MMP-26的克隆、表达及其对乳腺癌生物学行为的影响

论文摘要

MMP-26是2001年才被克隆成功的MMPs家族新成员,在此基础上,我们首次在真核细胞中成功克隆、表达了MMP-26全长基因,为进一步研究MMP-26在恶性肿瘤中的生物学功能提供了有力的研究工具和模型。进一步通过体外体内实验,又首次证实了MMP-26的高表达可促进肿瘤细胞的恶性增殖,改变肿瘤细胞的恶性表型;MMP-26通过对基底膜的降解,促进肿瘤细胞的早期侵袭和局部浸润;在形态学上我们又首次证实MMP-26能有效诱导肿瘤间质血管新生。根据本研究结果,我们认为检测MMP-26蛋白在乳腺癌组织中的表达可以作为肿瘤恶性程度、侵袭能力的一个重要检测指标,对MMP-26蛋白表达量的检测又可以成为肿瘤恶性转化的监测指标之一,并进而判断肿瘤患者的预后。

论文目录

• 第一篇 文献综述
• 一、关于ECM
• ECM 的成分
• ECM 的功能
• 二、关于MMPs
• MMPs 的分类
• MMPs 的结构
• MMPs 的活化
• MMPs 的调控
• MMPs 的功能
• 三、关于MMP-26
• 独特的结构和活化机制
• 底物特异性
• 广泛的表达和复杂的功能推测
• MMP-26的调控
• 第二篇 前言
• 第三篇 材料与方法
• 一、材料
• （一） 主要试剂
• （二） 主要仪器
• （三） 细胞株
• （四） 实验动物
• （五） 人乳腺组织标本
• 二、方法
• （一） MMP-26 基因的转染与鉴定
• 1 转染
• 2 RT-PCR
• 3 细胞免疫荧光检测
• 4 流式细胞术
• 5 明胶酶谱分析
• （二） MMP-26 对细胞生物学性状的影响
• 1 透射电子显微镜观察细胞形态
• 2 生长曲线测定
• 3 细胞周期检测
• （三） 体外检测 MMP-26 对肿瘤细胞生物学行为的影响
• 1 肿瘤细胞在 ECM 上粘附的测定
• 2 肿瘤细胞迁移能力的检测（细胞划痕法）
• 3 Boyden 小室迁移侵袭实验
• （四） 体内实验检测 MMP-26 对肿瘤细胞生长的影响
• 1 人乳腺癌裸鼠异种移植模型
• 2 Balb/c 小鼠肾被膜下移植侵袭模型
• 3 裸鼠尾静脉注射人工转移模型
• 4 体内肿瘤细胞诱导血管生成模型
• （五） 免疫组织化学染色检测 MMP-26 在人乳腺良恶性肿瘤中的表达及其与ER关系的研究
• 1 免疫组织化学染色步骤
• 2 结果判定
• 3 结果评分标准
• （六） 统计学处理
• 第四篇 结果
• 一、MMP-26 全长基因在MCF-7 细胞株中的稳定转染、表达及阳性克隆的筛选与鉴定
• 转染细胞株的选择
• MMP-26 基因的转染
• RT-PCR
• 细胞免疫荧光检测
• 流式细胞术
• 明胶酶谱分析
• 二、MMP-26 的蛋白表达对MCF-7 细胞生物学性状的影响
• 转染细胞的形态改变
• 转染细胞的超微结构改变
• 生长曲线测定
• 流式细胞术检测细胞增殖周期
• 三、体外实验检测 MMP-26 对肿瘤细胞生物学行为的影响
• 肿瘤细胞的粘附与铺展
• 肿瘤细胞迁移划痕实验
• Boyden 小室法检测肿瘤细胞在 Matrigel 中的迁移和侵袭能力
• 四、体内实验检测 MMP-26 对乳腺癌生物学行为的影响
• 人乳腺癌裸小鼠异种移植模型
• 小鼠肾包膜下移植侵袭模型
• 人工转移模型
• 体内肿瘤细胞诱导血管生成模型
• 五、MMP-26 在人乳腺良、恶性组织中的表达及其与部分临床指标的关系
• MMP-26 蛋白在多种乳腺组织中的表达
• MMP-26 蛋白的表达与部分临床特征之间的关系
• MMP-26 蛋白表达与ER 表达的相关性分析
• 第五篇 讨论
• 一、MMP-26 在真核细胞中的克隆表达及意义
• 二、MMP-26 对乳腺癌细胞生物学性状及肿瘤生物学行为的影响
• 1. MMP-26 促进肿瘤细胞增殖,增加其恶性表型
• 2. MMP-26 促进肿瘤细胞粘附并穿透基底膜,在乳腺癌细胞早期侵袭和局部浸润中发挥重要作用
• 3. MMP-26 能够有效诱导肿瘤血管的新生
• 三、MMP-26 可能成为判断乳腺癌恶性程度、侵袭能力的检测指标之一,并进而判断乳腺癌患者的预后
• 1. MMP-26 可能成为判断乳腺癌恶性程度、侵袭和转移能力的检测指标之一,并进而判断乳腺癌患者的预后
• 2. MMP-26 对乳腺癌淋巴结转移的影响
• 3. ER 可能参与MMP-26 表达的调控
• 第六篇 结论
• 第七篇 参考文献
• 第八篇 攻博期间发表的学术论文
• 中文摘要
• Abstract
• 致谢