论文摘要
hAph2基因是本实验室大规模功能基因筛选中从人胎盘cDNA文库中克隆获得的一个新基因（GenBank Access No.AF258563）,具有自主知识产权,由于hAph2基因与小鼠Aph2（Abl-philin 2）基因在氨基酸水平具有96%同源性,因此将其命名为“human Aph2”基因（简写为hAph2）。该基因定位于人染色体10q24.1,有五种亚型:hAph2α,hAph2β,hAph2γ,hAph2δ和hAph2ε,编码ZDHHC16（zinc finger,DHHC-type containing 16）蛋白,含有DHHC/zf-DHHC和DPG功能域,前者又称为NEW1。本研究着重分析hAph2基因在COS-7细胞中的表达和hAPH2蛋白对细胞生长的影响。含有GFP标签的野生型hAph2α-GFP,hAph2β-GFP,hAph2γ-GFP和hAph2δ-GFP转染COS-7细胞48小时后,采用流式细胞术,western blotting及细胞免疫荧光观察等方法对COS-7细胞研究分析发现,hAph2基因在COS-7细胞中外源性表达有多聚体和单体两种形式,而且hAPH2蛋白主要定位于核周细胞质,并且可诱导COS-7细胞发生凋亡。为深入探讨hAPH2蛋白诱导COS-7细胞发生凋亡的机制,我们又构建两种突变体表达载体hAph2βΔDHHC-GFP和hAph2βΔDPG-GFP。我们主要运用western blotting技术,检测凋亡主要执行者Caspases,MAPK超家族成员和其它凋亡相关蛋白。结果发现,hAph2γ,hAph2δ,hAph2ΔDHHC和hAph2ΔDPG基因表达使得Caspases剪切活化体增多,JNK和Fas-FasL信号转导途径轻度活化。初步证实hAPH2蛋白诱导COS-7细胞发生凋亡的机制,以及DHHC和DPG这两个主要功能域对细胞的保护作用。我们还采用免疫共沉淀技术和荧光免疫细胞化学观察方法,初步筛选与hAPH2β蛋白相互作用的蛋白,初步证实hAPH2β在肝癌SMMC-7721细胞中可与c-Ab1相互作用。