小菜蛾取食诱导的清江白菜mRNA差异表达的研究

论文摘要

植物遭受昆虫取食后能产生一系列特异性与非特异性的反应，其中诱导性防御研究正日益受到人们的重视，但蔬菜受到害虫取食为害后所诱导的分子反应机制在国内外尚未见报道。本研究利用DDRT-PCR技术分析清江白菜（Brassica campestris）被小菜蛾取食12h后表达谱的变化，得到57条cDNA差异片段；经过反向Northern点杂交，验证了9个片段为阳性；对部分阳性片段克隆、测序，发现其中6个片段为锚定引物单引物扩增的产物，另外1个片段为锚定引物和随机引物扩增产物。同源性比对分析表明该片段与大白菜（Brassica rapa ssp．pekinensis）的一个全长为124136 bp的克隆KBrH009823（GenBank AC189564.1）在114120～113846区具有99％（273／275）的同源性；另外该片段与拟兰芥copine相关蛋白（AT5G14420）基因的全长mRNA部分片段有68％（113／164）的同源性，根据已有的关于copine蛋白家族的研究推测，该基因也可能与细胞壁的损伤修复有关。

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ABSTRACT

1 前言

2 材料与方法

2.1 供试蔬菜

2.2 供试昆虫

2.3 供试菌种

2.4 主要仪器

2.5 分析软件

2.6 供试试剂

2.7 样品采集与前处理

2.8 总 RNA提取与检测（苯酚氯仿法改进）

2.9 RT-PCR

2.10 差异条带的检测（银染变性PAGE）

2.11 差异条带的回收与二次扩增

2.12 地高辛标记的反向Northern点杂交（差异片段的筛选）

2.13 二次扩增产物的回收

2.14 连接转化

2.15 蓝白斑筛选

2.16 菌液PCR鉴定

2.17 序列测定与序列分析

3 结果与分析

3.1 总 RNA的提取结果与分析

3.2 差异显示结果

3.3 差异片段回收与二次扩增

3.4 反向Northern点杂交验证结果

3.5 菌液PCR鉴定

3.6 测序结果与分析

4 讨论

4.1 昆虫取食诱导的植物防御反应

4.2 样品的选择和处理

4.3 总RNA提取

4.4 差异片段的获得

4.5 差异片段的回收与二次扩增

4.6 cDNA差异片段的检测

4.7 测序结果

5 总结与展望

附录一缩写词表

附录二银染差异显示原图

参考文献

致谢

小菜蛾取食诱导的清江白菜mRNA差异表达的研究

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