日本毛连菜和细辛的生药学研究

论文摘要

日本毛连菜（Picris japonica Thunb.）隶属菊科毛连菜属（Picris L.）,又名枪刀菜,主要分布在我国河北、山西、吉林、黑龙江等地。日本毛连菜全草入蒙药,具有清热、消肿及止痛作用,主治流感、乳痈。目前,关于日本毛连菜的化学成分研究有一些相关报道,有关生药学的研究报道很少。为了建立日本毛连菜显微鉴定方法,为日本毛连菜的显微鉴定提供依据,本文采用显微鉴定和扫描电镜技术,对日本毛连菜根、茎、叶、果实进行组织鉴定,对全草进行粉末鉴定,并对花粉和果实进行了表面微形态观察。其研究结果如下：1、日本毛连菜的显微结构。①根横切面,表皮细胞一列,老根外侧有木栓层数列,有节乳汁管散在分布于韧皮部中,髓射线明显。②茎横切面,表皮细胞一列,表皮上有腺毛和非腺毛,内皮层明显。③叶横切面,表皮由1列细胞构成,栅栏组织细胞为1-2列,不通过主脉,主脉维管束1-5个,外韧型,大小相间,略呈半环状排列。④叶表皮形态,上、下表皮均有非腺毛、腺毛和气孔分布,上表皮细胞垂周壁较平直,下表皮细胞垂周壁波状弯曲；气孔为不等式或不定式,副卫细胞多为4-6个。⑤日本毛连菜地上部分被覆的非腺毛的顶端由2个细胞特化为分叉钩状,细胞壁增厚明显,基部由多个纵向伸长的细胞构成；腺毛有两种。⑥花粉粒刺状纹饰,有三个萌发孔。⑦全草粉末观察,多见非腺毛2个分叉的顶端碎片和腺毛多细胞的头部；花粉粒常见,类圆形,外壁有刺状突起,有三个萌发孔：导管多为螺纹导管和具缘纹孔导管；断碎的冠毛较多；乳汁管为有节乳汁管。2、花粉和果实的表面微形态。花粉粒外壁刺状纹饰基部粗大,刺状突起呈环形排列或数个密集成群；网眼小且深,大小、形状相近；萌发孔三个,具大型瘤状突起,瘤状突起为脑纹状纹饰。果实有5-10余条高起的纵肋和5条较深的纵沟,纵沟贯穿果实两端,纵沟内有较多指状突起。外果皮细胞狭长形、先端呈游离的指状突起,游离部分呈层叠环绕果实排列。果实两顶端侧面观和俯面观特征明显,一端俯面观呈五瓣花形；另一端俯面观呈五角星形,中间有孔,表面有许多长条状细胞紧密排列而成。上述显微结构和扫描电镜微形态特征的观察,为日本毛连菜的生药鉴定提供了重要的依据。细辛是常用中药,来源于马兜铃科细辛属Asarum植物北细辛A. heterotropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum （Maxim.） Kitag.、汉城细辛A. sieboldii Miq. var. seoulense Nakai或华细辛A. sieboldii Miq.干燥的根和根茎,具多种功效,主治风寒感冒、头痛牙痛等病症。华细辛广泛分布于黄河和长江流域,其中,陕西华阴的药材历来皆被认为品质最佳。然而,实际上却缺乏有效的依据。本文通过挥发油含量及其化学成分的分析,对华细辛挥发性成分的地区性差异进行了比较。细辛具一定毒性,自古已有很多记载,然而迄今为止,对于细辛毒性的表现形式、毒性成分以及致毒机制,仍缺乏深入了解。本文较为系统地比较了细辛常用剂型水煎剂、散剂和复方制剂（麻黄附子细辛汤）对SD大鼠的肾、肝、肺、胃、肠等重要脏器的毒害作用。研究结果如下：1、挥发油含量及其化学成分分析。测定了浙江、江西、安徽、山东、湖南、湖北、四川、重庆、陕西等省市25个样点华细辛的叶和根及根茎中挥发油的含量,比较了其挥发性成分绝对含量与组成差异。①华细辛根及根茎的挥发油含量均值为2.87%,而叶的挥发油含量均值为0.23%。华细辛叶中挥发油含量远低于根及根茎中挥发油含量。②不同产地间华细辛挥发油含量有显著性差异（P<0.05）,其部分成分如α-蒎烯、香桧烯、β-蒎烯、松油烯、桉叶素、γ-蒎烯、4-萜品醇、α-松油醇、3,5-二甲氧基甲苯、黄樟醚、甲基丁香酚、肉豆蔻醚、榄香脂素等含量也存在显著性差异（P<0.05）,莰烯、月桂烯、α-水芹烯、对-聚伞花素等成分的含量无显著性差异（P>0.05）。2、细辛的毒性与其剂型剂量有密切相关性。细辛水煎剂和复方制剂麻黄附子细辛汤在细辛生药量0.625 g·kg-1·d-1（6g／人）和3.125 g·kg-1·d-1（30g／人）的剂量下,各项生化指标与空白对照组比较,均无显著性差异,肾脏组织切片亦无病理形态学变化。麻黄附子细辛汤在细辛生药量增加至6.25 g·kg-1·d-1（60g／人）时,大鼠表现出轻度肾脏损伤。细辛散剂在0.94 g·kg-1·d-1（9g／人）的剂量下,大鼠血清肌酐明显偏高,肾脏和肝脏中度损伤,肺脏轻度损伤；在2.81 g·kg-1·d-1（27g／人）的剂量下,大鼠陆续死亡,肾、肝和肺等脏器重度损伤。可见,在大鼠中,细辛的毒性主要表现在肾、肝、肺等脏器损伤,对肠、胃等脏器无损伤。细辛散剂的毒性显著强于水煎剂和复方制剂麻黄附子细辛汤。3、华细辛AFLP反应体系的建立。采用改良的CTAB法,建立了适于AFLP分析的华细辛基因组DNA的提取方法。结果表明：采用含2%CTAB、2mol/LNaCl、luLβ-琉基乙醇的DNA提取液,酚／氯仿抽提两次,提取得到的华细辛基因组DNA纯度高,基本无降解,适于AFLP分析要求。经对比研究,华细辛AFLP分析的优化反应体系如下：25 uL酶切体系中加入基因组DNA500ng,EcoRI 10U,Mse I 5 U,37℃酶切3h；12.5 uL连接反应体系中加入Mse I adaptor 25 pmol, EcoR I adaptor 2.5 pmol, T4DNA ligase 175 U,酶切产物10μL,在16℃连接过夜（12h～16h）；预扩增产物稀释150倍进行选择性扩增；8 uL选择性扩增产物加入3 uL Loading buffer,95℃变性5 min后,立即冰上冷却,于6%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳,然后进行银染,拍照。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 日本毛连菜的生药学研究
• 前言
• 第一章 日本毛连菜的显微鉴定研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二章 日本毛连菜花粉及果实的超微结构研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三章 结论与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 参考文献
• 第二部分 细辛的生药学研究
• 前言
• 第四章 不同产地华细辛的挥发油含量测定及其化学成分分析
• 1 材料与方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 第五章 细辛的毒性研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第六章 华细辛AFLP反应体系的建立
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果与分析
• 4 讨论
• 第七章 结论与展望
• 1 结论
• 2 展望
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附图
• 图版Ⅰ:日本毛连菜根及茎的组织构造
• 图版Ⅱ:日本毛连菜叶及花粉的组织构造
• 图版Ⅲ:日本毛连菜全草粉末装片
• 图版Ⅳ:日本毛连菜果实微形态
• 图版Ⅴ:扫描电镜下日本毛连菜花粉粒微形态
• 图版Ⅵ:大鼠脏器的病理切片
• 个人简介
• 致谢