缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸体外对胶质瘤细胞系U251增殖和凋亡的影响

论文摘要

目的:应用反义核酸技术封闭缺氧诱导因子（HIF）-1α基因,研究HIF-1α反义硫代寡核苷酸对人胶质瘤细胞系U251 的增殖和凋亡的影响,探讨以HIF-1α为靶点进行胶质瘤基因治疗的可能性和有效性。方法:用氯化钴复制胶质瘤细胞化学缺氧模型,用阳离子脂质体Dosper 介导HIF-1αAsODN 体外转染人胶质瘤细胞系U251,荧光显微镜下观察转染效果,RT-PCR 法和免疫细胞化学染色检测HIF-1αmRNA 和蛋白表达的变化。以台盼蓝拒染细胞计数法和四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖抑制率（PI）, 吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色、凋亡细胞DNA Ladder 电泳分析及末端标记法（TUNEL）检测U251 细胞的凋亡情况。应用免疫细胞化学染色检测凋亡相关基因p53、Bcl-2 和Caspase-3 表达的改变,探讨HIF-1αAS-PS-ODN 诱导U251细胞凋亡的可能机制。并将AS-PS-ODN 与顺铂联合,探讨二者的协同作用。结果:1.脂质体介导HIF-1αAS-PS-ODN 转染人胶质瘤U251 细胞后,细胞内HIF-1αmRNA 和蛋白表达显著降低。2.各浓度组AS-PS-ODN 对U251 细胞增殖均有抑制作用,细胞生长抑制率最高达（56.20±4.22）%,与各对照组比较差异有显著性（P<0.01）。3. AO/EB 染色在AS-PS-ODN 组可观察到凋亡小体等凋亡细胞核形态特征,DNALadder 电泳法在AS-PS-ODN 组可看到明显的“梯状”现象,TUNEL 显示实验组细胞凋亡指数增加,最高达（32.00±2.50）%,与各对照组比较差异有显著性（P<0.05）。4. 免疫细胞化学表明AS-PS-ODN 诱导U251 细胞凋亡时,Bcl-2 表达减弱,Caspase-3 表达增强,而P53 表达无明显改变。5.AS-PS-ODN 与顺铂联合作用后,AI 和PI 分别达到（42.0±3.5）%和（72.5±4.8）%,与对照组相比有显著性差异（P<0.05）。结论:1.脂质体介导针对HIF-1α的反义寡核苷酸能在mRNA 和蛋白两个水平

论文目录

• 英文缩略词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 小结
• 综述 缺氧诱导因子1α与胶质瘤治疗研究进展
• 硕士期间已撰写和发表的论文
• 致谢