250202基因型CC（OR=5.05,95%CI:1.0823.53）相对于AA与总活力百分率的增加相关。6.辣椒饮食对精液质量的保护因素单因素二分类Logistics回归分析发现,在调整年龄、吸烟、饮酒和BMI后食物辣度、食辣时间、每周吃辣频率、每月吃辣频率是精液质量参数的保护因素。多因素Logistics回归分析发现,在调整年龄、吸烟、饮酒和BMI后食辣时间是精子总数和精子浓度的保护因素。结论1.随着年龄的升高男性精液基本参数下降,随BMI的增加精子鞭打频率下降。2.GSTM1基因是前向运动精子百分率的保护因素,GSTT1基因是精子总活力百分率的保护因素。3.基因多态性可能通过改变端粒长度从而导致精液质量的改变。4.食物辣度、食辣时间、每周吃辣频率、每月吃辣频率与男性精液基本参数和精子运动参数存在正相关性。
孟雪丹[6]（2020）在《五子衍宗丸的生精作用及分子机制研究》文中研究指明近年来男性不育的发病率呈不断上升趋势,五子衍宗丸是中医治疗少弱精子症的经典名方,在治疗男性不育方面具有广泛的临床应用,被誉为古今种子第一方。治疗男性不育、改善男性精子质量已成为亟需解决的社会问题。然而由于中药的多成分多靶点,五子衍宗丸的作用机制尚不明确,因此,本研究首先建立白消安致少弱精症的小鼠模型,给与模型动物五子衍宗丸,通过睾丸组织病理分析、精子质量和生育能力评价五子衍宗丸的生精作用,在此基础上进一步应用基因芯片技术,分析五子衍宗丸对少弱精症小鼠基因表达谱的影响,进而探讨五子衍宗丸的生精作用的分子机制,以期为五子衍宗丸的开发和临床应用提供基础性参考。目的:建立少弱精症的动物模型,评价五子衍宗丸对少弱精症动物模型的影响,进一步探讨其治疗少弱精症的分子机制。方法:（1）实验动物分组及给药:分为正常对照组、少弱精症组、阳性药丙酸睾酮组、五子衍宗丸治疗组共四组,其中模型组给与腹腔注射白消安,建立少弱精症模型,阳性药对照组给与丙酸睾酮注射液;（2）测定小鼠睾丸和附睾的脏器指数、分析睾丸的HE染色组织切片;（3）利用全自动小鼠精子分析系统对小鼠精子数量和活力进行评价和测定;（4）通过与雌性小鼠合笼后雌鼠产仔数目对雄鼠生育能力进行评价;（5）通过基因芯片得到小鼠睾丸的基因表达谱,从分子层面探讨五子衍宗丸可能的作用机制。结果:（1）给小鼠腹腔注射20 mg/kg的剂量的白消安,经精子数量和活性检测,造模成功;（2）模型组小鼠睾丸脏器指数较正常组比下降,五子衍宗丸组小鼠睾丸脏器指数趋近于正常对照组,HE染色结果显示,模型组小鼠生精小管不完整,精原细胞比例减少,五子衍宗丸组小鼠生精小管、生殖细胞比例较模型组相比更加紧密,数量增多,体现了药物的恢复作用;（3）客观评价了各组小鼠的精子质量,五子衍宗丸体现出对精子活力和数量的修复作用;（4）五子衍宗丸雌鼠产仔数接近正常组,模型组和阳性药组产仔数较低;（5）通过基因芯片测序和生物信息学挖掘,推测五子衍宗丸主要是通过调节生精细胞的减数分裂、睾丸HR信号通路、睾丸RAS信号通路、睾丸胆固醇代谢通路等影响精子生成及睾丸生精功能,从而对少弱精症起到治疗作用。结论:本研究对首先成功建立了少弱精症的动物模型,并对五子衍宗丸的生精作用展开了系统的研究,评价了正常小鼠、少弱精症小鼠、五子衍宗丸给药后小鼠的精子运动活力参数,对四组小鼠进行了生育能力实验,从源头到最终受孕等多方面对精子的质量进行了考察,最后应用基因芯片测序技术,对小鼠睾丸细胞的基因表达水平进行检测,从基因表达层面探讨了五子衍宗丸改善精子质量的分子机制,为五子衍宗丸的进一步研究提供了基础数据。
杨雪梅[7]（2020）在《强精片对弱精子症大鼠精子线粒体功能影响的实验研究》文中指出目的:通过观察强精片对奥硝唑所致的弱精子症SD大鼠精子线粒体膜蛋白PHB表达、膜电位MMP水平和精子早期凋亡率的影响,深入探讨强精片对精子线粒体功能的影响及改善弱精子症大鼠精子活力的作用机制,为进一步揭示强精片的作用原理提供科学依据。方法:取50只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为强精片高剂量组、强精片中剂量组、强精片低剂量组、模型组和空白组,每组10只。各实验组分别给予0.02g/ml浓度的奥硝唑混悬液1ml/（100g·d）灌胃,空白组给予1%羧甲基纤维素钠溶液1ml/（100g·d）灌胃,连续3周灌胃构建大鼠弱精子症模型。第4周开始,强精片高、中、低剂量组在灌胃奥硝唑混悬液前分别予以浓度为0.67g/ml、0.33g/ml、0.17g/ml的强精片混悬液1ml/（100g·d）灌胃,连续3周。整个实验过程中大鼠无死亡情况发生。于末次灌胃24h后,用25%乌拉坦腹腔注射麻醉成功后,打开腹腔,快速剥离双侧大鼠睾丸、附睾,留取附睾后断头处死大鼠。采用计算机精子质量检测系统进行精液常规分析（精子活力、密度）;Westem blot免疫印迹实验检测附睾精子线粒体膜蛋白PHB相对表达量;JC-1单标法检测精子线粒体膜电位MMP水平;流式细胞术检测精子的早期凋亡率。结果:（1）与空白组对比,模型组的A级、B级精子百分比、精子活力（A+B级精子百分比）以及精子密度较空白组表现出明显下降,有统计学差异（P<0.05）;与模型组对比,强精片低剂量组的B级精子百分比、精子活力和强精片中、高剂量组的A级、B级精子百分比及精子活力较模型组显着改善,有统计学差异（P<0.05）,但强精片低、中、高剂量组的精子密度改善程度无统计学差异（P>0.05）。（2）与空白组对比,模型组的PHB表达量明显减少,有统计学差异（P<0.05）;与模型组对比,强精片低、中、高剂量组PHB表达显着增加,有统计学差异（P<0.05）,并随着强精片剂量增加,PHB表达量越高。（3）与空白组对比,模型组MMP水平显着下降,有统计学差异（P<0.01）;与模型组比较,强精片中、高剂量组的MMP明显恢复,有统计学差异（P<0.05）,而强精片低剂量组的M MP未见明显恢复,无统计学差异（P>0.05）。（4）与空白组对比,模型组精子早期凋亡率明显降低,有统计学差异（P<0.01）;与模型组对比,强精片中、高剂量组的精子早期凋亡率明显降低,有统计学差异（P<0.05）,而强精片低剂量组的精子早期凋亡率未见明显降低,无统计学差异（P>0.05）。结论:强精片能明显改善奥硝唑所致的弱精子症大鼠的精子活力,其分子生物学机制可能是通过提高精子线粒体膜蛋白PHB表达量,稳定线粒体膜电位M MP水平、减少精子早期凋亡率,进而改善精子线粒体功能,恢复精子运动能力,达到治疗弱精子症的目的。
晏斌[8]（2020）在《灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究》文中提出背景:2010年世界卫生组织（World Health Organization,WHO）估计全世界大约有4850万对夫妇（8～12%）患有不孕不育,其患病率因国家和地区而异,男性因素所致生育问题的分布在20%～70%之间,精子数量少、形态异常、运动能力差是与男性因素相关的常见原因。随着世界范围内男性不育症的不断增多,它已成为一个越来越引起临床重视的健康问题。目前西医治疗男性不育症主要方式为药物治疗、手术及辅助生殖技术,但是存在疗效不确定、造成侵入性损害、价格高,或伴随不良反应和其他高风险的问题,使得男性不育症患者寻求其他治疗策略。随着中医药研究的发展,中医药成为男性不育症治疗中重要的方法之一,提供了安全、有效的治疗选择。灵归方为中国中医科学院西苑医院男科经验处方,由仙灵脾、当归、熟地黄、山药等13味药组成,具有补肾、活血的功效,前期临床研究发现灵归方有提高弱精子症患者精子活动率的作用,但其具体作用机制不明,故设计本研究以阐明灵归方改善精子活动率的可能机制。实验分为两部分,第一部分为探索使用奥硝唑（Ornidazole,ORN）制备弱精子症动物模型,观察不同剂量（200,400,800 mg/（kg·d））的ORN对于雄性SD大鼠精子浓度、活动率的影响;第二部分为保护性实验,设置对照组、模型组、灵归方组、左卡尼汀组,综合评价灵归方对弱精子症模型大鼠精液质量、附睾左旋肉碱（L-carnitine,LC）含量、附睾肉碱转运蛋白（Carnitine/organiccation transporter2,OCTN2）的蛋白及mRNA表达水平的影响,并检测灵归方干预后大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px活性以及MDA含量,光学显微镜观察睾丸、附睾组织病理学变化。第一部分:ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究目的:观察不同剂量的ORN灌胃对雄性SD大鼠精液质量的影响,以制备弱精子症模型大鼠。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型1组、模型2组、模型3组各10只,具体给药方法为:模型 1 组:200mg/（kg·d）ORN;模型 2 组:400mg/（kg·d）ORN;模型 3组:800mg/（kg·d）ORN;对照组:1ml/100g0.5%CMC-Na（由于 ORN 水溶性差,故采用CMC-Na溶解后灌胃）。按照1ml/100g体重进行给药,连续灌胃20天,观察大鼠一般情况变化,在末次给药24小时后用5%水合氯酸溶液（0.7ml/100g）进行腹部注射麻醉,水合氯酸溶液使用剂量为按照0.4ml/100g体质量进行计算,大鼠麻醉后,称体重,取睾丸及附睾分别称重,计算睾丸、附睾脏器系数,并取大鼠左侧附睾尾进行精子浓度和活动率（PR+NP级精子百分率）分析。结果:1.在实验进行过程中,由于灌胃操作导致模型3组1只大鼠死亡。对照组一般状态良好,饮食正常,体毛浓密,且有光泽,大小便正常,活动量大,较活跃,存在笼内打斗现象;与对照组比较,模型1组上述各项征象无显着下降,饮食无明显减少,饮水量相当,体毛正常,光泽度稍差,活动量未见减少,存在笼内打斗现象,精神可;模型2组较对照组上述征象有下降,饮食量减少,体毛较稀疏,体毛光泽度不及模型1组,活动量以及打斗现象无明显减少,精神尚可;模型3组较对照组上述指标有显着下降,饮食量减少,体毛稀疏,体毛光泽度明显降低且不及模型2组,活动量少,打斗现象减少,精神差。2.与对照组比较,模型1组大鼠体重,睾丸、附睾重量,以及睾丸、附睾脏器系数变化差异均无统计学意义（P>0.05）;模型2组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数有下降趋势,但无统计学差异（P>0.05）;模型3组体重,睾丸、附睾重量以及睾丸、附睾脏器系数均下降,有统计学差异（P<0.05）。3.与对照组比较,模型1组与模型2组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）,模型3组精子浓度下降（P<0.01）;与对照组比较,模型1组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率无统计学改变（P>0.05）,模型2组、模型3组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率均下降（P<0.01）。结论:1.200 mg/（kg·d）ORN灌胃20天对于大鼠体重,睾丸、附睾重量及脏器系数,精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均无影响。2.400 mg/（kg·d）ORN灌胃20天,对大鼠精子浓度无影响,但可导致（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降,可用于制备弱精子症模型大鼠。3.800 mg/（kg·d）ORN灌胃20天可导致大鼠精子浓度、（PR+NP）级精子浓度及活动率均明显下降,可用于制备少弱精子症模型大鼠。第二部分:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究实验一:灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾LC相关通路的影响目的:观察灵归方对ORN诱导弱精子症模型大鼠精液质量、附睾LC含量,附睾OCTN2蛋白及mRNA表达水平的影响,揭示ORN诱导弱精子症模型大鼠附睾能量代谢障碍以及灵归方改善弱精子症大鼠附睾功能的相关机制。方法:将40只雄性SD大鼠进行编号,使用普通电子秤称重并详细记录。按照随机数字表法将其分为对照组、模型组、左卡尼汀组、灵归方组,每组各10只,具体给药方法为:对照组:1ml/100g 0.5%CMC-Na;模型组:400mg/（kg·d）ORN;左卡尼汀组:LC 100mg/（kg·d）+400mg/（kg·d）ORN;灵归方组:灵归方浓缩液,按 17.5g 生药/kg+400mg/（kg·d）ORN,连续灌胃 20 天,ORN 均为上午 8:00-9:00灌胃,干预药物为下午5:30-6:30灌胃。末次给药24 h后,5%的水合氯醛腹腔麻醉,剪开阴囊,取出实验大鼠右侧附睾,用于进行精子浓度及活动率检测;左侧附睾在（pH 7.2～7.4）0.01mol/LPBS缓冲液配制的4%多聚甲醛固定液中进行固定,用于附睾LC含量、OCTN2蛋白与mRNA表达的检测。其中高效液相色谱法测定附睾中LC含量,免疫印迹法（Western Blotting,WB）检测大鼠附睾OCTN2蛋白表达,逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）检测大鼠附睾OCTN2 mRNA表达。结果:1.与对照组比较,各组精子浓度改变无统计学差异（P>0.05）;模型组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率下降（P<0.05）。与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组（PR+NP）级精子浓度及精子活动率升高,有统计学差异（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,（PR+NP）级精子浓度及精子活动率差异无统计学意义（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾LC含量下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组与左卡尼汀组附睾LC含量升高（P<0.05）;且左卡尼汀组附睾LC含量高于灵归方组（P<0.05）。3.与对照组比较,模型组OCTN2蛋白表达下降（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2蛋白表达升高（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。4.与对照组比较,模型组OCTN2 mRNA表达下调（P<0.05）;与模型组比较,灵归方组、左卡尼汀组OCTN2 mRNA表达上调（P<0.05）;灵归方组与左卡尼汀组比较,OCTN2 mRNA表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天可导致大鼠精子活动率下降,可能与抑制附睾OCTN2蛋白及mRNA表达,引起血浆向附睾LC转运减少,导致附睾LC含量下降有关。2.灵归方能够提高ORN诱导弱精子症模型大鼠（PR+NP）级精子浓度及精子活动率,可能与增加大鼠附睾LC含量有关。3.灵归方可以上调ORN所致弱精子症模型大鼠附睾中OCTN2蛋白及mRNA的表达,从而增加LC从血浆向附睾转运。实验二:灵归方对弱精子症模型大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响目的:观察灵归方对ORN所致弱精子症模型大鼠血清性激素水平,附睾SOD、GSH-Px、MDA的影响,进一步揭示ORN造成弱精子症模型大鼠的可能机制以及灵归方的保护作用。方法:分组及灌胃方式同实验一。股动脉取血,酶联免疫吸附试验法测定大鼠血清中FSH、LH、T含量,取右侧附睾组织制备成5%的组织匀浆,将匀浆3000rpm离心10min,取上清进行SOD、GSH-Px活性以及MDA含量的检测。左侧睾丸、附睾部分置于4%多聚甲醛固定,随后用于观察睾丸、附睾结构组织病理学变化。结果:1.与对照组比较,各组FSH、LH及T水平改变均无统计学差异（P>0.05）。2.与对照组比较,模型组附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高（P<0.05）;与模型组比较,左卡尼汀组及灵归方组GSH-Px、SOD活性升高,MDA含量下降,均有统计学差异（P<0.01）;灵归方组与左卡尼汀组相比GSH-Px、SOD活性以及MDA含量比较无统计学差异（P>0.05）。3.在显微镜下可见各组大鼠睾丸中各生精小管结构正常,管腔明显,整齐排列,大量精子及精子细胞充满生精小管管腔,形态正常;各级生精细胞结构完整,层次清晰,各级生精细胞分裂活跃,各细胞形态未见明显异常,各组之间的形态学差异并不明显;各组附睾组织形态学改变并不明显,管腔中可见大量的精子,模型组附睾管腔中可见少量脱落细胞成分。结论:1.400mg/（kg·d）ORN连续灌胃20天对雄性SD大鼠血清性激素水平,睾丸、附睾组织形态并无显着影响,但是会引起附睾GSH-Px、SOD活性下降,MDA含量升高,可能是导致大鼠精子活动率下降的原因之一。2.灵归方可以增加附睾SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量,减少ORN所致弱精子症模型大鼠附睾氧化损伤,维持正常的精子成熟环境。
安琪[9]（2020）在《睾酮治疗少弱精子症的疗效与作用机制的实验动物研究》文中提出背景:睾酮在精子发生的过程中发挥着至关重要的作用。一些无精子症和少弱精子症患者的外周血睾酮会有所降低,但也有少数患者的外周血睾酮水平未低于正常范围。男性不育症中的特发性少弱精子症发病机制不明,临床上主要还是依赖经验性的药物治疗,其中补充雄激素或其衍生物则是其中的一种常用疗法。此外,药物治疗在特发性男性不育的临床治疗上应用广泛且相对简单,同时与自然生育的期望更为符合,因此更易于被医患双方接受。目的:通过建立少弱精子症模型大鼠来探究雄激素治疗的效果,并对可能的机制进行探讨。方法:第一,系统回顾了有关TU单独或联合用药治疗男性少弱精子症的文献,通过荟萃分析为下一步探索雄激素治疗少弱精子症模型大鼠提供了循证医学支持。第二,在结合既往研究的基础上,选取了6月龄的雄性SD正常大鼠来观察四种不同剂量的雄激素对其生殖器官和内分泌代谢的影响,以进一步明确生理剂量范围并探索下一步治疗实验中适合的药物剂量。第三,根据筛选出可能适用于治疗的药物剂量,对雷公藤多苷诱导的少弱精子症模型大鼠进行治疗,并从生殖脏器质量、精子质量、血清激素水平、睾丸组织抗氧化指标以及病理组织形态学等多角度、多方面评估治疗效果。第四,通过电镜来观察大鼠睾丸组织中精曲小管的超微结构变化,并在借助HPLC-MS的基础上深入挖掘有关雄激素治疗少弱精子症大鼠的代谢组学变化,即通过生物体内代谢物的变化情况来探究代谢物与病理变化之间的相对关系从而进行定量分析。同时,结合相关的凋亡通路和细胞特异标志物,探索了雄激素治疗少弱精子症大鼠模型的准确靶点与作用机制,为其临床应用提供了理论基础。结果:首先,就改善患者精液质量的结果而言,荟萃分析显示TU联合治疗的效果整体上要优于单用十一酸睾酮或其他用药治疗,并且单用十一酸睾酮的疗效并不亚于使用其他药物。因此,十一酸睾酮可在一定程度上直接或间接地促进和改善特发性少弱精子症患者的精液质量,也为下一步探讨雄激素治疗少弱精子症大鼠模型提供了文献依据和理论基础。其次,通过探索不同剂量的雄激素对正常大鼠的生殖激素水平及生精功能的影响,并结合大鼠脏器质量、精子质量、血清激素水平以及病理组织形态学等,进一步筛选出了 7.56mg/kg和15.12mg/kg两个对于正常大鼠生理功能影响相对最小的“生理剂量”。第三,通过建立少弱精子症大鼠模型,结果提示雄激素治疗能够在一定程度上改善精子浓度和活动率（P<0.05）,但对于精子的运动参数并无改善作用（P>0.05）;H&E染色结果提示:与空白对照组相比,十一酸睾酮治疗组的生精细胞有所增多,间质细胞变性,支持细胞胞浆空泡化相对减少,生精上皮进一步恢复,继而Johnsen评分明显恢复并且凋亡率显着降低（P<0.05）;在血清生殖激素方面:FSH和LH水平明显恢复（P<0.05）,同时T和E2水平显着增加（P<0.05）;而睾丸组织中的氧化应激物MDA与GSH-PX的水平明显降低（P<0.05）,特别是睾丸内睾酮的水平明显升高（P<0.05）。第四,通过电镜观察十一睾酮治疗组中睾丸组织中精曲小管的超微结构,发现生精细胞间隙明显缩小,生精细胞排列相对紧密,线粒体略有肿胀但结构基本完整,线粒体嵴排列紊乱减少,空泡亦显着减少;借助HPLC-MS挖掘少弱精子症模型大鼠在治疗前后代谢物质的差异,结果发现花生四烯酸、精氨酸和脯氨酸、苯丙氨酸以及甘油磷脂这四条代谢物质通路在治疗前后存在显着差异（P<0.05）;第五,以甘油磷脂代谢途径为基础,验证了可能涉及的通路如Bcl-2/Bax-Caspase3/9以及RIPK1-MLKL/pMLKL的蛋白表达情况;与溶剂对照组相比,治疗后的线粒体凋亡通路Bax、Caspase3/9表达明显降低（P<0.05）,而Bcl-2表达显着增加（P<0.05）;在细胞坏死性凋亡通路中,TNF-α、RIPK1以及pMLKL表达量显着增加（P<0.05）,pMLKL表达则是明显降低（P<0.05）;细胞特异性标志物如睾丸紧密连接标志物Occludin,支持细胞标志物SOX9,间质细胞标志物StAR以及肽能神经纤维标志物PGP9.5等经治疗后都有明显恢复（P<0.05）。结论:雄激素治疗对于睾酮低下性少弱精子症大鼠模型精子生成与生殖功能恢复具有明显改善作用。1.通过探索不同剂量的雄激素对正常大鼠的生殖激素水平及生精功能的影响,筛选与确定7.56mg/kg和15.12mg/kg两个“生理剂量”用于少弱精子症模型大鼠的治疗实验;2.在建立的睾酮低下型少弱精子症大鼠模型的基础上,我们发现15.12mg/kg剂量的十一酸睾酮无论是在改善生殖内分泌激素水平和精子质量,还是在减轻氧化应激产物对细胞组织损伤都有相对更好的效果;3.电镜结果提示:十一酸睾酮15.12mg/kg剂量对于生精细胞超微结构,包括细胞间隙和线粒体地恢复更加明显,在借助HPLC-MS代谢组学的基础上发现磷脂甘油代谢通路具有显着差异性;4.雄激素可通过线粒体凋亡途径以及细胞坏死性凋亡途径来实现其治疗作用,并且可改善相关细胞标志物来调控生精过程。
阿娜尔[10]（2020）在《蒙古马精液冷冻保存的研究》文中研究指明蒙古马是世界上古老的品种,也是优秀的地方品种。通过冷冻精液人工授精技术可以加快蒙古马提纯复壮及提高本品种选育进程。由于农业机械化的推进及国内对马繁殖技术关注度的下降,目前还没有人对蒙古马精子的冷冻保存方法进行过系统的研究,仍未探索到一种成熟有效并可推广到生产实践中的冷冻保存技术程序。为了研究出在实际生产中能够推广应用的蒙古马精液冷冻保存方法,进一步完善蒙古马冷冻精液品质,本研究对蒙古马精液冷冻程序及冷冻保护液配方的进行了优化,同时,使用最优冷冻保护液配方和冷冻保护程序对蒙古马精液进行了冷冻,并开展了人工授精受胎率验证试验,其结果如下:（1）将蒙古马精子置于不同渗透压（30、50、100、200、240、300、360、420、480、550、600mOsm/kg）的盐水溶液中孵育后,测定其前进运动精子百分比（PM）和精子质膜完整率（MI）。结果显示,蒙古马精子渗透压耐受范围为200～400mOsm/kg,从此渗透压再回到等渗状态时,其活力是可以恢复的,而渗透压超出这一范围其活力恢复能力降低。2)比较了沉降离心法之不同离心力和离心时间（400 g,15 min;600 g,10 min;1000 g,7 min）和缓冲离心法（使用商品化离心垫）对蒙古马精液冻前冻后精液质量和精子损失率的影响,结果显示,600 g,10 min组离心方法获得的精液冷冻前后TM、PM、VAP、VSL、MI和精子损率均与使用离心垫进行离心的对照组无显着差异（P<0.05）,该方法可代替商品化离心垫使用。（3）比较了不同平衡时间（0 min、100 min和120 min）、不同冷冻降温速率（液氮熏蒸高度2 cm、3 cm和4 cm）对蒙古马精液冷冻效果的影响,结果显示,蒙古马精液冷冻之前需进行一段时间的冷却平衡。获得可接受的解冻后质量最佳平衡时间是应将蒙古马精子冷却至4℃并平衡100 min。距离液氮面高度3 cm的熏蒸高度获得的冷冻效果与程序化冷冻仪相当。（4）以INRA82+2%卵黄基础液,添加4种不同浓度甘油（2%、3%、4%和5%）和二甲基甲酰胺（4%、5%、6%和7%）作为冷冻保护剂对蒙古马精液进行冷冻,分别测定了在4℃平衡100 min后的质量指标和冷冻-解冻后的质量指标。结果显示,冷冻-解冻后,3%gly、4%gly、5%gly和7%DMF组TM和PM均显着高于其他组（P<0.05）;添加2%gly组、3%gly组和7%DMF组MI显着高于其他组（P<0.05）。综合考虑TM和MI,蒙古马精液冷冻保护液中适宜甘油比例为3.0%。（5）比较了 8种不同冷冻保护液:INRA82基础液+5种不同浓度低密度脂蛋白（LDL,0.5%、1%、2%、3%和 5%）,INRA82 基础液+2%卵黄,INRA82 基础液+2%离心卵黄和INRAFreeze商品稀释液对蒙古马精液冷冻效果的影响。以上冷冻保护液均添加了 3%甘油。结果显示,在冷冻-解冻后,2%LDL、2%卵黄和INRAFreeze组TM、PM、VAP、VSL、VCL、MI和AI均显着高于其他组（P<0.05）。表明,2%的LDL和2%的卵黄对蒙古马精子可能具有低温保护作用,2%的卵黄提取步骤简单,更容易获得。（6）在脱脂奶基础液上,选择4种不同浓度的葡萄糖（0、67、125和147 mM）与270mM乳糖、50mM棉子糖组合,制备成精子低温保存稀释液,比较了其对蒙古马精液冷藏保存的效果。结果显示,125 mM葡萄糖+270 mM乳糖对蒙古马精液低温保存质量有显着提高作用。（7）以INRA82作为基础稀释液,分别添加谷胱甘肽（0、5、7、10和20mg/mL）、海藻糖（0、25、35和50 mg/mL）和联合添加谷胱甘肽+海藻糖（0+0、5+35、5+50、7+35和7+50mg/mL）制备成含有不同氧化剂的冷冻保护液,将浓缩处理后的马精子分别置于上述稀释液中稀释、冷冻和解冻,利用精子常规品质检测方法和酶联免疫分析法,检测精子常规品质和抗氧化相关指标。结果显示:1)5 mg/mL谷胱甘肽对精子TM、PM和MI均有提高,可降低精液中MDA含量,添加谷胱甘肽可显着提高CAT和GSH-PX活性（P<0.05）;35和50mg/mL海藻糖可提高TM、PM、AI和MI,且35 mg/mL海藻糖可显着降低MDA含量（P<0.05）;2)联合添加5mg/mL谷胱甘肽+35 mg/mL海藻糖可显着提升马精液的TM、PM、AI和MI（P<0.05）,还可显着降低MDA含量（P<0.05）,提高SOD活性和GSH-PX活性。综上,联合添加5 mg/mL谷胱甘肽+35 mg/mL海藻糖一定程度上可通过改变酶活性,对精子氧化应激产生保护作用,提高了马冷冻-解冻后精液质量。（8）在以上研究基础上,筛选出一套自配冷冻保护液配方和简便冷冻程序,将自配冷冻保护液组、INRAFrezee组、鲜精INRA96稀释组处理的精液用于30匹母马共60个排卵周期进行人工授精,通过妊娠检查,进行受胎率统计。结果表明,鲜精人工授精受胎率为70%,INRAFreeze冻精人工授精受胎率为50%;自配冷冻保护液冻精人工授精受胎率为50%。综上所述,经过筛选的自配蒙古马精液冷冻保护液成本低廉、制备步骤少、简单易操作,制备条件温和易控制,冻后活力在35%以上,情期受胎率达到了 50%,能够满足生产需要。
二、活性氧致精子运动参数变化的观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、活性氧致精子运动参数变化的观察（论文提纲范文）
（1）金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 男性不育症中医药诊疗研究进展 |
| 1. 男性不育症中医病名认识 |
| 2. 男性不育症病因病机 |
| 3. 补肾法为主的男性不育症中医药治疗 |
| 4. 补肾法为主治疗男性不育症的相关机制 |
| 参考文献 |
| 综述二 特发性弱精子症现代医学诊治研究进展 |
| 1. 特发性弱精子症流行病学 |
| 2. 特发性弱精子症诊断 |
| 3. 特发性弱精子症可能病因及机制 |
| 3.1 氧化应激损伤 |
| 3.2 线粒体功能障碍 |
| 3.3 表观遗传学作用 |
| 3.4 基因异常 |
| 3.5 精子蛋白组差异 |
| 3.6 翻译后修饰 |
| 3.7 环境因素 |
| 3.8 不良生活方式 |
| 3.9 精神心理因素 |
| 4. 特发性弱精子症的治疗 |
| 4.1 一般治疗 |
| 4.2 药物治疗 |
| 4.3 辅助生殖技术 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 金龟毓麟方治疗特发性弱精子症(肾虚肝郁型)的有效性及安全性临床研究 |
| 前言 |
| 1. 研究伦理 |
| 2. 研究对象 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 2.5 中止/退出标准 |
| 2.6 中止/退出病例的处理 |
| 3. 研究方法 |
| 3.1 分组及样本量计算 |
| 3.2 研究用药及疗程 |
| 3.3 观察指标及观察时点 |
| 3.4 精液采集及精液分析 |
| 4. 统计学分析 |
| 5. 研究结果 |
| 5.1 试验入组及完成情况 |
| 5.2 一般资料分析 |
| 5.3 有效性分析 |
| 5.4 安全性分析 |
| 6. 讨论 |
| 7. 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 实验研究 |
| 实验一 金龟毓麟方对奥硝唑诱导弱精子症模型的药效学研究 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 动物伦理 |
| 1.2 实验动物 |
| 1.3 主要实验仪器 |
| 1.4 主要实验试剂与药品 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 实验检测指标 |
| 1.7 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠一般情况变化 |
| 2.2 大鼠体重、睾丸、附睾重量变化 |
| 2.3 大鼠睾丸、附睾脏器指数变化 |
| 2.4 大鼠精子浓度变化 |
| 2.5 大鼠精子活力变化 |
| 2.6 大鼠性激素水平变化 |
| 2.7 大鼠睾丸、附睾HE染色变化 |
| 2.8 大鼠肝肾功指标变化 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 ORN诱导的弱精子症大鼠模型的构建 |
| 3.2 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的有效性分析 |
| 3.3 金龟毓麟方对改善大鼠弱精子症的安全性分析 |
| 4. 小结 |
| 实验二 基于Pink1/Parkin信号通路研究金龟毓麟方调控线粒体自噬改善ORN诱导的弱精子症大鼠的作用机制 |
| 前言 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 主要实验仪器 |
| 1.3 主要实验试剂 |
| 1.4 实验方法 |
| 1.5 实验检测指标 |
| 1.6 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 大鼠精子GSH-Px、SOD及MDA及变化 |
| 2.2 大鼠精子MMP及早期凋亡率变化 |
| 2.3 大鼠精子线粒体ATP变化 |
| 2.4 大鼠Pink1、Parkin、p62和LC3Ⅱ/Ⅰ、TOM20、Beclin 1mRNA及蛋白表达变化 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附件 |
| 附件1 |
| 附件2 |
| 中医药科技查新报告书 |
（2）基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 山羊精液冷冻保存 |
| 1.2 影响精液抗冻性的因素 |
| 1.2.1 精浆 |
| 1.2.2 精子 |
| 1.2.3 冷冻保存程序 |
| 1.2.4 营养因素 |
| 1.3 蛋白质组学 |
| 1.3.1 TMT标记定量蛋白质组学概况 |
| 1.3.2 蛋白质组学在雄性生殖中的应用 |
| 1.4 代谢组学 |
| 1.4.1 非靶向代谢组学概况 |
| 1.4.2 代谢组学在雄性生殖中的应用 |
| 1.5 脂质组学 |
| 1.5.1 脂质组学概况 |
| 1.5.2 脂质组学在雄性生殖中的应用 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 1.7 技术路线图 |
| 2 研究一内蒙古绒山羊精液抗冻性筛选 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 主要试剂与仪器 |
| 2.1.2 试验动物 |
| 2.1.3 精液采集与稀释液配置 |
| 2.2 精液冷冻保存及抗冻性筛选 |
| 2.2.1 个体抗冻性的分类 |
| 2.2.2 去除精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.2.3 交换精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3 精子质量检测 |
| 2.3.1 精子运动性能检测 |
| 2.3.2 精子结构完整性检测 |
| 2.3.3 冷冻精液的人工输精 |
| 2.3.4 数据分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 绒山羊精液抗冻性的分类 |
| 2.4.2 去除精浆对精子抗冻性的影响 |
| 2.4.3 交换精浆对精子抗冻性的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 抗冻性对内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.5.2 抗冻性对去除精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.5.3 抗冻性对交换精浆后的内蒙古绒山羊精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.6 小结 |
| 3 研究二基于TMT标记定量蛋白质组学对内蒙古绒山羊精浆抗冻性的研究 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验样品 |
| 3.1.2 主要仪器与分析软件 |
| 3.1.3 主要试剂和耗材 |
| 3.2 试验方法 |
| 3.2.1 蛋白质提取和肽段裂解 |
| 3.2.2 SDS-PAGE电泳 |
| 3.2.3 FASP酶解 |
| 3.2.4 TMT标记 |
| 3.2.5 High pH Reversed-Phase肽段分级 |
| 3.2.6 高效液相色谱-质谱分析(LC-MS/MS) |
| 3.2.7 蛋白质鉴定和定量分析 |
| 3.2.8 生物信息学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 蛋白质提取质控评价 |
| 3.3.2 质谱稳定性与重复性质控结果 |
| 3.3.3 蛋白质鉴定结果 |
| 3.3.4 差异表达蛋白质筛选 |
| 3.3.5 差异表达蛋白质聚类分析(Clustering) |
| 3.3.6 差异表达蛋白质Gene Ontology(GO)功能富集分析 |
| 3.3.7 差异表达蛋白质KEGG通路富集分析 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 4 研究三基于非靶向代谢组学对内蒙古绒山羊精浆抗冻性的研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验样品 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 |
| 4.2 试验方法 |
| 4.2.1 样品预处理方法 |
| 4.2.2 色谱-质谱分析 |
| 4.2.3 数据处理 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 试验质量控制 |
| 4.3.2 数据分析 |
| 4.3.3 显着性差异代谢物筛选 |
| 4.3.4 差异代谢物聚类分析 |
| 4.3.5 差异代谢物KEGG通路分析 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 5 研究四蛋白质组-代谢组联合分析内蒙古绒山羊精浆抗冻性相关生物标记 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验样品 |
| 5.1.2 主要试剂与仪器 |
| 5.1.3 蛋白质组和代谢组联合分析 |
| 5.1.4 Western Blot实验步骤 |
| 5.1.5 精浆矿物质离子检测 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 差异蛋白质和差异代谢物KEGG通路整合分析 |
| 5.2.2 FTH1 蛋白和TF蛋白的Western Blot结果 |
| 5.2.3 内蒙古绒山羊精浆中矿物质离子浓度检测 |
| 5.3 讨论 |
| 5.4 小结 |
| 6 研究五基于非靶向脂质组学对内蒙古绒山羊精子抗冻性的研究 |
| 6.1 试验材料 |
| 6.1.1 试验样品 |
| 6.1.2 实验仪器和试剂 |
| 6.2 试验方法 |
| 6.2.1 样本预处理方法 |
| 6.2.2 色谱-质谱分析 |
| 6.2.3 数据分析 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 试验质量控制 |
| 6.3.2 脂类化合物鉴定数量 |
| 6.3.3 脂质亚类(Lipid class)水平分析 |
| 6.3.4 脂质分子(Lipid species)水平分析 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 7 结论、创新点及展望 |
| 7.1 结论 |
| 7.2 创新点 |
| 7.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 作者简介 |
（3）精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6与精子运动能力及体外受精结局的相关性分析（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分 探讨ROS对精子运动能力及SOD2和PRDX6 表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 检测SOD2和PRDX6 在弱精症患者精子中的表达变化,探讨其与精子运动能力的相关性 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 第三部分 探究精子SOD2和PRDX6 的表达与IVF结局的相关性 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述:活性氧(ROS)与男性不育 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士期间发表的论文 |
（4）益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 中医药对少弱精子症的研究进展 |
| 1. 中医药对少弱精子症的认识 |
| 2. 中医病因及辨证分型 |
| 3. 中药复方研究 |
| 参考文献 |
| 综述二 现代医学对少弱精子症的研究进展 |
| 1. 少弱精子症的病因 |
| 2. 睾丸生精细胞增殖分化相关机制 |
| 3. 少弱精子症的西医治疗 |
| 4. 小结 |
| 参考文献 |
| 第一部分 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的网络药理学预测 |
| 1. 引言 |
| 2. 方法与材料 |
| 2.1 益肾兴阳胶囊活性成分筛选及作用靶点预测 |
| 2.2 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症PPI网络的构建 |
| 2.3 功能模块分析及作用机制解析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 益肾兴阳胶囊化学成分筛选、作用靶点和疾病靶点预测结果 |
| 3.2 少弱精子症和益肾兴阳胶囊蛋白互作网络构建 |
| 3.3 功能模块分析结果 |
| 3.4 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的作用机制和有效成分分析 |
| 3.5 益肾兴阳胶囊治疗少弱精子症的活性成分验证 |
| 4. 讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型治疗作用与机制的实验研究 |
| 第一章 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型的实验研究 |
| 第一节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型精子质量影响 |
| 参考文献 |
| 第二节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型精子ATP影响 |
| 参考文献 |
| 第三节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型生精细胞周期影响 |
| 参考文献 |
| 第四节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型睾丸组织生精细胞、支持细胞超微结构影响 |
| 第五节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症小鼠模型睾丸组织PI3K、Akt、SCF、C-Kit、ASK1、JNK、Bcl-2、Bax蛋白表达影响 |
| 参考文献 |
| 第二章 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型的实验研究 |
| 第一节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型精子质量影响 |
| 参考文献 |
| 第二节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型血清性激素影响 |
| 参考文献 |
| 第三节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型精子线粒体膜电位影响 |
| 参考文献 |
| 第四节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型睾丸组织TGF-β1/Smads信号转导通路影响 |
| 参考文献 |
| 第五节 益肾兴阳胶囊对少弱精子症大鼠模型睾丸组织VDAC2、VDAC3、CHK1、CHK2蛋白表达的影响 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）端粒长度及其关联基因多态性对精液质量的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 端粒及相关基因多态性与男性生殖健康 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）五子衍宗丸的生精作用及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 文献综述 |
| 第一节 五子衍宗丸概述 |
| 第二节 不育症动物模型的研究进展 |
| 第三节 基因表达谱在中药研究中的应用进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 技术路线图 |
| 第一章 白消安致少弱精症小鼠模型的建立 |
| 第一节 白消安诱导少弱精症小鼠模型的睾丸组织病理学研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 第二节 白消安诱导少弱精症小鼠模型的精子质量研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 5 综合讨论 |
| 第二章 五子衍宗丸对少弱精症小鼠的生精作用探究 |
| 第一节 五子衍宗丸对少弱精症小鼠睾丸脏器指数和组织病理学的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第二节 五子衍宗丸对少弱精症小鼠精子数量和活力的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第三节 五子衍宗丸对少弱精症小鼠生育能力的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第三章 五子衍宗丸生精作用的分子机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）强精片对弱精子症大鼠精子线粒体功能影响的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词 |
| 前言 |
| 1.实验部分 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学处理 |
| 1.4 实验结果 |
| 2.讨论部分 |
| 2.1 弱精子症的西医认识 |
| 2.2 弱精子症的中医认识 |
| 2.3 .线粒体功能与精子质量 |
| 2.4 强精片组方分析和前期研究基础 |
| 2.5 补肾活血法治疗弱精子症的理论依据 |
| 2.6 奥硝唑构建弱精子症大鼠模型分析 |
| 2.7 强精片对弱精子症大鼠精子线粒体功能的作用分析 |
| 结语 |
| 1.结论 |
| 2.创新点 |
| 3.问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录一 :综述 线粒体对精子活力影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录二 :随机数字表 |
| 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（8）灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 综述一 中医诊治男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 西医诊治男性不育症研究进展 |
| 参考文献 |
| 实验研究 |
| 前言 |
| 第一部分 ORN诱导弱精子症模型大鼠的研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 大鼠一般状态 |
| 3.2 大鼠体重,睾丸、附睾重量 |
| 3.3 大鼠睾丸、附睾脏器系数 |
| 3.4 精子浓度及活动率 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 灵归方对ORN诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究 |
| 实验一 灵归方对ORN诱导弱精子症大鼠附睾LC相关通路的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 精子浓度及活动率 |
| 3.2 附睾LC含量 |
| 3.3 灵归方对附睾OCTN2蛋白表达的影响 |
| 3.4 灵归方对附睾OCTN2 mRNA表达的影响 |
| 实验二 灵归方对弱精子症大鼠血清性激素及附睾氧化应激反应的影响 |
| 1. 材料与方法 |
| 2. 数据分析 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 灵归方对血清性激素水平的影响 |
| 3.2 灵归方对附睾组织GSH-Px、SOD活性,MDA含量的影响 |
| 3.3 灵归方对睾丸、附睾组织结构的影响 |
| 讨论 |
| 1. 选择LC相关通路作为研究的依据 |
| 2. 选择ORN作为造模药物的依据 |
| 3. 灵归方组方分析 |
| 4. 灵归方改善弱精子症大鼠作用机制 |
| 4.1 灵归方增加弱精子症大鼠附睾LC含量 |
| 4.2 灵归方上调OCTN2蛋白及mRNA在附睾中的表达 |
| 4.3 灵归方抗氧化作用 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 附录 |
（9）睾酮治疗少弱精子症的疗效与作用机制的实验动物研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一章 雄激素治疗少弱精子症的研究总结 |
| 前言 |
| 第一节 雄激素及相关制剂在男性特发性少弱精子症治疗中的应用现状 |
| 1. 男性不育症及特发性少弱精子症概念 |
| 2. 睾酮生成与精子发生的关系 |
| 3. 雄激素口服及注射常用制剂的药代动力学以及安全性 |
| 4. 雄激素制剂的用法和疗效 |
| 5. 中医药对少弱精子症的治疗 |
| 6. 雄激素在少弱精子症治疗中的展望 |
| 参考文献 |
| 第二节 国内雄激素治疗少弱精子症对患者精液参数改善情况的荟萃分析 |
| 1. 资料与方法 |
| 1.1 检索策略 |
| 1.2 干预措施以及结局变量 |
| 1.3 疗效判定标准 |
| 1.4 纳入标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 1.6 文献筛选与资料提取 |
| 1.7 文献质量评估 |
| 1.8 统计学处理方法 |
| 2. 结果 |
| 2.1 文献检索情况 |
| 2.2 荟萃分析结果 |
| 2.2.1 精液量 |
| 2.2.2 精子浓度 |
| 2.2.3 精子活力 |
| 2.2.4 精子畸形率 |
| 2.2.5 精子活动率 |
| 2.2.6 总有效率(%) |
| 2.3 发表偏倚分析 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 雄激素对正常大鼠生殖激素水平及生精功能的影响 |
| 前言 |
| 第一节 正常大鼠雄激素的给药方式及标本取材 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TU注射对正常大鼠睾丸形态的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第三节 TU注射对正常大鼠生殖激素的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 TST对少弱精子症模型大鼠生殖功能影响的研究 |
| 前言 |
| 第一节 少弱精子症大鼠模型的建立、雄激素治疗性给药以及标本取材 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TST对少弱精子症大鼠模型的睾丸组织形态的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第三节 TST对睾丸组织生精细胞凋亡的检测(TUNEL法) |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第四节 TST对少弱精子症模型大鼠生殖激素的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第五节 TST对少弱精子症模型大鼠睾丸组织氧化应激指标以及睾酮水平的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 TST对少弱精子症模型大鼠睾丸组织蛋白及血清代谢组学的调控研究 |
| 前言 |
| 第一节 透射电镜观察“生理剂量”TST对大鼠睾丸组织超微结构的影响 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 第二节 TST对少弱精子症模型大鼠作用的HPLC-MS分析——基于代谢组学的研究 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 结论 |
| 第三节 Bcl-2/Bax-Caspase3/9和TNFα-RIPK1-MLKL凋亡途径相关基因蛋白表达调控 |
| (一) 材料与方法 |
| (二) 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 博士期间发表论文及参与科研项目情况 |
| 致谢 |
（10）蒙古马精液冷冻保存的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略语表 |
| 引言 |
| 1 文献综述 |
| 1.1 马精液冷冻保存的研究进展 |
| 1.2 马精液冷冻保存中存在的问题 |
| 1.3 AI在国内外的使用状况 |
| 1.4 AI使用效率低下的原因 |
| 1.5 马精液冷冻保存损伤机制 |
| 1.5.1 机械损伤 |
| 1.5.2 氧化损伤 |
| 1.6 影响马精液冷冻保存质量的因素 |
| 1.6.1 外观 |
| 1.6.2 精液量 |
| 1.6.3 精液密度 |
| 1.6.4 精清 |
| 1.6.5 离心 |
| 1.6.6 渗透压 |
| 1.6.7 降温速率 |
| 1.6.8 平衡时间 |
| 1.6.9 解冻程序 |
| 1.7 马精液冷冻保存液的主要成分 |
| 1.7.1 冷冻保护剂 |
| 1.7.2 卵黄 |
| 1.7.3 糖类 |
| 1.7.4 抗氧化剂 |
| 1.8 马精液品质常用测定指标 |
| 1.8.1 精子活率 |
| 1.8.2 精子形态 |
| 1.8.3 顶体完整率 |
| 1.8.4 质膜完整率 |
| 1.8.5 线粒体膜电位 |
| 1.8.6 抗氧化能力 |
| 2 蒙古马细管精液冷冻程序的优化研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 试验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 2.1.4 试验设计 |
| 2.1.5 精子质量评价 |
| 2.1.6 数据统计与分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 渗透压对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.2.2 不同离心方法去除精清对蒙古马精液冷冻质量及精子损失率的影响 |
| 2.2.3 不同平衡时间对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.2.4 不同降温速率对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 渗透压对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3.2 不同离心方法去除精清对蒙古马精液冷冻质量及精子损失率的影响 |
| 2.3.3 不同平衡时间对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.3.4 不同降温速率对蒙古马精液冷冻保存效果的影响 |
| 2.4 结论 |
| 3 冷冻保护液不同成分对蒙古马细管精液冷冻效果的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 试验动物的选择 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 3.1.4 试验设计 |
| 3.1.5 精子质量评价 |
| 3.1.6 数据统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 不同浓度gly和DMF对马精子冷冻效果的影响 |
| 3.2.2 不同浓度卵黄、LDL对蒙古马精子低温保存及冷冻效果的影响 |
| 3.2.3 不同糖类组合对马精子低温保存效果的影响 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 不同浓度gly和DMF对马精子冷冻效果的影响 |
| 3.3.2 不同浓度卵黄、LDL对蒙古马精子低温保存及冷冻效果的影响 |
| 3.3.3 不同糖类组合对马精子低温保存效果的影响 |
| 3.4 结论 |
| 4 不同抗氧化剂对蒙古马精液品质的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 试验动物的选择 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 马冷冻精液的制作 |
| 4.1.4 试验设计 |
| 4.1.5 精子质量评价 |
| 4.1.6 统计分析 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 不同抗氧化剂对冷冻-解冻后马精子质量的影响 |
| 4.2.2 不同抗氧化剂对蒙古马精液中抗氧化相关指标的影响 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 结论 |
| 5 蒙古马细管精液冷冻保护液的验证 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 试验动物的选择 |
| 5.1.2 稀释液的制备 |
| 5.1.3 精液的采集 |
| 5.1.4 精液的处理 |
| 5.1.5 精液的冷冻及解冻 |
| 5.1.6 试验设计 |
| 5.1.7 母马的管理和人工授精 |
| 5.1.8 数据统计分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 冻后活力均值 |
| 5.2.2 受胎率验证 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 输精方法对受胎率的影响 |
| 5.3.2 不同种公马精液对受胎率的影响 |
| 5.3.3 不同精子活力对受胎率的影响 |
| 5.4 小结 |
| 6 结论 |
| 7 研究创新点 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 作者简介 |
| 参考文献 |
四、活性氧致精子运动参数变化的观察（论文参考文献）
- [1]金龟毓麟方治疗特发性弱精子症（肾虚肝郁型）临床观察及机制研究[D]. 张继伟. 中国中医科学院, 2021(02)
- [2]基于多组学联合分析对内蒙古绒山羊精液抗冻性的研究[D]. 徐冰冰. 内蒙古农业大学, 2021
- [3]精子抗氧化蛋白SOD2和PRDX6与精子运动能力及体外受精结局的相关性分析[D]. 杨梓涵. 重庆医科大学, 2021(01)
- [4]益肾兴阳胶囊对少弱精子症模型的治疗作用与机制研究[D]. 常征辉. 北京中医药大学, 2021(02)
- [5]端粒长度及其关联基因多态性对精液质量的影响[D]. 刘欢. 新乡医学院, 2021
- [6]五子衍宗丸的生精作用及分子机制研究[D]. 孟雪丹. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]强精片对弱精子症大鼠精子线粒体功能影响的实验研究[D]. 杨雪梅. 成都中医药大学, 2020(02)
- [8]灵归方对奥硝唑诱导的弱精子症模型大鼠附睾功能影响的实验研究[D]. 晏斌. 中国中医科学院, 2020(01)
- [9]睾酮治疗少弱精子症的疗效与作用机制的实验动物研究[D]. 安琪. 北京协和医学院, 2020(05)
- [10]蒙古马精液冷冻保存的研究[D]. 阿娜尔. 内蒙古农业大学, 2020(01)