中国西北地区血友病B的基因诊断

论文摘要

研究背景：血友病B（Hemophilia B HB）是由于凝血因子Ⅸ（factorⅨ,FⅨ）的基因突变,导致了血浆FIX数量的缺乏或者质量的缺陷,从而引起的X连锁隐性遗传性出血性疾病。本文为了研究西北地区HB患者的FⅨ基因的突变谱的特征,建立最优化的分子诊断策略,找出基因型-表型的相互关系,为HB的早期准确性诊断、治疗和预防提供科学的依据。方法：1.取4个无亲缘关系的HB家系（共23人）成员、3名无亲缘关系的散发HB患者血清样本,进行DNA的提取。2.通过常规检测患者的PT.APTT和FⅨ:C来进行筛查及确诊。3.利用PCR方法对4个家系成员扩增6个STR位点片段,检测各个成员的6个位点的多态性,进行4个家系的遗传连锁分析。4.利用PCR方法对3位HB患者的8个FⅨ基因外显子序列进行扩增,用直接测序法对扩增产物进行测序,其结果用Chromas与正常序列对比,找出突变的基因。结果1.选择在国人中具有一定多态性频率的FⅨ基因内外的6个STR位点,对4个血友病B家系共23人进行基因连锁分析,其中7个HB患者通过全部检出,另外还检出6个携带者。2.用直接测序方法对3名无家族史的散发HB患者检测到3个不同的突变,（突变检测率达到了100%）1号患者有外显子2点突变（A→C）；2号患者有外显子8点突变（G→A）；3号有外显子2点突变（C/T型）。结论1.在所选的HB患者的基因突变中未发现突变热点。2.突变类型和基因缺失的严重程度的基因型-表型不相关。3.联合6个STR位点对西北地区HB家系患者的遗传分析是有效的间接诊断方法。4.直接测序8个外显子和侧翼序列被认为是血友病B患者特别是无家族史的散发病例的诊断金标准。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 前言
• 1.1 血友病B
• 1.1.1 血友病的概述及分类
• 1.1.2 血友病B的概述
• 1.1.3 血友病B的病因和遗传规律
• 1.1.4 血友病B发病的分子机理
• 1.1.5 血友病B的FⅨ基因突变
• 1.1.6 血友病B的临床症状及分型
• 1.1.6.1 血友病B的临床症状
• 1.1.6.2 血友病B的临床分型
• 1.1.7 血友病B的治疗现状
• 1.2 血友病B的基因诊断
• 1.2.1 血友病B的基因诊断的概述
• 1.2.2 血友病B间接基因诊断
• 1.2.3 血友病B直接基因诊断
• 第二章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 标本
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 试剂的配置
• 2.2 方法
• 2.2.1 标本的采集和处理
• 2.2.2 DNA的提取及检测
• 2.2.2.1 DNA的提取
• 2.2.2.2 DNA的检测
• 2.2.3 筛查及确诊实验
• 2.2.4 STR位点多态性测定
• 2.2.4.1 PCR反应体系
• 2.2.4.2 PCR反应条件
• 2.2.4.3 PCR产物分析
• 2.2.5 FⅨ基因外显子扩增及直接测序
• 2.2.5.1 PCR反应体系
• 2.2.5.2 PCR反应条件
• 2.2.5.3 直接测序分析
• 第三章 结果
• 3.1 筛查及确诊实验结果
• 3.2 STR位点测定结果
• 3.3 直接测序结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 在校期间发表文章
• 英文缩略词表
• 致谢