准分子激光原位角膜磨镶术后兔角膜基质细胞凋亡的实验研究

论文摘要

角膜的损伤愈合反应对角膜手术是至关重要的。对于准分子激光角膜切削术（PRK）和准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）等角膜屈光手术而言,角膜损伤愈合反应是过矫、欠矫、角膜基质混浊和其它并发症的主要因素,因此角膜损伤愈合反应会直接影响手术的安全性与预测性。浙江大学医学院眼科学硕士学位论文-一论文摘要2005年2月 近十年来,对屈光性角膜手术后角膜的损伤愈合反应成为很多眼科医生关心和研究的科题。1996年Wilson等首次报道角膜上皮损伤后会出现浅层角膜基质细胞的消失是由细胞凋亡介导的;细胞凋亡是一种程序性细胞死亡,它不同于细胞坏死,发生凋亡的细胞不释放淋巴因子和其它细胞内成分,因此不会引起周围组织、细胞的炎症反应。细胞凋亡在维持正常组织器官的稳定平衡及病理状态组织器官的损伤、修复中起着重要作用。后来的一些研究认为角膜上皮损伤后释放出的IL一1、Fas一L、BMP一2、BMP一4、TNF一a等细胞因子介导了角膜基质细胞凋亡的发生。并且早期角膜基质细胞凋亡的数量与后期基质细胞的激活增殖密切相关;与角膜愈合反应程度成正相关。 我们最常用于观察角膜细胞发生凋亡的方法是透射电镜和脱氧核糖核昔酸末端转移酶介导的缺口末端标法（terminal一deoxynueleotidyl transferase mediateddUTP nick endlabeling,TUNEL）。用电镜观察可以在术后几分钟内发现角膜细胞出现凋亡的形态变化,而用脱氧核糖核营酸末端转移酶介导的缺口末端标法可以最早在术后10一30分钟内发现凋亡细胞,有研究发现在鼠或兔角膜上进行屈光手术后4小时是角膜基质细胞凋亡最多的时间。角膜细胞发生凋亡是上皮损伤后角膜基质最早可以观察到的基质变化。继角膜细胞发生凋亡后,其它的角膜细胞有丝分裂和移行,部分角膜细胞转化为肌纤维母细胞。这一复杂的细胞反应使得角膜基质重塑并引起上皮细胞的增殖。 目前,准分子激光原位角膜磨镶术（LASIK）已成为屈光手术比较先进的方法之一,但尽管如此LASIK的手术效果受多种因素的影响,角膜愈合反应仍是重要因素之一。本研究旨在通过在兔眼上了建立不同的手术模型,在术后早期观察角膜基质细胞凋亡的发生,并对角膜基质凋亡细胞进行定量比较,来进一步阐明LAsIK术后早期角膜基质细胞凋亡的特点并探索与LASIK术后角膜愈合反应程度及其与角膜刀的机械损伤、激光能量的相关性。浙江大学医学院眼科学硕士学位论文-一论文摘要2005年2月【研究目的】 研究准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LAsxK）后早期角膜基质细胞凋亡的特点。通过在健康无眼疾的新西兰纯种白兔眼上建立不同矫正度数的LAsIK模型及单纯角膜瓣模型并设立空白对照组,在术后4小时这个峰值的时间点取角膜制作标本,观察角膜细胞凋亡的形态并计数,对比凋亡水平;进一步探索LAsIK术后角膜愈合反应程度与角膜刀的机械损伤、激光能量的相关性。【研究方法】 健康无眼疾的新西兰纯种白兔20只,清洁级,体重3.54kg,雌雄兼有,饲养1周以上。新西兰纯种白兔随机分为两大组,其中10只兔子左眼为一4.OD LAsIK模型组、右眼为一8.ODLASIK模型组、另10只兔子左眼为单纯角膜瓣模型组、右眼作为空白对照组。为便于实验结果进行统计分析,根据不同的实验模型分为四组:A组（单纯角膜瓣组,n二10眼）,B组（LASIK一4.00组,n=10眼）,C组（LASIK一8.00组,n=10眼）,D组（空白对照组,n=10）。3Og/L戊巴比妥耳背静脉麻醉（lml/kg）动物后,用0.4%盐酸奥布卡因眼液（日本参天公司）行表面麻醉1一2次,实验动物置于手术台上,无菌生理盐水冲洗结膜囊。用Moria MZ微型角膜刀的0号负压吸引环,厚度设置为130pm的微型角膜板层刀制作一完整的带蒂角膜瓣,随后将瓣掀起后根据模型设定决定准分子激光切削或不切削（切削区直径为6一smm.;不进行激光切削的,仅进行层间BSS冲洗）,角膜瓣复位;术后4小时处死兔子取兔角膜制作病理切片,行透射电镜检查,用脱氧核糖核营酸末端转移酶介导的缺口末端标法（terminal一deoxynueleotidyltransferase mediated duTP niek end labeling,TUNEL）原位显示凋亡细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察凋亡细胞形态,定量统计比较凋亡水平差别。

论文目录

• 一、缩略语表
• 二、论文摘要
• 中文摘要
• 英文摘要
• 三、实验流程图
• 四、正文
• 前言
• 实验材料和方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 实验图片
• 五、附录
• 综述
• 六、致谢