论文摘要
1、背景糖尿病已经逐渐成为现今社会所面临的最严重的公共健康问题之一,传统的治疗方法在大部分情况下无法很有效的根治糖尿病。近年来,随着减肥外科的不断发展,越来越多的证据表明,胃肠外科手术不仅能减重,同时可以改善甚至治愈2型糖尿病,且这些手术绝大多数都可以在腹腔镜的条件下完成。然而,胃肠外科手术治疗糖尿病的确切机制仍然不十分清楚。蛋白质组学研究方法和技术的飞速发展为寻找胃肠外科手术治疗糖尿病的机制,并发现药物治疗的新靶点提供了有利条件。2、目的①建立稳定性及重复性好的人血清蛋白质组双向凝胶电泳图谱。②应用蛋白质组学双向凝胶电泳（2-DE）和质谱技术（MS）筛选并鉴定2型糖尿病患者术前、术后一周及术后一月的血清总蛋白,对手术前后明显差异表达的蛋白点,行质谱鉴定及生物信息学分析。③对筛选出的两种差异蛋白（Rho GDP-dissociation inhibitor 1和Prohibitin）利用免疫印迹进行验证,为寻找手术治疗糖尿病的机制以及可能与糖尿病的发生发展相关的蛋白质提供新的线索。3、方法①分别收集3例志愿者的空腹血清,采用不同的方法进行蛋白样品制备,并在不同的条件下进行双向电泳,寻找能够获得稳定性和重复性好的人血清蛋白质组双向凝胶电泳图谱的最佳方案。②分别收集12例2型糖尿病患者的术前、术后1周及术后1月的血清,对各组血清样本进行蛋白样品制备,并分别进行双向凝胶电泳后,利用双向凝胶电泳软件分析,将术后1周及术后1月相比于术前均表现为明显升高或明显下降的蛋白点行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）分析获得肽质量指纹图（PMFs）,然后利用Mascot查询软件搜寻SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。③另外收集9例2型糖尿病患者的术前、术后1周及术后1月的血清。采用蛋白免疫印迹的方法对筛选出的候选蛋白Rho GDP-dissociation inhibitor 1和Prohibitin进行初步验证。4、结果①建立了稳定、重复性好的人血清蛋白质组双向凝胶电泳图谱。②图谱比较得到术后1周及术后1月相对于术前血清标本均显示出明显相同变化的蛋白点20个,经质谱分析鉴定出8个点。其中在术后血清中表达都升高的有5个,它们是Rho GDP-dissociation inhibitor 1、Prohibitin、Alpha-1-antitrypsin precursor、Serotransferrin precursor和Fibrinogen gamma chain precursor。在术后血清中表达都降低的有3个,分别是MAP3K12-binding inhibitory protein 1、Coronin-1A和Isovaleryl-CoA dehydrogenase。③免疫印迹检测结果显示出23kDa的Rho GDP-dissociation inhibitor 1条带和30kDa的Prohibitin条带。与术前组相比较,在术后血清中这两种蛋白明显高表达。5、结论①双向凝胶电泳结合质谱鉴定是外科手术治疗糖尿病血清蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具。②所鉴定出的蛋白质尤其是Rho GDP-dissociation inhibitor 1和Prohibitin等可能与手术治疗糖尿病的机制相关,也可能为寻找糖尿病的发生发展的机理提供新的线索,值得进一步研究。