首页> 正文

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）愈伤细胞悬浮培养生产雷公藤甲素研究

2020-12-10阅读(1013)

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）愈伤细胞悬浮培养生产雷公藤甲素研究

论文摘要

雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.）属卫矛科藤本植物，作为我国传统中药材已有700多年的利用历史，具有广泛药理作用，临床上多用于治疗风湿性关节炎、红斑狼疮、肾炎等多种疾病。现代医学研究表明雷公藤亦具有明显的抗炎、抗肿瘤、抗器官排斥、免疫调节及抗生育等作用。目前，传统药用植物的来源仍多以采挖野生资源为主，这种不合理及破坏性利用植物资源的方式，已导致药用植物资源日益减少。随着药用植物的需求量日益增多，利用植物组织培养技术生产药用次生代谢产物具有重大意义，亦为实现中药资源的可持续利用提供了新的技术途径。本研究以雷公藤组织培养苗为材料，研究了愈伤组织诱导、悬浮细胞培养体系的建立、外源物对悬浮细胞生物学特征及次生代谢过程的影响。主要内容如下：1．以雷公藤组培苗为诱导材料，研究雷公藤根、茎、叶三种外植体愈伤组织诱导率及雷公藤甲素质量分数。结果发现：在MS培养基上三种外植体愈伤组织诱导率：叶﹥茎﹥根；在五种不同组分培养基上对叶外植体诱导，其诱导率：MS﹥N6﹥B5﹥White﹥1/2MS；同时研究表明雷公藤叶外植体诱导愈伤组织最佳pH范围为5.8-6.2；不同外植体诱导的愈伤组织雷公藤甲素质量分数分布规律：叶愈伤﹥根愈伤﹥茎愈伤。2．对雷公藤叶愈伤组织进行悬浮培养，研究不同营养条件对雷公藤愈伤细胞生长及其雷公藤甲素含量的影响。结果表明：悬浮细胞在White培养基上增殖最快，而在MS培养基上生长最慢；White和MS培养基中悬浮细胞在第6d时雷公藤甲素含量最高，产量分别为70.14ug/g（DW）和40.77ug/g．而N6培养基中雷公藤甲素最大产量为6.34ug/g，出现在第9d；三组细胞培养悬浮液中的雷公藤甲素峰值产量分布规律则为：White（2.81mg/L）> N6（2.13mg/L）> MS（1.63mg/L）；同时培养基的pH值随细胞的生长而有波动现象。3．以White液体培养基为培养条件，研究不同浓度水杨酸（SA）和氯化镧（Lacl3）对悬浮细胞生物学特征及产甲素过程的影响。SA和Lacl3均对雷公藤悬浮细胞PAL活性有不同程度的促进作用，两种诱导子对悬浮细胞胞内雷公藤甲素质量分数影响存在差异，两种诱导子各浓度处理下细胞内甲素峰值质量分数总体变异分布规律为：SA0.1mg/L95．99μg/g﹥Lacl340mg/L86.34μg/g﹥SA1.0mg/L71.02μg/g﹥Lacl360mg/L65.47μg/g﹥CK63.12μg/g﹥Lacl320mg/L58.23μg/g﹥SA10.0mg/L54.86μg/g。SA和Lacl3在合适浓度下有促进悬浮细胞向胞外释放次生代谢产物的能力，均能有效促进悬浮细胞胞外甲素的积累。两种诱导子对雷公藤胞外甲素峰值产量积累效应的影响结果为：SA0.1mg/L5.53mg/L﹥Lacl320mg/L3.11mg/L﹥Lacl340mg/L2.68mg/L﹥Lacl360mg/L1.84mg/L﹥CK1.56mg/L﹥SA1.0mg/L1.48mg/L﹥SA10.0mg/L1.34mg/L。4．以White液体培养基为培养条件，研究雷公藤内生真菌诱导子对宿主细胞生物学特征及产甲素过程的影响。不同时间添加内生真菌诱导子悬浮细胞胞内甲素峰值质量分数总体分布变异规律为：NS-5菌丝体⑧155.18μg/g﹥NS-5菌丝体④140.62μg/g﹥NS-17培养液④101.12μg/g﹥NS-5培养液④93.41μg/g﹥NS-17菌丝体④75.52μg/g﹥NS-17菌丝体⑧70.72μg/g﹥CK63.12μg/g﹥NS-5培养液⑧53.1μg/g﹥NS-17培养液⑧39.4μg/g；不同时间添加诱导子对胞外甲素峰值浓度影响规律为：NS-5菌丝体诱导子（K8）﹥NS-17菌丝体诱导子（K6）﹥NS-17培养液诱导子（K5）﹥NS-5培养液诱导子（K4）﹥NS-5培养液诱导子（K7）﹥NS-17菌丝体诱导子（K2）。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 1 前言
  • 1.1 雷公藤研究概况
  • 1.1.1 雷公藤地理分布及形态特征
  • 1.1.2 雷公藤药用历史
  • 1.1.3 雷公藤植株药用成分
  • 1.2 雷公藤甲素研究进展
  • 1.2.1 雷公藤甲素化学结构及理化性质
  • 1.2.2 雷公藤甲素药理研究
  • 1.3 细胞悬浮培养生产次生代谢产物研究进展
  • 1.4 诱导子研究进展
  • 1.4.1 非生物诱导子
  • 1.4.2 内生真菌诱导子
  • 1.5 本文研究意义及主要研究内容
  • 2 愈伤组织诱导及愈伤组织系建立
  • 2.1 试验材料及仪器
  • 2.1.1 植物材料与培养基
  • 2.1.2 主要仪器、药品
  • 2.2 试验方法
  • 2.2.1 愈伤组织诱导
  • 2.2.2 愈伤组织细胞活力测定
  • 2.2.3 雷公藤甲素的测定
  • 2.2.3.1 高效液相仪（HLPC）测定条件设定
  • 2.2.3.2 雷公藤甲素样品的制备
  • 2.3 结果与分析
  • 2.3.1 不同外植体愈伤组织诱导
  • 2.3.2 雷公藤甲素标准品及样品 HPLC 检测图谱
  • 2.3.3 不同外植体对雷公藤愈伤组织诱导研究
  • 2.3.4 不同培养基对雷公藤叶外植体的诱导和生长影响
  • 2.3.5 不同 pH 值对雷公藤外植体的诱导和生长的影响
  • 2.3.6 雷公藤不同外植体愈伤组织生物量研究
  • 2.3.7 雷公藤不同外植体愈伤组织细胞活力比较
  • 2.3.8 雷公藤不同生长条件及培养形态下雷公藤甲素质量分数变异规律
  • 2.4 小结
  • 3 细胞悬浮培养系的建立
  • 3.1 材料与仪器
  • 3.2 试验方法
  • 3.2.1 悬浮细胞系的建立
  • 3.2.2 高效液相仪（HLPC）测定条件设定
  • 3.2.2.1 雷公藤甲素测定
  • 3.2.2.2 细胞干质量的测定
  • 3.3 结果与分析
  • 3.3.1 愈伤组织与悬浮细胞
  • 3.3.2 雷公藤甲素标准品及样品 HPLC 检测图谱
  • 3.3.3 不同培养基对雷公藤细胞生长量的影响
  • 3.3.4 不同培养基对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素质量分数的影响
  • 3.3.5 雷公藤细胞悬浮培养对培养液 pH 的影响
  • 3.3.6 雷公藤细胞培养悬浮液中甲素质量分数变化
  • 3.4 小结
  • 4 非生物子诱导调控雷公藤悬浮细胞产甲素研究
  • 4.1 试验材料与仪器
  • 4.2 试验方法
  • 4.2.1 外源诱导子 SA 和 Lacl3浓度控制及添加
  • 4.2.2 悬浮细胞活性测定
  • 4.2.3 悬浮细胞生物量测定
  • 4.2.4 悬浮液总糖含量测定
  • 4.2.5 细胞苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia-lyase，PAL）测定
  • 4.2.6 细胞胞内、胞外雷公藤甲素测定
  • 4.3 结果与讨论
  • 4.3.1 不同浓度 SA 和 Lacl3对悬浮细胞活性的影响
  • 4.3.2 不同浓度 SA 和 Lacl3对悬浮细胞生物量的影响
  • 4.3.3 不同浓度 SA 和 Lacl3对悬浮培养液总糖含量的影响
  • 4.3.4 不同浓度 SA 和 Lacl3对细胞 PAL 的影响
  • 4.3.5 不同浓度 SA 和 Lacl3对细胞内雷公藤甲素的影响
  • 4.3.6 不同浓度 SA 和 Lacl3对胞外雷公藤甲素的影响
  • 4.4 小结
  • 5 生物诱导子调控下雷公藤悬浮细胞产甲素研究
  • 5.1 试验材料与仪器
  • 5.1.1 生物材料
  • 5.1.2 培养基
  • 5.1.3 仪器及试剂
  • 5.2 试验方法
  • 5.2.1 内生真菌菌丝体及菌液诱导子制备
  • 5.2.2 细胞悬浮培养及处理
  • 5.2.3 悬浮细胞生物量测定
  • 5.2.4 悬浮细胞活性测定
  • 5.2.5 悬浮液总糖含量测定
  • 5.2.6 悬浮细胞 PAL 测定
  • 5.2.7 细胞内过氧化物酶（Peroxidase，POD）、丙二醛（MDA）的测定
  • 5.2.8 雷公藤悬浮细胞胞内、胞外雷公藤甲素测定
  • 5.3 结果与讨论
  • 5.3.1 内生真菌菌丝体和菌液诱导子对悬浮细胞生物量的影响
  • 5.3.2 内生真菌菌丝体和菌液诱导子对悬浮细胞活性的影响
  • 5.3.3 内生真菌菌丝体和菌液诱导子对悬浮液总糖含量的影响
  • 5.3.4 内生真菌菌丝体和菌液诱导子对细胞 PAL 的影响
  • 5.3.5 内生真菌菌丝体和菌液诱导子对细胞 POD 活性的影响
  • 5.3.6 内生真菌菌丝体和菌液诱导子对细胞 MDA 的影响
  • 5.3.7 内真生菌菌丝体和菌液诱导子对细胞内雷公藤甲素的影响
  • 5.3.8 内生真菌菌丝体和菌液诱导子对胞外雷公藤甲素的影响
  • 5.4 小结
  • 6 结论
  • 6.1 研究主要结论
  • 6.2 研究创新
  • 6.3 研究展望
  • 参考文献
  • 研究生期间参加科研及发表论文情况
  • 致谢

    • 相关论文文献

    • [1].雷公藤甲素对中国仓鼠卵巢细胞凋亡的影响及黄体酮的干预效果[J]. 广西医学 2019(03)
    • [2].雷公藤甲素立方液晶的制备及体外评价[J]. 中国药学杂志 2019(09)
    • [3].含雷公藤甲素中药的风险控制[J]. 中成药 2019(07)
    • [4].雷公藤甲素毒性作用及减毒研究的整合探析[J]. 中国实验方剂学杂志 2019(20)
    • [5].雷公藤甲素抗肿瘤药理作用的研究进展[J]. 药物评价研究 2018(02)
    • [6].雷公藤甲素作用新机制研究[J]. 中国中西医结合杂志 2018(03)
    • [7].雷公藤与甘草配伍对雷公藤甲素的影响[J]. 中国城乡企业卫生 2018(03)
    • [8].自乳化给药系统对雷公藤甲素的减毒作用研究[J]. 中国现代应用药学 2019(02)
    • [9].雷公藤类制剂的研究进展[J]. 重庆中草药研究 2018(02)
    • [10].雷公藤甲素对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用[J]. 解放军医药杂志 2019(02)
    • [11].雷公藤甲素新型给药系统研究进展[J]. 浙江中西医结合杂志 2019(05)
    • [12].雷公藤甲素诱导急性髓细胞白血病干细胞凋亡及其机制[J]. 临床输血与检验 2017(06)
    • [13].雷公藤甲素对模式生物雄性秀丽隐杆线虫的生殖毒性作用[J]. 中成药 2018(05)
    • [14].样品处理方法对雷公藤叶中雷公藤甲素含量测定结果的影响[J]. 湖北理工学院学报 2016(04)
    • [15].雷公藤甲素毒杀农田害鼠效果观察[J]. 中国植保导刊 2015(05)
    • [16].雷公藤甲素提取分离工艺研究现状[J]. 中国药理学与毒理学杂志 2012(03)
    • [17].反相高效液相梯度洗脱法测定药材中雷公藤甲素的含量[J]. 安徽农业科学 2011(21)
    • [18].雷公藤愈伤细胞悬浮培养生产雷公藤甲素的研究[J]. 北华大学学报(自然科学版) 2011(06)
    • [19].雷公藤甲素对人子宫颈微血管内皮细胞活性的抑制[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志 2019(02)
    • [20].雷公藤甲素增强三阴性乳腺癌细胞对顺铂敏感性的实验研究[J]. 中国现代普通外科进展 2019(08)
    • [21].一起羊中毒病例的诊治[J]. 农技服务 2017(16)
    • [22].雷公藤甲素超临界萃取工艺研究[J]. 河北农业大学学报 2018(04)
    • [23].维生素K族对植物源灭鼠剂雷公藤甲素解毒效果的试验研究[J]. 中华卫生杀虫药械 2018(04)
    • [24].雷公藤甲素对大肠癌细胞细胞周期的调控作用[J]. 贵阳医学院学报 2012(02)
    • [25].雷公藤甲素对外周血单个核细胞白细胞介素17A分泌的影响[J]. 南京医科大学学报(自然科学版) 2010(03)
    • [26].雷公藤甲素抗肺癌的分子机制研究及其进展[J]. 国际检验医学杂志 2018(24)
    • [27].雷公藤甲素对人视网膜色素上皮细胞氧化损伤的抑制作用[J]. 眼科新进展 2018(12)
    • [28].雷公藤甲素颗粒剂产品标准已修订百菌清含量不超0.1%即为合格[J]. 农药市场信息 2019(09)
    • [29].雷公藤甲素对艾滋病免疫反应通路影响的生物信息学分析[J]. 中国中药杂志 2019(16)
    • [30].雷公藤甲素治疗类风湿关节炎的作用机制及安全性分析[J]. 中草药 2019(16)

    标签：;  ;  ;  ;  ;  

    雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）愈伤细胞悬浮培养生产雷公藤甲素研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5