抗菌肽PR-39在兔骨髓间充质干细胞中的分泌表达及抗菌活性检测

论文摘要

目的:通过构建包含脯氨酸精氨酸抗菌肽（proline-arginine rich 39-amino acid peptide,PR-39）的慢病毒载体,转染兔骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells, BMSC）,并检测其在BMSC中的表达及抗菌活性。方法:PCR扩增目的基因,连接入慢病毒载体质粒pGC-FU中,与包装质粒pHelper1.0、pHelper2.0在脂质体2000介导下转染293T细胞包装出慢病毒颗粒,Real-Time PCR检测滴度;分离培养BMSC,并用PR-39慢病毒载体转染BMSC,荧光显微镜观察和流式细胞仪检测转染效率,RT-PCR法检测目的基因的表达情况,同时检测PR-39抗菌活性。结果:成功得到滴度为2×109 TU/ml的PR-39慢病毒颗粒,并成功转染BMSC,转染72 h后观察到细胞呈现绿色荧光,流式细胞仪检测到其转染效率为74.09%,RT-PCR检测到BMSC中有PR-39基因表达,细胞培养上清液对金黄色葡萄球菌有抑制作用,与对照组相比有显著差异,抑菌率为98.43% （P<0.05）。结论:通过慢病毒介导的PR-39基因能在BMSC中成功表达分泌目的蛋白,同时具有较强抗菌活性。

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本文来源: https://www.lw50.cn/article/901d52931792b19a77c19c49.html