论文摘要
盐酸克伦特罗（Clenbuterol Hydrochloride,CL）是一种β-肾上腺素能兴奋剂,主要用于防治人、畜的支气管哮喘和痉挛。该药治疗剂量较低,若用量加大至治疗剂量的5-10倍,且加长使用期,则有降低家畜脂肪、提高瘦肉率、促进家畜生长、改善肉质的效果,在畜牧业上曾被用作生长促进剂。超量使用β-兴奋剂会对人和动物的肝、肾等内脏器官产生一定的毒副作用,因此用作饲料添加剂、生长促进剂是违法行为。本文拟制备特异针对CL的单克隆抗体,并建立竞争酶联免疫吸附法（cELISA）用于CL的残留检测。 本研究选择一种新型载体阳离子化牛血清白蛋白（cBSA）与半抗原CL进行偶联,经紫外光谱扫描确定偶联成功,测定偶联物的蛋白浓度为0.67mg/ml。以此偶联物CL-cBSA作为免疫原,与Al（OH）3佐剂乳化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,每次免疫间隔2周,待血清抗体效价明显升高时加强免疫,4天后取小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0-Ag-14进行融合。用重氮法将CL与卵清白蛋白（OVA）偶联,偶联产物CL-OVA作为包被抗原,经间接ELISA试验筛选出阳性细胞株,再用有限稀释法进行多次亚克隆,获得稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2E5、2H5。经亚类鉴定其免疫球蛋白亚类均为IgM,单抗腹水的间接ELISA效价分别为10×29和10×211。采用间接竞争ELISA试验鉴定单抗的敏感性,在CL浓度102-10-2ng/ml范围内2H5单抗对CL的阻断率明显高于2E5单抗,其中2H5对CL的50%阻断作用浓度(IC50)为1ng/ml,2E5对CL的IC50>100ng/ml;特异性鉴定结果显示,单抗与CL的类似物莱克多巴胺及两种偶联载体均不发生交叉反应。上述结果表明单抗2H5是进一步建立竞争ELISA检测方法的良好生物材料。
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