WGA、RCA-Ⅰ和ECL凝集素受体在正常小鼠神经管和过量维生素A酸致畸神经管发育中的作用

论文摘要

目的：组织和器官的形态发生（morphogenesis）是通过细胞的形态变化和运动、细胞的识别和粘附、细胞的增殖和凋亡等过程而实现的。神经管的形成和发育也是一个极其复杂的生物学过程，包括细胞增殖、凋亡、分化、识别、迁移和功能的表达等等。近年来的研究表明：神经管的发育不仅受到细胞基因表达的控制，而且还与胚胎和神经上皮产生的多种调节因子有关，凝集素受体便是这些调节因子中的一员。凝集素受体是一类分布于细胞膜表面的糖蛋白、糖脂或糖复合物。凝集素受体上具有能被凝集素特异识别并结合的糖基。我们以昆明小鼠为研究对象，用亲和细胞化学的方法对正常鼠胚神经管和过量维生素A酸致畸鼠胚神经管发育中WGA、RCA-Ⅰ、ECL三种凝集素受体的分布状况以及变化规律进行了研究，以期阐明上述三种凝集素受体在正常神经管及过量维生素A酸致畸神经管发育中的作用。方法：将健康育龄雌性昆明小鼠与正常具有生育能力的雄鼠按2∶1合笼，次日晨查见阴栓者，当天中午定为孕0.5天。孕鼠受精后第7天下午6∶30一次性灌服花生油稀释的维生素A酸30mg／kg，以获取神经管畸形的小鼠胚胎。将正常组孕鼠和维生素A酸致畸组的孕鼠分别于孕第7.5、8.5、9.0、9.5、10.5、11.5，12.5天颈椎脱臼处死并立即剖腹取出子宫。用刀片切取有膨大结节部位的子宫（含胚胎）；孕11.5d、12.5d的孕鼠在滤纸上沿子宫侧轴将子宫剪开，仔细剥离柔软的蜕膜、分离鼠胚。所得标本用Bouin固定液固定，常规石蜡包埋，做厚度为5μm的连续切片。采用SABC亲和细胞化学法检测WGA、RCA-Ⅰ、ECL三种凝集素受体在小鼠胚胎神经管的分布情况。结果：1．WGA染色结果：在孕7.5～12.5天，WGA受体在神经管的腔面、基底膜、神经上皮细胞的胞膜和胞浆均有表达。WGA受体表达的总体趋势是先下降后上升，其最低点出现于孕9.0天。在孕9.5～12.5天，WGA受体在头部和尾部的表达水平明显高于体部。在维生素A酸致畸组，WGA受体主要表达于神经管的腔面，其它部位的表达减弱或消失。但是，在孕10.5～12.5天，WGA受体在神经管的背部呈强阳性着色。无论神经管的头部、体部，还是尾部，WGA受体在致畸组表达水平明显低于正常组。2．RCA-Ⅰ染色结果：在孕7.5～12.5天，RCA-Ⅰ受体在神经管的腔面、基底膜、神经上皮细胞的胞膜和胞浆均有表达。在神经管未关闭之前（孕7.5～9.0天），RCA-Ⅰ受体的表达呈现逐渐上升的趋势。在神经管关闭之后（孕9.5～12.5天），RCA-Ⅰ受体的表达在神经管头部和尾部仍呈现逐渐上升的趋势，在神经管体部，却呈现逐渐下降的趋势，而且，头部和尾部的表达强度均高于体部。在维生素A酸致畸组，RCA-Ⅰ受体主要表达于神经管的腔面，其它部位的表达减弱或消失。但在孕11.5～12.5天，神经管的背部却呈强阳性表达。无论神经管的头部、体部，还是尾部，RCA-Ⅰ受体在致畸组表达水平明显低于正常组。3．ECL染色结果：在孕7.5～12.5天，强阳性着色部位仅见于神经管的腔面，基底膜、神经上皮细胞的胞膜呈阳性、弱阳性或阴性着色，神经上皮细胞的胞浆呈弱阳性或阴性着色。无论在神经管的头部、体部，还是尾部，ECL受体的表达均呈现先下降后上升的趋势，其最低点在孕9.0天。在维生素A酸致畸组，阳性着色部位与正常发育神经管基本相同。但在孕11.5～12.5天，神经管的背部却呈强阳性表达。在孕9.5～12.5天神经管的头部，孕10.5～12.5天神经管的尾部，孕11.5～12.5天神经管的体部，ECL受体的表达水平低于正常发育的神经管相应部位。结论：1．在神经管正常发育过程中，三种凝集素受体的数量和分布状况均存在时间和空间上的差异。2．在神经管关闭前和关闭后，三种凝集素受体的表达趋势存在明显差异。这可能与神经管关闭的形态学事件有关。3．在神经管正常发育过程中，三种凝集素受体的表达均呈现规律性的变化。它们可能参与对神经管发育的调节。4．三种凝集素受体在神经管表达水平的下降，尤其是WGA、RCA-Ⅰ表达水平的下降与维生素A酸致神经管畸形相关。

论文目录

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