新型长效促红细胞生成素（LL-rHuEPO）的临床前药代动力学研究

论文摘要

促红细胞生成素（EPO）是由肾脏分泌的一种活性糖蛋白,能与表达于红细胞表面的EPO受体结合,刺激骨髓中红系造血母细胞的增殖和分化。近年来研究显示,EPO是具有多种活性的生长因子,EPO—RmRNA,EPO—R蛋白,EPO与EPO·R结合广泛存在于大脑,心血管组织,肝脏,胃肠道组织,胰岛等非红细胞生成细胞与器官。自从1989年美国正式批准基因工程药rHuEPO进入市场以来,重组人促红细胞生成素（rHuEPO）已广泛用于临床,治疗各种类型的贫血病。但市场上的各种rHuEPO药物的生物半衰期短（4—8小时）,临床使用注射次数多。目前新制剂的发展方向为拉长其半衰期,主要着眼于氨基酸的置换或者氨基酸的修改,增加糖链或者两个独立的EPO片段的连接,这样就延长了rHuEPO生物半衰期,患者由每周两三次注射改变为每周一次或者两周一次,大大减轻了患者的痛苦。由国内研究机构研制的新型长效促红细胞生成素（LL-rHuEPO）,目前正拟申报此类新药。研究该药物在大鼠体内的药代动力学规律,阐明药代动力学特点,提供重要的药代动力学参数,为过渡到临床研究提供必要的依据。本研究采用125I同位素示踪法研究LL-rHuEPO不同给药途径及不同给药剂量下在大鼠体内的药代动力学、组织分布以及排泄规律,所得结果如下:1.LL-rHuEPO在大鼠体内的药代动力学研究:单次静脉注射1,2,3ug/kg125I—LL-rHuEPO后,通过统计矩的方法计算所得的主要药代动力学参数是:血药浓度—时间曲线下面积(AUC（0-48h）)分别为:192.137,329.434,641.622（ug/L/h）;Cmax分别为:12.1,18.874,29.398（ug/L）。AUC、Cmax与剂量呈线性关系。消除半衰期t1/2z分别为:20.457h,25.053h,20.409h。单次肌肉注射1,2,3 ug/kg125I—LL-rHuEPO后,通过统计矩的方法计算所得的主要药代动力学参数是:清除率CLz/F从0.001到0.006 L/h/kg;消除半衰期t1/2z从25.258h到287.91h,但多数维持在40—60之间;药物在体内的平均驻留时间MRT（0-t）基本一致,范围从33.664h到34.883h;Cmax与AUC（0-72h）表现与剂量呈明显的线性关系。2.LL-rHuEPO在大鼠体内的组织分布:SD大鼠经肌肉注射2ug/kg125I—LL-rHuEPO,测定不同时间不同组织的药物浓度。给药后8h、24h、48h,LL-rHuEPO主要分布在注射部肌肉,血浆,骨髓中,骨髓是其主要作用部位。血流量大的组织:心,肾,肝等次之,脑,小肠,大肠等分布最少。3.LL-rHuEPO在大鼠体内的排泄:SD大鼠静脉注射2ug/kg125I—LL-rHuEPO后11天内,粪、尿的总排泄量为22.09%,其中尿累积量占20.7%,而粪只占1.39%。结论1.大鼠静脉注射1,2,3ug/kg LL-rHuEPO后,消除半衰期20-25h之间。2.大鼠肌肉注射1,2,3ug/kg的LL-rHuEPO后,消除半衰期30-60h之间。3.LL-rHuEPO的消除半衰期明显长于rHuEPO。4.LL-rHuEPO肌肉注射生物利用度较高（约81%）。5.大鼠肌肉注射2ug/kg的LL-rHuEPO后组织分布广泛,骨髓是其主要作用部位。6.LL-rHuEPO主要经肾由尿排泄,在体内经受广泛的代谢转化为代谢物而消除。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 引言
• 1 药代动力学概述
• 1.1 蛋白多肽类药物动力学
• 1.1.1 蛋白多肽类药物动力学研究的复杂性
• 1.1.2 蛋白多肽类药物药代动力学的分析方法
• 1.2 药动学模型
• 1.2.1 房室模型
• 1.2.2 生理模型
• 1.2.3 非房室模型
• 1.3 药动学中的应用统计软件
• 2 EPO的研究进展
• 2.1 EPO的研究历程
• 2.2 EPO的生理功能
• 2.3 促红细胞生成素的特性
• 2.3.1 EPO的化学特征
• 2.3.2 EPO的分子生物学特征
• 2.4 促红细胞生成素的分类
• 2.4.1 天然促红细胞生成素
• 2.4.2 非天然促红细胞生成素
• 2.4.3 长效EPO的结构及长效机理
• 3 本研究的目的和意义
• 材料与方法
• 1 试验材料
• 1.1 药品与试剂
• 1.1.1 受试药物
• 125Ⅰ—LL-rHuEPO的制备'>1.1.2¹²⁵Ⅰ—LL-rHuEPO的制备
• 1.1.3 其它
• 1.2 试验仪器
• 1.3 试验动物
• 2 试验方法
• 125Ⅰ—LL-rHuEPO生物活性鉴定'>2.1¹²⁵Ⅰ—LL-rHuEPO生物活性鉴定
• 2.2 血浆药物浓度-时间曲线试验
• 2.2.1 股动、静脉插管大鼠的制备
• 2.2.2 给药剂量与途径
• 2.2.3 血浆样品处理
• 2.2.4 三氯乙酸（TCA）沉淀法测定血浆药物浓度
• 2.3 组织分布试验
• 2.4 排泄试验
• 2.5 数据处理
• 试验结果
• 125Ⅰ—LL-rHuEPO生物活性鉴定'>1¹²⁵Ⅰ—LL-rHuEPO生物活性鉴定
• 125Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠体内的药代动力学'>2¹²⁵Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠体内的药代动力学
• 125Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠体内的血药浓度'>2.1¹²⁵Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠体内的血药浓度
• 125Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠体内的药代动力学参数'>2.2¹²⁵Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠体内的药代动力学参数
• 125Ⅰ-LL-rHuEPO后的药代动力学参数'>2.2.1 大鼠静脉注射¹²⁵Ⅰ-LL-rHuEPO后的药代动力学参数
• 125Ⅰ-LL-rHuEPO后的药代动力学参数'>2.2.2 大鼠肌肉注射¹²⁵Ⅰ-LL-rHuEPO后的药代动力学参数
• 125Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠体内分布'>3¹²⁵Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠体内分布
• 125Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠粪、尿中的排泄'>4¹²⁵Ⅰ-LL-rHuEPO在大鼠粪、尿中的排泄
• 讨论
• 1 药物浓度的检测方法
• 1.1 检测方法的选择
• 1.2 同位素的选择
• 125Ⅰ作为示踪剂检测血药浓度方法的建立'>1.3¹²⁵Ⅰ作为示踪剂检测血药浓度方法的建立
• 1.4 同位素标记物生物活性鉴定方法的选择
• 2 药代动力学参数分析
• 3 分布
• 4 排泄
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录