增龄相关听力损失小鼠耳蜗和蜗神经核MeCP2、BDNF、Atoh1基因表达的初步研究

论文摘要

目的:本研究在对不同月龄BALB/c小鼠听功能和耳蜗形态学研究的基础上,通过检测不同月龄小鼠耳蜗和蜗神经核中MeCP2、BDNF和Atoh1基因的表达特点,初步探讨其在年龄相关性听力损失中的作用,为进一步确定听觉老化的相关基因,探讨老年性耳聋发病的分子机制打下基础。方法:①通过听性脑干反应（ABR）测试、耳蜗毛细胞铺片/计数及扫描电镜等方法,对3、6、12和18月龄组小鼠8 kHz听反应阈及耳蜗毛细胞缺失和Corti器形态学变化进行对比研究。②应用免疫组化技术,检测不同月龄组小鼠耳蜗和蜗神经核组织中MeCP2蛋白的表达与分布情况。③应用Western blot技术,检测各月龄组小鼠耳蜗和蜗神经核中MeCP2的蛋白表达水平。④应用荧光定量逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）,对各月龄组小鼠耳蜗和蜗神经核中MeCP2、BDNF和Atoh1基因的mRNA表达水平进行检测。结果:①ABR检测显示3、6和12月龄组小鼠8 kHz听反应阂分别为（25±5.1）、（52±6.7）、（93±7.5）dB SPL,18月龄组120 dBSPL刺激声基本测不出听觉反应。耳蜗铺片毛细胞计数自6月龄组外毛细胞出现显著缺失,随月龄增加而加重,由底回逐渐向项回发展,至12月龄时耳蜗底回和中回外毛细胞几乎完全丧失,内毛细胞显著缺失。扫描电镜显示6月龄组小鼠耳蜗毛细胞静纤毛可见不同程度的缺失、转位、散乱、倒伏、融合、变短现象,随月龄增加而逐渐加重。②免疫组化染色:MeCP2蛋白在BALB/c小鼠耳蜗和蜗神经核中均有表达,主要为细胞核着色,随月龄增长,小鼠耳蜗和蜗神经核染色阳性程度变弱。③Western blot检测:四个不同月龄组小鼠耳蜗和蜗神经核组织中MeCP2蛋白表达浓度随年龄增长而减弱。④RT-PCR分析:MeCP2、BDNF和Atoh1基因的mRNA表达水平均随月龄增长逐渐下降。6、12、18月龄组mRNA及蛋白的表达的光密度比值明显低于3月龄组,各组间比较有统计学显著差异（P＜0.01）。PCR产物测序及BLAST比较分析证实RT-PCR产物与目的基因mRNA序列完全一致。结论:①BALB/c小鼠听力损失、耳蜗毛细胞缺失和纤毛损害随年龄增长而逐渐加重。②MeCP2在小鼠耳蜗和蜗神经核组织中均有表达,主要表现为核表达,其表达水平呈增龄相关性减弱。③小鼠耳蜗和蜗神经核中MeCP2、BDNF、Atoh1基因mRNA表达水平随月龄增长而逐渐降低,三种基因的表达水平呈显著一致性。④MeCP2及其相关基因BDNF和Atoh1表现出增龄相关性表达减弱,它们可能在老年性耳聋的发病机制中起重要作用。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩略词
• 第一部分 不同月龄BALB/c小鼠听功能及耳蜗形态学研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 增龄相关听力损失小鼠耳蜗和蜗神经核中MeCP2、BDNF、Atoh1基因表达及其意义
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述一 MeCP2研究进展
• 综述二 老年性耳聋研究近况
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果