小麦近缘种EST-PCR分子标记的开发研究

论文摘要

为了检测追踪通过远缘杂交导入小麦背景的外源染色体,使用含外源染色体的附加/代换系及其亲本材料,基于小麦第二群已定位EST,采用Intron-Flanking思想设计候选标记引物,配合“三级分离系统”分离扩增产物,分别开发了两套外源染色体特异的EST-PCR功能标记。其中中间偃麦草抗黄矮病染色体2Ai-2特异标记15个,这些标记均匀分布于2B染色体8个bin内并被进一步定位到了外源染色体长/短臂上;大麦抗穗发芽2H染色体特异标记30个,尽管因缺少端体材料无法进一步定位到长/短臂,但是在2B染色体上标记密度较高,标记特异性较好。标记开发结果表明,利用小麦已定位EST开发小麦近缘种特异的EST-PCR标记是可行的。

论文目录

• 内容提要
• 第一章：绪论
• 1. 小麦远源杂交育种与外源有益性状导入
• 1.1 小麦黄矮病
• 1.2 小麦穗发芽
• 1.3 向普通小麦导入外源有益性状
• 2. 外源导入物的检测
• 2.1 分子标记检测外源导入物
• 2.2 EST 与基于EST 标记
• 2.2.1 EST 与EST 数据库
• 2.2.2 利用丰富的EST资源开发EST-PCR标记
• 2.2.3 EST-PCR 标记的优点及应用现状
• 3. 研究目的和技术路线
• 3.1 研究目的
• 3.2 技术路线
• 第二章：研究报告
• 1. 实验材料
• 1.1 植物材料
• 1.2 已定位小麦族 EST（mapped wEST）－EST-PCR 标记的起源
• 2. 实验方法
• 2.1 材料种植及DNA 提取
• 2.2 wEST 的选择与下载
• 2.3 wEST 序列内含子的预测及引物设计
• 2.4 PCR 扩增
• 2.5 PCR 产物分离
• 2.5.1 AGE
• 2.5.2 PAGE
• 2.5.3 SSCP
• 2.6 特异带的回收、克隆测序及比对
• 2.6.1 回收
• 2.6.2 克隆与测序
• 2.6.3 特异序列的比对分析
• 3. 实验结果
• 3.1 2Ai-2 染色体特异的标记开发结果
• 3.1.1 2Ai-2 染色体特异标记
• 3.1.2 小麦染色体特异的标记
• 3.1.3 特异带的回收、克隆测序、与比对结果
• 3.2 2H 染色体特异EST-PCR 标记的开发结果
• 4. 讨论
• 4.1 中间偃麦草－小麦－大麦基因组差异性比较基因组学在本研究中的应用与证据
• 4.2 Intron-Flanking 思想在提高特异标记开发效率上的关键作用
• 4.3 原理与经验：如何提高PAGE 与SSCP 的分离效果
• 4.4 EST-PCR 标记开发的普遍意义
• 5. 全文结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者硕士期间成果
• 摘要
• Abstract