雌、雄激素对鸡破骨细胞生物学活性的研究

论文摘要

破骨细胞是动物体内代谢较旺盛的细胞之一,它参与骨代谢,并在骨重建过程中起着启动和先锋作用。有研究表明雌、雄激素具有抑制破骨细胞的活性及刺激破骨细胞凋亡的作用。本文研究了不同浓度雌、雄激素的培养液对体外培养鸡破骨细胞生物学活性及凋亡的影响,体外研究了笼养青年蛋鸡产蛋前期骨骼及破骨细胞的形态学变化,探讨了雌、雄激素影响下,破骨细胞体内、体外的生物学活性变化。试验研究分为三大部分：试验Ⅰ、雌激素、雄激素对破骨细胞凋亡的影响目的：研究雌激素、雄激素单独及联合作用对体外培养破骨细胞凋亡的影响。方法：机械分离鸡胚破骨细胞,获得破骨细胞悬液,在细胞培养瓶中培养破骨细胞,随机分为空白对照组、雌激素组、雄激素组和雌雄激素联合作用组。流式细胞仪检测破骨细胞凋亡结果。结果：试验结果表明,与空白对照组比较,雌激素组（400 pg·mL-1）,雄激素组（400 pg·mL-1）及雌雄激素联合作用组（200 pg·mL-1+200 pg·mL-1）的破骨细胞凋亡率分别提高了9.9%、16.1%、5.8%。结论：雌激素、雄激素单独及联合作用均能促进破骨细胞的细胞凋亡。试验Ⅱ、雌、雄激素对破骨细胞功能的影响目的：研究雌激素、雄激素对破骨细胞生物学功能的影响。方法：重氮盐法检测破骨细胞分泌的TRAP活力；噬骨实验以及原子吸收光谱法测定钙离子含量,观察破骨细胞的骨吸收作用。结果：与对照组相比,试验组的雌激素、雄激素单独及联合应用均可降低体外破骨细胞培养液上清的TRAP酶活性,其中400 pg·mL-1的雄激素组差异极显著（P<0.01）。此外,试验组的骨吸收陷窝数量及吸收陷窝面积与对照组相比有不同程度的缩小。雌、雄激素单独或联合应用组其骨吸收指数均小于1,雌激素（200 pg·mL-1、800 pg·-mL-1、2000 pg·mL-1）雄激素（400 pg·mL-1、800 pg·mL-1、2000 pg·mL-1）或雌、雄激素联合应用（各100pg·mL-1、各200pg·mL-1、雌激素200pg·mL-1+雄激素100pg·mL-1）组钙离子浓度显著降低。结论：雌激素、雄激素及雌、雄激素联合应用均能抑制破骨细胞的活性。试验Ⅲ、雌、雄激素对产蛋前期ISA蛋鸡骨内破骨细胞的数量及活性的影响目的：探讨雌、雄激素对产蛋前期ISA笼养蛋鸡骨内破骨细胞数量及活性的影响。方法：240羽92日龄青年期ISA蛋鸡随机分成4组,空白对照组、雌激素组、雄激素组、雌雄激素联合作用组,定期随机每组取10只鸡翅静脉采血5 mL,分光光度计测定抗酒石酸酸性磷酸酶活性。每隔五天随机每组抽取五只麻醉处死,取股骨头端样本,脱钙后做石蜡切片,甲苯胺蓝染色,观察各个时期的破骨细胞形态。比较各个时间点的骨切片。结果：比较各个时间点的骨切片,可见明显的骨陷窝。另外,不同时间点的蛋鸡血清TRAP酶浓度比较后发现,与空白组对照,试验组动物的TRAP水平明显偏低,其中雌激素组作用最显著。结论：雌、雄激素抑制产蛋前期ISA蛋鸡破骨细胞活性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语
• 前言
• 上篇 文献综述
• 第一章 破骨细胞研究进展
• 1 破骨细胞的来源、培养与鉴定
• 1.1 破骨细胞的来源
• 1.2 破骨细胞的培养与鉴定
• 2 破骨细胞的分化
• 2.1 破骨细胞分化的信号传导途径
• 2.2 破骨细胞活化后的形态学特点
• 3 破骨细胞的骨吸收机制
• 3.1 破骨细胞性骨吸收的调节因子
• 3.2 破骨细胞的质子泵调控
• 4 破骨细胞凋亡
• 4.1 细胞凋亡的途径
• 4.2 破骨细胞凋亡的调节因子
• 参考文献
• 第二章 雌、雄激素对破骨细胞功能影响的研究进展
• 1 雌、雄激素的来源及对骨的作用
• 1.1 雌、雄激素的来源和结构
• 1.2 雌、雄激素的受体基因
• 1.3 雌、雄激素的生理学特点及对骨的作用
• 2 雌、雄激素对破骨细胞功能的调节
• 2.1 雌、雄激素作用下破骨细胞形态和功能的变化
• 2.2 雌、雄激素影响破骨细胞功能的途径[20]
• 参考文献
• 下篇 试验研究
• 第三章 雌、雄激素对破骨细胞凋亡的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 2 结果
• 2.1 破骨细胞鉴定及形态学观察
• 2.2 雌、雄激素对破骨细胞细胞凋亡的影响
• 3 讨论
• 3.1 体外培养破骨细胞实验方法的改进
• 3.2 雌、雄激素与破骨细胞的凋亡
• 4 本章小结
• 参考文献
• Abstract
• 第四章 雌、雄激素对破骨细胞功能的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 TRAP酶浓度的变化
• 2.2 破骨细胞吸收功能的测定
• 3 讨论
• 3.1 破骨细胞的TRAP酶活性
• 3.2 噬骨实验
• 4 本章小结
• 参考文献
• Abstract
• 第五章 雌、雄激素对产蛋前期ISA蛋鸡骨内破骨细胞的数量及活性的影响
• 1 材料和方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 实验动物
• 1.3 主要仪器设备
• 1.4 试验方法
• 1.5 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 破骨细胞及骨形态学观察
• 2.2 TRAP酶浓度的变化
• 3 讨论
• 3.1 髓质骨与破骨细胞
• 3.2 雌、雄激素对破骨细胞形态及活性的影响
• 4 本章小结
• 参考文献
• Abstract
• 全文总结
• 论文特色与创新之处
• 致谢
• 附录