论文题目: 结缔组织生长因子在糖基化终产物诱导人肾系膜细胞纤维结合蛋白表达中的作用
论文类型: 硕士论文
论文专业: 内科学
作者: 金虹
导师: 刘乃丰
关键词: 糖基化终产物,人肾系膜细胞,结缔组织生长因子,纤维结合蛋白,氨基胍,重组人蛋白,抗人抗体
文献来源: 东南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 研究目的1.观察糖基化终产物(AGEs)对体外培养人肾系膜细胞的增殖、活性氧生成的变化以及结缔组织生长因子(CTGF)和纤维结合蛋白(FN)表达的影响,探讨AGEs在糖尿病肾病发生、发展中的机制以及氨基胍对糖尿病肾病的防治作用。2.探讨重组人CTGF蛋白(rhCTGF)对人肾系膜细胞CTGF、FN表达的影响以及抗人CTGF中和抗体(anti-CTGF IgG)在AGEs诱导的人肾系膜细胞FN表达中的作用,揭示AGEs在以细胞外基质增生和纤维化为特征的糖尿病并发症中的潜在作用机制。研究方法采用体外人肾系膜细胞珠培养方法,用葡萄糖和牛血清白蛋白模拟人体环境合成糖基化终产物(AGE-BSA),然后分别用不同浓度的AGE-BSA、重组人CTGF蛋白、抗CTGF中和抗体以及氨基胍干预系膜细胞的条件下培养至各自设定的时间。四唑盐比色试验(MTT)法测定细胞的生长情况,借助分光光度法检测系膜细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量;半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定细胞CTGF和FN的mRNA水平;免疫细胞化学方法测定细胞的CTGF、FN蛋白含量以及用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞上清液中FN的蛋白水平。结果1、一定条件下,AGEs呈浓度和时间依赖方式促进系膜细胞的增殖,干预时间延长反而抑制其生长(P<0.05);2、细胞培养上清液MDA含量、SOD与CAT活性随着AGEs干预时间的延长而升高,AGEs可促进系膜细胞MDA的生成,同时降低SOD与CAT的活性,(P<0.05);3、一定条件下,AGEs呈浓度和时间依赖方式增强系膜细胞CTGF mRNA和FN mRNA的表达(P<0.05),氨基胍可通过抑制AGEs的生成从而使制得的AGEs对系膜细胞CTGF mRNA和FN mRNA表达水平的影响部分地降低(P<0.05);4、重组人CTGF蛋白在一定条件下能增强系膜细胞CTGF mRNA和FN mRNA的表达(P<0.05);5、一定条件下,抗人CTGF中和抗体可显著抑制AGEs诱导的FN的表达,但不能完全阻断这一效应(P<0.05)。结论1、AGEs可引起系膜细胞的增殖;促进系膜细胞活性氧的生成,并降低抗氧化酶活性,加重系膜细胞的氧化负荷;2、AGEs可上调系膜细胞CTGF和FN的表达,并且,AGEs诱导系膜细胞FN的表达一定程度上是由AGEs诱导的CTGF所介导,这可能是AGEs致以细胞外基质增生和纤维化为特征的糖尿病肾病的一个重要机制。氨基胍通过抑制AGEs的生成从而降低其生物学效应,对糖尿病肾病起一定的防治作用。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
文献综述
第一部分 糖基化终产物对人肾系膜细胞结缔组织生长因子和纤维结合蛋白表达的影响
材料与方法
结果
讨论
第二部分 结缔组织生长因子在糖基化终产物诱导的人肾系膜细胞纤维结合蛋白表达中的作用
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
实验的不足和下一步计划
致谢
作者简介
发布时间: 2007-06-11
参考文献
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