黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖和凋亡的影响

论文摘要

目的：通过体外培养人肝癌株SMMC-7721细胞,观察黄芩素（Baicalein, BAI）对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用和凋亡的影响,为黄芩素对肝癌细胞的作用靶点积累实验依据,并为肝癌治疗提供可能的新思路和新方法。方法：1.体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,常规收集对数生长期细胞,将密度为2.5×104/ml的细胞悬液接种于96孔板中,每孔细胞悬液量为200μ1,根据实验目的分为阴性对照组和药物处理组。待6h-12h细胞贴壁后向药物处理组中加入50μmol/L,100μmol/L,150μmol/L,200μmol/L的黄芩素溶液,在作用24h、48h后采用MTT比色法观察黄芩素对人肝癌株SMMC-7721细胞体外增殖能力的影响,并按公式：抑制率（IR）=[1-（实验组平均A570值-空白组A570）/（对照组平均A570值-空白组A570）]×100%,计算细胞生长抑制率。2.常规收集对数生长期细胞,将密度为3×106/ml的细胞悬液接种于6孔板中,每孔细胞悬液量为2ml,根据实验目的分为阴性对照组和药物处理组。等细胞贴壁后药物处理组加入50μmol/L,100μmol/L的黄芩素溶液,继续培养48h,用流式细胞Annexin V-FITC/PI法检测黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。3.常规收集对数生长期细胞,将密度为2×105/ml的细胞悬液接种至6孔板中,每孔细胞悬液量为2ml,根据实验目的分为阴性对照组和药物处理组。待细胞贴壁以后药物处理组加入50μmol/L,100μmol/L的黄芩素溶液,在48h后采用RT-PCR检测黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721 Survivin mRNA和突变型p53 mRNA表达的影响情况。4.所有实验数据均用SPSS19.0软件进行统计,以a=0.05作为检验水准,P<0.05视为具有统计学意义。结果：1.MTT比色法结果显示,与阴性对照组比较,药物处理组人肝癌细胞株SMMC-7721的体外增殖能力被明显抑制,并且随着黄芩素浓度的增加和时间的延长,抑制作用逐渐增强,呈现出时间-浓度依赖性（P<0.05）。2.流式细胞Annexin V-FITC/PI法结果显示同阴性对照组相比,药物处理组人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡指数明显增加,并且在作用时间相同的情况下,随着黄芩素浓度的增大,凋亡指数逐渐增加,呈现出浓度依赖性（P<0.05）;3.RT-PCR结果显示,实验组人肝癌细胞株SMMC-7721 Survivin mRNA和突变型p53mRNA的表达水平相对于阴性对照组均明显下调（P<0.05）。结论：1.MTT比色法结果显示黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖可能具有抑制作用。2.黄芩素可能促进人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡;3.根据RT-PCR结果,推测黄芩素可能通过下调人肝癌细胞株Survivin mRNA和突变型p53 mRNA的表达,进而抑制人肝癌细胞株SMMC-7721的体外增殖能力和促进人肝癌细胞株SMMC-7721凋亡,其可能是黄芩素抗肝癌的作用机制之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 英汉缩略词对照表
• 致谢
• 综述
• 参考文献