论文摘要
研究背景和目的:糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）是糖尿病患者最常见、最严重的全身性微血管并发症之一,也是糖尿病致死、致残的主要原因。在西方国家,DN已成为终末期肾病（end stage renal disease,ESRD）最主要的病因。由此带来的透析、肾移植等治疗费用在整个医疗支出中所占比例正在逐年提高,给病人和社会造成极大的经济负担。DN的病因和发病机制非常复杂,至今尚未完全阐明。目前多认为是遗传因素、血流动力学异常、糖代谢紊乱、细胞因子等因素共同作用的结果。DN的早期病理特征是肾小球肥大、基底膜增厚和系膜扩张,晚期则表现为肾小球硬化和间质纤维化。细胞外基质（extracelluar matrix,ECM）进行性积聚是其共同的病理基础。ECM在肾脏的过度蓄积是由于其合成与降解失调所致,细胞因子在其中起关键作用。转化生长因子-β（transforming growth factor,TGF-β）被认为是肾小球硬化和肾小管间质纤维化发病机制中最关键的细胞因子,在DN相关的生长因子网络中处于中心地位。但TGF-β1除了促纤维化效应外,还具有抗增生、抗炎症等作用,完全阻断其功能势必产生不良后果。因此,新近发现的结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）,作为TGF-β1促纤维化效应的下游效应因子,成为防治肾脏纤维化领域新的研究热点。TGF-β1、CTGF过度表达,及其与之相关的ECM合成增加和降解减少,可能在DN的发病机制及其进行性肾损害的过程中发挥着重要作用。近年来大量研究证实,DN的治疗除严格控制血糖、血压、血脂之外,血管紧张素转化酶抑制剂（ACEI）和血管紧张素受体拮抗剂（ARBs）的应用具有重要价值,可有效防止糖尿病肾病的发生并延缓其进展。经实验及临床观察证实其对肾小球硬化有一定疗效,但是对肾间质纤维化的治疗效果较差。细胞水平药效研究和靶点筛选研究发现,ND702可以抑制CTGF的表达,对肾小管上皮细胞的凋亡有保护作用。整体动物建模筛选研究发现,ND702可以明显降低DN大鼠血肌酐和尿素氮水平。本论文通过建立糖尿病肾病的体内体外模型研究了ND702对糖尿病肾病的治疗作用,并初步探讨了其可能的作用机制。方法:体内实验应用链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）诱导单侧肾切除大鼠建立糖尿病肾病模型,取血清和尿分别检测大鼠24h尿量、24h尿蛋白总量（Upro）、尿肌酐（Ucr）、血糖（BG）、甘油三脂（TG）、血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、内生肌酐清除率（Ccr）;取大鼠肾脏,观察肾脏大小,计算肾重、相对肾重,并通过HE、Masson染色法观察大鼠肾脏组织病理变化。从DN发生发展过程中大鼠。肾脏结构与功能变化为切入点全面研究了ND702对DN的治疗作用。体外实验应用高糖刺激HK-2模型,检测细胞α-SMA、FN、TGF-β1、CTGF的表达。以DN发生发展的主要介导细胞因子为切入点,以DN的主要病理基础ECM沉积为关键环节,研究了导致DN的细胞因子系统主要成员TGF-β1、CTGF和ECM系统主要成分纤连蛋白（fibornectin,FN）,在DN大鼠肾脏中的表达变化及相互关系,以阐明细胞因子在DN发病机制中的作用并且初步探讨ND702在治疗DN的作用机制。结果:体内研究显示,本模型的成模率为76.92%（100/130）。在治疗期间的8周里,模型组大鼠血糖均维持在16.7mmol.L-1以上,表现出多饮、多食、多尿、消瘦的DM症状;与正常大鼠比较,TG、Scr、BUN、Ccr、24 h Upro等指标均升高,具有极显著性意义（p＜0.01）;肾脏重量及相对肾重增加,具有极显著性意义（p＜0.01）,且出现了相当于Mogensen分期的3期左右DN病理损害。肾小球肿胀、肾小管出现细胞肥大、空泡变性、细胞融合、可见部分间质纤维化。灌胃给予ND702可以改善大鼠的基本状况,改善肾功能,降低上述指标水平,减轻肾脏组织病理损害,与模型组比较,差异显著（p＜0.05或p＜0.01）;但是不影响血糖水平。体外研究显示,高糖刺激可以导致HK-2细胞的死亡,而且可以诱导HK-2细胞分化成肌成纤维样细胞,表达α-SMA、FN、TGF-β1、CTGF,与正常组比较差异显著（p＜0.05或p＜0.01）。不同终浓度的ND702可以减少FN、TGF-β1、CTGF的表达。结论:ND702对大鼠糖尿病肾病具有确切的治疗作用,其作用机制可能与减少FN、TGF-β1、CTGF的分泌表达有关。