目的: 1.观察PGE2对胃癌MKN28细胞粘附、迁移及侵袭的影响。 2.检测PGE2对胃癌MKN28细胞VEGF表达的影响。 3.探讨EGFR和ERK2信号转导通路在PGE2影响胃癌MKN28细胞粘附、迁移、侵袭能力及VEGF表达过程中可能的作用。 方法: 1.细胞培养:取人胃腺癌细胞株MKN28按常规方法培养。 2.外源性PGE2处理后,使用MTT法检测肿瘤细胞粘附能力变化;Wound Healing实验及Transwell小室结合倒置镜观察肿瘤细胞迁移能力变化;Transwell小室结合Matrix胶检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。 3.Real-Time PCR实验结合RT-PCR凝胶成像系统检测PGE2对肿瘤细胞VEGF mRNA转录水平的影响。 4.Western blot实验检测PGE2对肿瘤细胞VEGF蛋白表达的影响及对EGFR和ERK2磷酸化水平的影响。 5.Western blot实验检测对照组、PGE2处理组及EGFR信号通路特异性抑制剂AG1478、ERK信号通路特异性抑制剂PD98059处理组VEGF蛋白表达水平的变化,同时检测EGFR、ERK2磷酸化水平的变化。 结果:
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