黑龙江省卫生厅科研课题课题编号2013410
摘要:目的:探讨眼表应用芦荟多糖对SD大鼠角膜新生血管(CNV)的作用。方法:建立大鼠CNV模型，分为3组：高浓度芦荟多糖组局部点眼；低浓度芦荟多糖组局部点眼；对照组给予生理盐水。使用NIH图像分析软件分析角膜荧光染色图片观察各组CNV的面积。结果:第7天时，对照组CNV血管粗大、密集，交织成网状；低浓度组CNV较短，血管稀疏、细长；高浓度组CNV较短，血管较稀疏、细小。3个组CNV面积比较差异均有统计学意义(P<0．01)。结论芦荟多糖能抑制角膜CNV，且随浓度增加作用加强。
关键词：角膜新生血管芦荟多糖
角膜新生血管(cornealneovascularization，CNV)的形成与眼前段的一系列炎症，如感染、变性、外伤、角膜移植反应和长期配戴角膜接触镜等有关，虽然新生血管对感染清除、伤口愈合、抑制角膜溶解等有一定作用，但CNV可破坏角膜正常微环境，使眼前节相关免疫赦免偏离消失，是角膜移植排斥反应的高危因素，而且大量新生血管可使角膜失去透明性导致失明。对其发病机制和防治措施的研究一直是眼科界的难点和热点.目前，随着新生血管形成机制研究的深入发展、新生血管抑制剂的研发，诸多学者发现，部分中药或其有效成分能够抑制新生血管的生成，从而达到抗新生血管作用[1]。芦荟多糖(aloeDolysaccharide，AP)是芦荟凝胶中除去水分的主要提取物之一，以甘露聚糖为主,有关AP抗血管生成作用的研究却鲜有报道。
1材料与方法
1.1实验材料AP采自海南中华芦荟（Aloeveral.var.Chinensis），紫外线（UV）测其纯度为99.6%，相对分子质量为14×103。加生理盐水溶解，灭菌后备用。倒置荧光生物显微镜（美国AMG公司）、大鼠抗小鼠CD31抗体（美国BD公司）、488-山羊抗大鼠抗体（美国Invitrogen公司）、4%多聚甲醛（北京索莱宝公司）、抗荧光淬灭封片液（北京碧云天公司）
1.2实验方法
1.2.1AP液配制精确称取定量AP，加生理盐水溶解，配制浓度分别为17.93mg/100g、71.74mg/100g的AP液，灭菌备用。
1.2.2角膜缝线模型：
实验采用标准三针缝线法诱导小鼠出现角膜炎症性新生血管化，具体如下：在小鼠角膜中央用直径为2mm环钻进行标记，选择内部入针点为角膜缘与角膜中心之间的中点，外部出针点为近角膜缘处。11-0尼龙缝线在角膜基质下潜行，间断缝合3针，每针之间间隔为120度，缝线在角膜中留置7天。
1.2.3AP抑制生长实验角膜新生血管免疫荧光分析：
在角膜缝线模型术后第7天时，处死小鼠并摘除眼球，经PBS冲洗后，在4%的多聚甲醛试剂中固定，时间为30分钟。沿小鼠角膜缘剪下角膜，刮除虹膜，并在甲醇试剂中固定，时间为20分钟。经PBS冲洗后，在大鼠抗小鼠的CD31抗体（1：100）混合的PBS溶液中，4°C下孵育过夜。第2天，将角膜片取出后，PBS冲洗3次，每次5分钟。在488-山羊抗大鼠的荧光二抗（1：200）混合的PBS溶液中，4°C下孵育过夜。第3天，取出的角膜片经PBS充分冲洗后，将角膜整片置于载玻片上铺平，滴抗荧光淬灭液后，盖玻片封片，立即置于荧光生物显微镜下照相，分析观察角膜新生血管CNV观察在手术显微镜下动态观察CNV生长情况，CNV进行拍照，根据公式计算CNV面积：S=C／12×3．1416×[r一(r—z)]，S为CNV生长面积，C为血管网的跨圆周钟点数，r为角膜半径，f为CNV长度。
1.3统计学处理采用SPSS16.0分析数据，计量资料采用x±s表示，，采用SNK-q检验分析每两组数据之间的差异，以P<0．05为差异有统计学意义。
2结果
7天后，对照组CNV血管粗大、密集，交织成网状；低浓度组CNV较短，血管稀疏、细长；高浓度组CNV较短，血管较稀疏、细小。3个组CNV面积比较差异均有统计学意义造模后实验组大鼠的CNV面积均小于对照组，差异均有显著统计学意义(均为P<0．01)；低浓度组的CNV面积明显大于高浓度组,差异有显著统计学意义(均为P<0．01)（见表1)。
3讨论：芦荟是一种集观赏、美容、食用、医药于一体的经济植物，其中中华芦荟、库拉索芦荟（AloebarbadensisMiller）和开普芦荟（AloeferoxMiller）为三大药用芦荟。芦荟含有70多种有效成分，现代药理学研究发现，AP作为芦荟的主要有效成分之一[2]，具有抗感染、抗菌、抗溃疡、抗肿瘤、免疫调节、抗内毒素、抗辐射及抗艾滋病病毒等作用然而内皮细胞的增殖是血管生成的起始环节[3]抑制血管生成是治疗角膜新生血管的有效途径之一，因此对血管内皮细胞增生的影响是新生血管研究的重要内容。AP主要通过抑制血管内皮的增殖和迁移抑制血管生成，从而抑制角膜新生血管的形成。
本次研究观察了AP对角膜新生血管生长的抑制作用，明确了不同浓度的AP都具有抑制血管生成的作用，且随浓度增大而加强，为临床上治疗CNV提供了新的参考途径。
[1]翁闪凡，庄锡伟，邝婉容，等.正交设计法优选元江芦荟多糖提取工艺的研究[J].现代医药卫生，2009，25（11）：1675-1676.
[2]李文，彭芝兰.肿瘤血管生成抑制物的研究[J].四川肿瘤杂志，2005（1）：54-56.
[3]张瑞，舒向华，于雪梅，等.催产素联合卡前列素预防产后大出血临床分析[J].现代医药卫生，2012，28（9）：1343-1344.