选择性COX-2抑制剂塞来昔布联合照射及表柔比星对乳腺癌细胞的作用和机制

论文摘要

目的研究环氧化酶-2蛋白（cyclooxygenase-2，COX-2）在乳腺癌组织中的表达情况与临床病理指标及预后之间的联系，探讨其与VEGF（血管内皮生长因子）和HER-2／neu表达的关系。方法应用免疫组织化学方法检测60例乳腺癌石蜡包埋组织中COX-2、HER-2／neu和VEGF的表达。结果60例乳腺癌组织中COX-2表达的阳性率为38.3％（23／60）。Chi-square检验显示在淋巴结转移阳性组和阴性组以及不同临床分期的病人之间COX-2的表达差异有显著意义（P＜0.05）；而与病人年龄、肿瘤大小、病理类型、ER、PR等因素不存在显著性差异（P＞0.05）。COX-2在乳腺癌组织中的表达与HER-2／neu、VEGF的表达密切相关（P＜0.01）。COX-2和HER-2／neu共同表达的患者与两者单独表达的患者相比，前者的TNM分期较晚，有显著差异（P=0.027）。COX-2和VEGF共同表达与单独表达的TNM分期无显著差异（P=0.479）。COX-2低表达的患者总生存期较长，与高表达患者的总生存期有显著差异（P＜0.005）。结论乳腺癌组织中存在COX-2的高表达。乳腺癌组织中COX-2的高表达可提示肿瘤的恶性程度高和预示预后不良。乳腺癌组织中COX-2表达与HER-2／neu、VEGF的表达相关，且具有COX-2和HER-2／neu蛋白同时表达者预后更差。目的探讨选择性环氧化酶抑制剂塞来昔布对不同COX-2蛋白表达水平人类肿瘤细胞株的放射增敏作用及其作用发生机制。方法选用两种人类肿瘤细胞系：乳腺癌细胞MCF-7（低COX-2蛋白表达）和肺癌细胞A549（高COX-2蛋白表达）为研究对象。RT-PCR检测COX-2表达，MTT法及克隆形成法测定塞来昔布对两种细胞系的细胞毒作用及放射增敏作用及流式细胞仪（FCM）检测细胞周期分布、细胞凋亡指数。结果塞来昔布作用于MCF-7细胞30h后的IC50值为43.7±1.12μmol／l；作用于A549细胞24h后的IC50值为37.5±0.80μmol／l。塞来昔布联合射线作用于A549细胞，与单纯照射组比较出现了明显的抑制增强作用（P＜0.05），SER均大于1，在MCF-7细胞中则没有观察到这些现象。细胞周期检测发现，两种细胞各组都出现了不同的周期分布。塞来昔布组G0／G1期细胞比例增加；照射组的细胞则大多处于G2╱M期。不同浓度的塞来昔布，10～80μmol／l作用6h后，均未观察到明显的凋亡现象。两种细胞照射组与照射加药组测得的凋亡均无显著差异。结论塞来昔布对MCF-7、A549细胞有增殖抑制作用，并呈时间和剂量依赖性；其作用不完全呈COX-2依赖；塞来昔布能显著增加A549细胞放射诱导的增殖抑制作用，但不通过凋亡途径而与抑制COX-2蛋白，改变细胞周期分布等机制有关。目的：研究COX-2选择性抑制剂塞来昔布增强表柔吡星对MCF-7细胞的抗肿瘤作用，探讨药物联合作用的机制。方法：实验分为对照组（C），塞来昔布组（Ce），表柔吡星组（E）和联合用药组（Ce+E），将MCF-7细胞分组处理后，用MTT法检测塞来昔布或／和表柔吡星对乳腺癌细胞的生长抑制效应，RT-PCR检测MCF-7细胞COX-2的表达，Hochest33258染色法和流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡，Western印迹技术测定MCF-7细胞bcl-2／bax、caspase-3、stat1、stat3、stat5b的表达。结果：MCF-7细胞存在COX-2低表达，塞来昔布可抑制COX-2表达。塞来昔布和表柔吡星均能抑制MCF-7细胞增殖，呈时间和剂量依赖性；Ce+E后则抑制作用更加明显，抑制率达0.877±0.023，与单用E抑制率0.503±0.018比较，统计学差异显著（p＜0.05）；塞来昔布的增敏比为1.74。Hochest33258及流式细胞仪检测结果显示，单用塞来昔布处理需作用36小时才出现明显的细胞凋亡，而表柔吡星处理后6小时即出现明显凋亡；联合塞来昔布后，凋亡更加明显。Western印迹分析结果显示，在单独用Ce或E处理MCF细胞，bcl-2表达轻微下调，联合两种药物处理后，bcl-2表达下调显著，bax表达则无变化。同时发现与bcl-2表达下调相反，caspase-3则有不同程度上调，以联合药物组最明显，并出现清晰的裂解片段，表明caspase-3裂解被激活。另一方面，单独Ce处理MCF-7细胞后，未见到stat1、stat3、stat5b、p-stat5表达改变，单用E处理后，则发现有轻度表达下调，联合应用药物组则出现比较明显的下调。结论：塞来昔布和表柔吡星对乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制和凋亡存在协同作用，这些作用是通过下调bcl-2表达，激活caspase-3凋亡通路，以及下调stat1、stat3、stat5增殖信号凋亡通路而实现的，这些结果提示塞来昔布作为表柔吡星的增敏剂有潜在的应用价值。

论文目录

• 常用英文缩写
• 第一部分 环氧化酶-2蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义分析
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 选择性COX-2抑制剂塞米昔布对COX-2表达阳性肿瘤细胞的放射增敏作用及机制
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第三部分 选择性COX-2抑制剂塞来昔布增强表柔吡星对乳腺癌细胞的作用及机制
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 实验材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述一 环氧化酶-2在乳腺癌中的作用研究进展
• 综述二 COX-2抑制剂在乳腺癌药物治疗中的研究进展
• 致谢
• 在读期间发表的论文和承担的课题