论文摘要
甲氨蝶呤（MTX）是治疗绒癌的首选药物之一,但MTX获得性耐药严重。其中细胞凋亡受抑制是肿瘤细胞产生耐药性的重要机制之一。凋亡抑制蛋白（IAPs）是一类高度保守的抗凋亡基因表达产物,对凋亡调控发挥着重要作用。Survivin是最近发现的IAP家族新成员,其对细胞凋亡抑制作用及在肿瘤组织表达特异性,提示其与肿瘤发生有密切关系。Survivin在多种肿瘤中均可被检测到,且可能是导致肿瘤细胞耐药的因素之一。本研究前期实验已证实绒癌耐药细胞株JAR/MTX survivin呈现高表达。本文拟通过合成靶向survivin反义寡核苷酸（ASODN）封闭其表达,以探讨ASODN对绒癌耐药细胞JAR/MTX的生物学作用。本实验通过HE染色观察细胞形态变化,MTT法检测ASODN对绒癌耐药细胞株JAR/MTX的抑制率,免疫组织细胞化学法及RT-PCR法检测绒癌耐药细胞JAR/MTX survivin基因的蛋白及mRNA的表达,应用流式细胞仪Annexin-FITC/PI双染法检测ASODN对JAR/MTX细胞的凋亡率。结果发现:1、JAR/MTX细胞中存在丰富的survivin基因表达;2、survivin ASODN抑制绒癌耐药细胞JAR/MTX增殖,并存在一定的剂量依赖性;3、survivin ASODN可诱导JAR/MTX细胞凋亡;4、survivin ASODN通过特异性阻断survivin基因功能,在一定程度上纠正因survivin过度活化导致的凋亡紊乱,从而使凋亡水平上调;5、survivin基因的表达与绒癌耐药性的产生有关。本研究结果显示survivin反义寡核苷酸可直接抑制survivin的转录和翻译,不仅可以直接发挥其抗肿瘤的凋亡作用,而且可以抑制绒癌耐药细胞JAR/MTX增殖。该项反义寡核苷酸技术有望成为基因治疗逆转绒癌耐药的新途径。