体外传代培养对人视网膜色素上皮细胞转分化的影响

论文摘要

目的:研究体外传代培养对HRPE细胞的吞噬功能、诱导淋巴细胞凋亡和细胞转分化的影响。方法:倒置相差显微镜观察体外培养HRPE细胞形态变化;采用免疫细胞化学染色方法检测其角蛋白-18及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达变化;应用流式细胞仪技术测定不同传代数HRPE细胞Fas的表达和诱导淋巴细胞凋亡的差异;应用酶标仪技术测定不同传代数HRPE细胞呑噬色素颗粒的差异。结果:HRPE细胞体外培养时形态由上皮细胞特征变化成为间质样细胞;细胞角蛋白-18表达与传代代数呈负相关（r =-0.831,P < 0.001）,α-SMA表达与传代代数呈正相关（r =0.456,P =0.002）;HRPE与淋巴细胞体外共培养时,HRPE细胞Fas表达随着传代逐渐减弱,Fas表达与传代代数呈负相关（阳性细胞率r=-0.859,P<0.001;平均荧光强度r=-0.880,P<0.001）,HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡随着传代逐渐减弱,淋巴细胞凋亡率与传代代数呈负相关（r =-0.838 ,P < 0.001）,共培养时传代HRPE细胞Fas表达迅速下降,至第3代与第4代间Fas表达差异无统计学意义（P>0.05）,共培养时传代HRPE细胞诱导淋巴细胞凋亡率迅速下降,至第3代与第4代间淋巴细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;HRPE细胞体外培养时吞噬色素功能逐渐减弱,HRPE细胞吸光度与传代代数呈负相关（r = -0.892,P < 0.001）;HRPE细胞传代时呑噬色素能力从第3代开始迅速下降,第3代与第4代间HRPE细胞吸光度差异有统计学意义（P < 0.05）。结论:体内外环境差异引起HRPE细胞体外培养时出现转分化,传代数越大细胞变异越大。传代至第3代后细胞出现间质样变化,诱导淋巴细胞凋亡能力以及吞噬功能都明显下降。第2、3代细胞形态结构和功能均与原代HRPE细胞基本一致,并且都可以稳定维持表型和功能,因此用于进行视网膜移植是非常有利的。

论文目录

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• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述 脂褐素与视网膜病