子宫内膜异位症比较蛋白质组学研究及相关蛋白的鉴定与表达

论文摘要

研究背景子宫内膜异位症（内异症）是生育年龄妇女的多发病、常见病,发病率呈明显上升趋势,可达15%～20%,占普通妇科手术的30%以上。内异症所引起的痛经、下腹痛和性交痛等,严重地影响妇女的健康和生活质量,也是不育症的主要病因之一。内异症病变广泛、形态多样,极具侵袭和复发性,对脏器结构和功能的破坏与恶性肿瘤相当。但其发病机制目前尚不清楚,亦缺乏有效的临床诊断和治疗方法,缺乏特异性的生物标志物。蛋白质组学研究技术作为生命科学里的前沿技术,具有敏感、准确、高通量、快速的优点,为内异症的研究提供了强有力的工具。利用蛋白质组学技术筛选内异症患者在位内膜和血清中差异表达的蛋白质,不仅有助于了解子宫内膜异位症的发病机制,发现可以反映细胞的病理改变、与疾病发生发展有关的分子标志物,同时也为异位症的诊断和导向治疗打下基础。研究目的验证前期实验鉴定的内异症在位内膜中差异表达的蛋白质;建立内异症血清差异蛋白质表达谱,并对相关的差异蛋白进行验证;建立内异症血清蛋白质指纹诊断及与卵巢癌的鉴别诊断模型,筛选差异蛋白质峰;以期探讨内异症的发病机制,寻找可以用于内异症诊断的血清学标志物。研究方法1、应用Real-Time PCR、Western Blot和免疫组化比较内异症患者与非内异症妇女在位内膜中stathmin和Annexin-1的表达。2、应用双向电泳结合MALDI-TOF-MS与生物信息学技术筛选内异症患者血清中差异表达的蛋白质,Western Blot和免疫组化对差异蛋白进行验证。3、应用SELDI-TOF-MS技术建立内异症血清差异蛋白质指纹图谱,建立内异症诊断及其与卵巢癌、卵巢良性肿瘤的鉴别诊断模型。结果1、stathmin和Annexin-1在内异症患者的在位内膜中均有高表达2、成功建立内异症血清差异蛋白质谱,鉴定出12个差异蛋白质,与细胞骨架、细胞活动及能量代谢有关。3、Western Blot和免疫组化对血清差异蛋白CKl进行验证,结果显示内异症患者血清中CKl表达升高。4、成功建立内异症血清差异蛋白质指纹图谱,筛选出26个差异蛋白质峰。5、以M/Z为5632 Da、8135 Da两个蛋白质建立的诊断模型对内异症的诊断有较高的敏感性和特异性;血清中M/Z为5632 Da的蛋白对内异症与卵巢癌的鉴别诊断有较高的敏感性和特异性。结论1、stathmin和Annexin-1都是有重要功能的调控蛋白。本研究证明两者在内异症患者的在位内膜中均有高表达,提示其可能参与内异症的发生,再次表明在位内膜在内异症发生过程中的重要作用。2、应用双向电泳结合质谱技术,发现内异症与非内异症妇女血清中存在差异蛋白,其中与细胞骨架、细胞活动及能量代谢有关的12个蛋白质在内异症患者表达异常。这些蛋白可能参与内异症的发生,并藉此可成为内异症诊断及监测的血清学标志物。3、细胞角蛋白（CKs）是一组细胞骨架蛋白,本研究发现CKl在内异症患者血清中有高表达,亦可称为内异症之候选标志物。4、本研究应用SELDI-TOF-MS技术比较正常妇女、内异症及卵巢良、恶性肿瘤患者血清中差异表达的蛋白质峰,建立诊断模型,在内异症的诊断及与卵巢癌的鉴别诊断有较高的敏感性和特异性,这不仅有利于对内异症发生机制的认识,也可提供重要的临床参考指标。

论文目录

• 缩写词
• 中文摘要
• 英文摘要
• 第一部分 stathmin在子宫内膜异位症患者在位内膜中的表达
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 Annexin-1在子宫内膜异位症患者中的表达
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第三部分 子宫内膜异位症血清比较蛋白质组学研究
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第四部分 细胞角蛋白-1在子宫内膜异位症的表达与意义
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第五部分 血清蛋白指纹诊断模型在子宫内膜异位症诊断与鉴别诊断中的价值
• 前言
• 材料与方法
• 实验结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 文献综述