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DnaA蛋白不是大肠杆菌染色体复制起始的唯一调控因子

论文摘要

在大肠杆菌中,DNA分子是从环状染色体上唯一的复制原点oriC开始沿着两个方向复制,直到终点结束。整个复制过程是被严格调控的,因此在细胞的每个世代中染色体复制且只复制一次。将带有LacZ启动子的dnaA基因构建到pUC19中,得到重组质粒pUCA12。利用限制性内切酶SmaI和SacI对亚克隆载体pUCA12进行双酶切,将得到的Lac-dnaA片断插入到带有染色体oriC的微染色体pALO22中,得到重组微染色体pDnaA。利用IPTG对微染色体pALO22和pDnaA分别进行诱导,经过Western blotting和Southernblotting分析发现随着诱导时间的增加,DnaA蛋白的表达量在逐渐增加,微染色体pDnaA的拷贝数也逐渐增加,当pDnaA的拷贝数增加到微染色体pALO22拷贝数的4倍时,达到最大值。研究结果表明DnaA蛋白并不是调控oriC引发的DNA复制起始活动的唯一限制性因子。

论文目录

中文摘要

英文摘要

论文正文

引言

一、材料与方法

（一）材料

1.菌种和质粒

2.试剂

3.引物及探针

（二）方法

1.亚克隆载体pUCA12的构建

1.1 pLac-dnaA基因的PCR扩增

1.2 重组质粒的构建及筛选

1.3 重组质粒的检测

2.表达载体pDnaA的构建

2.1 重组微染色体的构建

2.2 重组微染色体的检测

2.3 重组微染色体的电击转化及筛选

3.Southern和Western检测

3.1 Southern检测

3.2 Western检测

二、结果与分析

1.亚克隆载体pUCA12的构建

2.表达载体pDnaA的构建

600生长曲线'>3.OD₆₀₀生长曲线

4.Southern杂交检测结果

5.Western杂交检测结果

三、讨论

参考文献

文献综述

参考文献

致谢

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本文来源: https://www.lw50.cn/article/d7ab9953ca4ab000a5b29ad5.html