黄芪有效组分的提取分离及结构鉴定

论文摘要

黄芪为豆科植物,以根入药。多年来一直以黄芪甲苷为其质量控制指标,药理学研究结果表明,黄芪中产生药效的有效成分还有黄芪黄酮、黄芪皂苷和黄芪多糖等。本课题为提高这三类化学成分的提取率,采用酶解法首先处理黄芪药材,然后再进行黄芪黄酮、黄芪皂苷和黄芪多糖的提取分离,达到了预期的实验目的。研究确定的实验结果:采用正交实验法确定了在pH4.6、纤维素酶用量0.8%、温度60℃、酶解120min的条件下,对黄芪药材进行提取前处理,使得黄芪多糖、黄芪总黄酮和黄芪总苷的提取率都有大幅度的提高。其中黄芪多糖的提取率比未酶解的黄芪提高了300%以上。酶解后的黄芪药材采用80%乙醇回流提取法提取总黄酮和总皂苷,再用组合分离技术进行分离纯化:聚酰胺吸附总黄酮后的水洗脱液流经D101大孔吸附树脂吸附总皂苷,达到分离纯化总黄酮和总皂苷的目的,二者的提取率分别为4.79%和1.26%,纯度依次为58.0%和79.3%。进一步利用碱水解法从总皂苷中富集纯化得到了两个单体化合物,经结构鉴定分别为AstragalosideⅢ和AstragalosideⅣ。经乙醇提取后的黄芪药渣挥尽乙醇,按固液比1:11的量加入蒸馏水,回流提取3次,每次75 min,总糖提取率可达33.6%。采用超滤法分段收集黄芪总多糖,其分子量大于50000Da的多糖约占12.23%,在10000～50000Da之间的多糖占68.25%,而小于10000 Da的占19.52%。纤维素酶技术的应用使黄芪资源得到了充分的利用,有效组分的研究扩大了临床药效指标。酶解-膜分离-色谱技术的联合应用,为黄芪有效组分的工业化生产提供了科学依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献综述
• 实验部分
• 1 材料与仪器
• 1.1 药材及来源
• 1.2 试药与试剂
• 1.3 仪器与设备
• 2 实验方法
• 2.1 黄芪药材酶解方法的建立
• 2.2 分离材料的预处理
• 2.2.1 聚酰胺的预处理
• 2.2.2 大孔吸附树脂的预处理
• 2.3 黄芪总黄酮的提取分离和分析方法的建立
• 2.3.1 黄芪总黄酮的提取分离
• 2.3.2 黄芪总黄酮的定性鉴别
• 2.3.3 黄芪总黄酮的含量测定
• 2.4 黄芪总皂苷的提取分离和分析方法的建立
• 2.4.1 黄芪总皂苷的提取分离
• 2.4.2 黄芪总皂苷的定性鉴别
• 2.4.3 黄芪总皂苷的含量测定
• 2.5 黄芪多糖的提取分离和分析方法的建立
• 2.5.1 黄芪多糖的提取分离
• 2.5.2 黄芪多糖的检识
• 2.5.3 黄芪多糖含量测定
• 3 结果与讨论
• 3.1 黄芪药材酶解条件的优选
• 3.1.1 单因素实验考察
• 3.1.2 正交实验优选
• 3.1.3 黄芪酶解条件的验证实验
• 3.2 黄芪总黄酮
• 3.2.1 提取条件的优化
• 3.2.1.1 乙醇浓度对总黄酮提取的影响
• 3.2.1.2 提取时间对总黄酮提取的影响
• 3.2.1.3 固液比对总黄酮提取的影响
• 3.2.1.4 提取次数对总黄酮提取的影响
• 3.2.2 黄芪总黄酮的分离纯化
• 3.2.2.1 聚酰胺的吸附量
• 3.2.2.2 乙醇洗脱浓度的选择
• 3.2.2.3 水及80%乙醇洗脱用量
• 3.2.3 黄芪总黄酮的定性鉴别
• 3.3 黄芪总皂苷的分离纯化及黄芪皂苷Ⅲ、Ⅳ的分离及结构鉴定
• 3.3.1 黄芪总皂苷的分离纯化
• 3.3.1.1 D101大孔树脂吸附容量的确定
• 3.3.1.2 乙醇洗脱浓度的选择
• 3.3.1.3 水及80%乙醇洗脱用量
• 3.3.2 黄芪总皂苷的定性鉴别
• 3.3.3 黄芪皂苷Ⅲ、Ⅳ的富集、纯化
• 3.3.3.1 黄芪皂苷Ⅲ、Ⅳ的分离纯化
• 3.3.3.2 黄芪皂苷Ⅲ、Ⅳ结构鉴定
• 3.4 黄芪多糖
• 3.4.1 提取条件的优化
• 3.4.1.1 提取时间对黄芪多糖提取的影响
• 3.4.1.2 固液比对黄芪多糖提取的影响
• 3.4.1.3 提取次数对黄芪多糖提取的影响
• 3.4.2 黄芪多糖膜分离条件的优化
• 3.4.2.1 操作温度对膜分离过程的影响
• 3.4.2.2 操作压力对膜分离过程的影响
• 3.4.2.3 药液的浓度对膜分离过程的影响
• 3.4.2.4 黄芪多糖分子量的分布
• 3.4.3 黄芪多糖的检识
• 结论与分析
• 致谢
• 参考文献
• 附图