有机磷农药多残留酶联免疫吸附分析方法的研究

论文摘要

本研究以建立环境中有机磷农药多残留的酶联免疫吸附分析（ELISA）方法为目标,设计合成了有机磷农药通用半抗原,通过结合载体蛋白质制备了通用人工抗原,免疫动物获得了抗多种有机磷农药的群特异性抗血清。在所获得抗体的基础上,建立了有机磷农药多残留ELISA方法。所建立的方法为有机磷农药的快速多残留检测提供了技术手段,具有一定的使用价值和推广应用前景。主要研究结果如下:1.通过O,O-二乙基硫代磷酰氯和4-氨基丁酸反应合成了有机磷农药通用半抗原二乙基-N-（3-羧基丙基）硫逐磷酰胺酯（简称DENP）,并进行了结构鉴定。2.采用碳二亚胺法将DENP与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清蛋白（OVA）进行偶联,制备了通用人工抗原DENP-BSA和包被原DENP-OVA。经鉴定,结合比分别为12︰1和17:1。3.将通用人工抗原DENP-BSA免疫两只新西兰大白兔,采血获得了针对有机磷农药的群特异性抗血清,效价分别1:102400和1:25600。4.考察了9种有机磷农药与抗血清的亲和性,发现与半抗原DENP结构高度相似的甲拌磷、乙拌磷,内吸磷与抗体的亲和性最好;与DENP同样含有直链烃结构,但另一端为二甲氧基（硫代）磷酸酯的氧乐果和乐果与抗体的亲和性次之;与DENP一样含有二乙氧基硫代磷酸酯结构,但另一端连接基团为芳环或杂环的辛硫磷、二嗪农、喹硫磷及毒死蜱和抗体的亲和性较弱。5.建立了用于检测甲拌磷、内吸磷的间接竞争ELISA方法的标准曲线,检测限分别为0.0037mg/L和0.033mg/L。对水样中添加的甲拌磷和内吸磷进行测定,得回收率范围为108.00%112.00%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 免疫分析方法
• 1.3 农药免疫分析方法的程序
• 1.3.1 半抗原的设计、合成
• 1.3.2 人工抗原的合成
• 1.3.3 抗体制备
• 1.3.4 酶联免疫吸附分析（ELISA）方法的建立
• 1.4 有机磷农药多残留免疫分析的研究进展
• 1.5 研究目的和意义
• 1.6 研究内容
• 1.7 技术路线
• 第二章 有机磷农药通用半抗原、人工抗原及抗体的制备
• 2.1 引言
• 2.2 材料与仪器
• 2.2.1 试剂和材料
• 2.2.2 仪器
• 2.3 试验方法
• 2.3.1 通用半抗原的合成
• 2.3.2 通用半抗原的鉴定
• 2.3.3 通用人工抗原和包被原的合成
• 2.3.4 通用人工抗原和包被原的鉴定
• 2.3.5 抗体的制备
• 2.4 结果与分析
• 2.4.1 通用半抗原的结构鉴定
• 2.4.2 通用人工抗原的鉴定
• 2.4.3 抗血清的效价
• 2.5 小结
• 第三章 有机磷农药多残留酶联免疫分析方法的建立
• 3.1 引言
• 3.2 材料与仪器
• 3.2.1 试剂、材料
• 3.2.2 仪器
• 3.3 试验方法
• 3.3.1 间接竞争ELISA 方法的建立
• 3.3.2 有机磷农药抑制标准曲线的建立
• 3.3.3 水样中甲拌磷、内吸磷的检测
• 3.4 结果与分析
• 3.4.1 间接竞争ELISA 方法的优化
• 3.4.2 有机磷农药的抑制标准曲线
• 3.4.3 抗体交叉反应率
• 3.4.4 水样中内吸磷和甲拌磷的ELISA检测
• 3.5 小结
• 第四章 总结与展望
• 4.1 结论
• 4.2 展望
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表的论文、申请的专利