论文摘要
目的:随着神经-内分泌-免疫相互作用研究的不断深入,目前已知在淋巴细胞上具有α-和β-肾上腺素受体,并且它们都参与调节免疫细胞功能。然而,尽管已有文献报道淋巴细胞上也存在多巴胺（dopamine, DA）受体,但关于T淋巴细胞上存在哪种亚型DA受体,以及这些受体在介导T细胞功能调节中的作用尚不十分清楚。因此,本研究旨在一方面提供T淋巴细胞表达DA两类亚型受体――D1-like受体（包括D1和D5受体）和D2-like受体（包括D2、D3、D4受体）的证据,另一方面探讨D1-like受体和D2-like受体在介导T细胞功能调节中的作用及其信号转导分子,从而为神经-内分泌-免疫调节网络增加新内容。方法:取小鼠肠系膜淋巴结细胞,用尼龙毛柱粘附法分离和纯化T淋巴细胞,应用流式细胞术检测T细胞的纯度。用逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）法检测T淋巴细胞的各种亚型DA受体mRNA表达。淋巴细胞用各种浓度的D1-like受体激动剂、拮抗剂或D2-like受体激动剂、拮抗剂孵育48 h,然后应用噻唑兰（methyl-thiazole-tetrazolium, MTT）比色法检测淋巴细胞对有丝分裂原――刀豆蛋白A（concanavalin A, Con A）诱导的增殖反应;应用流式蛋白分析系统测定经Con A刺激的淋巴细胞培养物的上清液中细胞因子干扰素-γ（interferon-γ,IFN-γ）、肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor,TNF）和白介素-4（interleukin-4,IL-4）的浓度;应用125I-环一磷酸腺苷（125I-cAMP）放射免疫法检测淋巴细胞内环一磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）的含量。结果:肠系膜淋巴结细胞经分离和纯化后,获得的CD3+淋巴细胞（即T淋巴细胞）在肠系膜淋巴结细胞中的百分比为93.8±0.53%,明显高于未经分离和纯化的肠系膜淋巴结细胞中的T细胞百分比74.1±0.95%,说明用上述方法已获得纯化的T淋巴细胞。T淋巴细胞可表达所有DA亚型受体mRNA,包括D1-like受体的D1和D5受体,及D2-like受体的D2、D3、D4受体。淋巴细胞分别用5个浓度的D1-like受体激动剂SKF38393（10-9～10-5 M）处理后,细胞对Con A诱导的增殖反应均没有发生明显的改变。用Con A刺激的淋巴细胞经SKF38393（10-8 M）处理后,IFN-γ的产生显著低于未经SKF38393处理的淋巴细胞,但TNF和IL-4的产生没有明显改变。D1-like受体拮抗剂SCH23390（10-7 M）能阻断激动剂SKF38393（10-8 M）对淋巴细胞产生IFN-γ的抑制作用。D1-like受体激动剂、拮抗剂或激动剂与拮抗剂一起处理淋巴细胞,均没有明显影响淋巴细胞内cAMP的含量。上述结果说明,D1-like受体在介导T细胞功能调节中不起主导作用。然而,淋巴细胞分别用5个浓度的D2-like受体激动剂quinpirole（10-9～10-5 M）处理后,细胞对Con A诱导的增殖反应均明显减弱。用不同浓度的D2-like受体拮抗剂haloperidol（10-10～10-7 M）与激动剂quinpirole（10-8 M或10-7 M）一起处理淋巴细胞,haloperidol呈现浓度依赖性地阻断quinpirole对T细胞增殖的抑制作用。quinpirole（10-8 M）可抑制Con A刺激的T细胞生成IFN-γ和TNF,但促进T细胞生成IL-4。haloperidol（10-7 M）能阻断quinpirole抑制T细胞生成IFN-γ和TNF的作用,及阻断quinpirole促进T细胞生成IL-4的作用。上述结果充分说明D2-like受体介导调节T细胞的功能。此外,quinpirole（10-8 M和10-7 M）可导致Con A激活的T细胞内cAMP含量明显减少,haloperidol（10-8 M和10-7 M）则可阻断quinpirole减少淋巴细胞内cAMP的作用,提示cAMP参与D2-like受体介导的T淋巴细胞功能调节。结论:T淋巴细胞能表达各种DA亚型受体――D1、D5受体（即D1-like受体）及D2、D3、D4受体（即D2-like受体）。在D1-like和D2-like两型DA受体中,D2-like受体是介导T淋巴细胞功能调节的主要受体,它的激活能抑制T淋巴细胞的增殖、减少细胞因子IFN-γ和TNF的生成及增加IL-4的生成,D2-like受体的这些作用经淋巴细胞内第二信使cAMP介导。