内皮素-1对大鼠骨髓内皮前体细胞增殖、细胞周期、NO分泌及凋亡的影响

论文摘要

研究背景及目的内皮素家族包括内皮素-1（ET-1）、内皮素-2（ET-2）和内皮素-3（ET-3）,均是含有21个氨基酸残基的短肽。ET-1主要由血管内皮细胞分泌,在脉管系统作用最强,是已知最有力的血管收缩剂。ET-1是一种多功能调节肽,具有广泛的生物学效应,具有介导炎症、刺激其它激素分泌、促有丝分裂、刺激细胞增殖、移行和黏附等多种功能,通过自分泌和旁分泌方式经受体发挥作用。许多临床和实验研究证实ET-1作为一种血管活性肽,在血管生成过程中也发挥作用。ET-1通过直接作用于内皮细胞上的ETB受体,在新生血管的不同阶段发挥调节作用,包括细胞增殖、迁移和蛋白酶的合成等,在体内实验中ET-1也能刺激新血管生成。内皮前体细胞（EPC）又称内皮祖细胞,是一类能循环、增殖并分化为血管内皮细胞,但尚未表达成熟血管内皮细胞表型特征的前体细胞。研究发现,EPC不仅参与人胚胎血管生成,同时也参与出生后血管新生和内皮损伤后的修复过程。当发生血管损伤时,内皮前体细胞从骨髓释放入外周血,迁移至受损部位,掺入血管壁中,分化为成熟内皮细胞,修复受损血管,参与血管新生,改善甚至恢复缺血组织的血供。本研究拟探讨体外培养条件下,不同浓度ET-1对骨髓来源EPC的增殖、细胞周期、NO分泌和凋亡的影响,以期从新的角度理解ET-1对心血管系统的作用。实验方法第一部分EPC的培养和鉴定:1、取大鼠股骨骨髓,以密度梯度离心法分离出单核细胞,在添加了VEGF和bFGF的M199培养基中培养,并定期观察;2、DiⅠ-ac-LDL和FITC-UEA-Ⅰ免疫荧光双染,鉴定细胞表型。第二部分ET-1对EPC增殖、细胞周期、NO分泌和凋亡的影响:1、取培养5天的细胞,分别给予不同浓度ET-1干预不同时间;2、MTT检测细胞增殖能力;3、流式细胞术检测细胞周期;4、硝酸还原酶法检测NO分泌水平;5、流式细胞术检测细胞凋亡率。统计学分析:数值均以x±s表示。数据采用SPSS11.0统计软件进行统计分析,应用单因素方差分析进行统计学分析,有统计学意义的采用LSD-t检验进一步比较。实验结果1、细胞鉴定示细胞呈DiⅠ-ac-LDL和FITC-UEA-Ⅰ双阳性,证实所得到的细胞为EPC。2、EPC增殖能力在ET-1干预后48h开始明显增强（P<0.05）,干预72h和96h后明显高于对照组（P<0.01）;在浓度为10-6mol/L时最为显著（P<0.01）。3、ET-1能够促进EPC向S期和G2/M期的转化,在浓度为10-6mol/L时达到最大效应（P<0.01）。4、EPC分泌NO能力在ET-1刺激后48h开始明显增强（P<0.05）,干预72h和96h后明显高于对照组（P<0.01）;在浓度为10-6mol/L时最为显著（P<0.01）。5、ET-1能够诱导EPC凋亡,干预48h时最显著（P<0.01）,72h、96h作用减弱。结论1、ET-1促进EPC的增殖,作用呈浓度和时间依赖性。2、ET-1促进EPC由G0/G1期向S期和G2/M期的转化,作用呈浓度依赖性。3、ET-1提高细胞NO分泌功能,作用呈浓度和时间依赖性。4、ET-1能诱导EPC凋亡,在干预48h时作用最强,之后其促凋亡作用减弱。5、ET-1可显著促进EPC增殖及凋亡,但以促进增殖效应为主。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 一、内皮素概述
• 二、内皮前体细胞概述
• 正文
• 实验一 大鼠骨髓来源内皮前体细胞的培养和鉴定
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 内皮素-1 对大鼠骨髓来源内皮前体细胞增殖、细胞周期、NO 分泌及凋亡的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 个人简历和研究成果
• 致谢