银杏黄酮对人卵巢恶性畸胎瘤细胞株PA-1及人卵巢颗粒细胞的影响

论文摘要

目的:卵巢恶性畸胎瘤是卵巢恶性生殖细胞肿瘤（malignant ovarian germ cell tumor,MOGCT）中最常见的一种。该肿瘤多发生于年轻妇女及幼女,并且对化疗比较敏感,所以,目前对于卵巢恶性畸胎瘤的治疗,多主张保留生育功能的手术并辅以有效的联合化疗,因此,化疗已经成为非常重要的治疗手段,但是目前临床上常用的化疗药物在杀灭肿瘤细胞的同时也会对机体的正常组织细胞造成伤害。银杏黄酮是银杏叶提取物的主要成分之一,具有抗氧化、降血脂、扩血管、抗衰老等生物活性,对于动脉硬化、高血压等心血管疾病的治疗有很好的临床应用价值。近年来,银杏黄酮对许多肿瘤细胞的明显的抑制作用引起了学者们的关注。本研究通过体外培养人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞,观察银杏黄酮对PA-1细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,探讨银杏黄酮对PA-1的抑制作用及可能机制,并将对PA-1细胞的有效抑制剂量作用于人卵巢颗粒细胞,观察银杏黄酮对其增殖及分泌E2的影响。方法:培养瓶中加适量含10%胎牛血清的MEM培养基后置于37℃、5%CO2、饱和湿度的培养箱中培养,取处于对数生长期的细胞进行实验。1光镜观察:将浓度为0、175mg/L、200mg/L、225mg/L的银杏黄酮作用于PA-1细胞株,在倒置相差显微镜下观察细胞的生长情况。2 MTT法:调整细胞密度为6.5×104/ml,以每孔200μl接种于96孔培养板中,进入对数生长期后用不同浓度银杏黄酮（0、175mg/L、200mg/L、225mg/L）作用不同时间（24h、48h、72h）。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测药物对细胞增殖的抑制作用。3流式细胞术:碘化丙啶（propidium iodide,PI）标记的流式细胞术检测处理48h后各组PA-1细胞的凋亡和细胞周期分布情况。实验分组如下:（1）对照组:仅以含10%胎牛血清的MEM培养基培养细胞;（2）药物组:银杏黄酮终浓度为175mg/L、200mg/L、225mg/L。4采用免疫组化法观察药物作用下凋亡相关基因bcl-2/bax表达的变化。实验分组如下:（1）对照组:仅以含10%胎牛血清的MEM培养基培养细胞;（2）药物组:银杏黄酮终浓度为175mg/L、200mg/L、225mg/L。5将浓度为0、175mg/L、200mg/L、225mg/L的银杏黄酮作用于人卵巢颗粒细胞,通过MTT法观察对颗粒细胞的影响。6将浓度为0、175mg/L、200mg/L、225mg/L的银杏黄酮作用于人卵巢颗粒细胞,通过化学发光法检测颗粒细胞分泌雌二醇值的变化。结果:1倒置相差显微镜下观察PA-1细胞:不同浓度银杏黄酮作用于PA-1细胞后,部分细胞由伸展开的梭形变为圆形,随药物浓度增加,细胞膜开始皱缩,圆形细胞逐渐增多,细胞体积逐渐变小,形态不规则,细胞膜不再完整,细胞质浓缩,细胞的贴壁能力降低,最后漂浮。2 MTT结果显示,观察24h对照组OD值为（0.303±0.010）,175mg/L、200 mg/L、225 mg/L组OD值分别为（0.236±0.026）、（0.189±0.023）、（0.143±0.009）,观察48h对照组OD值为（0.497±0.053）,175mg/L、200 mg/L、225 mg/L组OD值分别为（0.304±0.025）、（0.171±0.019）、（0.054±0.002）,观察72h对照组OD值为（0.774±0.002）,175mg/L、200 mg/L、225 mg/L组OD值分别为（0.321±0.029）、（0.205±0.020）、（0.035±0.009）。各药物组与对照组相比较,差异均有统计学意义（均p<0.05）。并且随着时间增加,细胞抑制率增加,呈现出明显的剂量依赖性和时间依赖性。3 （1）PI标记的流式细胞术检测细胞凋亡率显示,对照组凋亡率为（4.48%±0.67%）,175mg/L、200 mg/L、225 mg/L三组凋亡率分别为（15.87%±0.91%）、（21.70%±1.39%）、（28.12%±1.21%）,各药物组与对照组及组间相比差异均有统计学意义,且呈浓度依赖性（均p<0.05）。（2）流式细胞术检测细胞周期分布情况显示,随着银杏黄酮浓度增加,细胞周期被阻滞于G0-G1期,对照组G0-G1期的比例为（35.70%±1.77%）,175mg/L、200 mg/L、225 mg/L三组G0-G1期的比例分别为（50.83%±1.70%）、（56.20%±2.36%）、（61.73%±1.05%）,各药物组与对照组及组间相比差异均有统计学意义（均p<0.05）。4免疫组化显示,随着银杏黄酮浓度增加,Bax表达逐渐增加,而Bcl-2表达逐渐减少。5将银杏黄酮作用于人卵巢颗粒细胞后,MTT结果显示,对照组OD值为（1.025±0.065）,175mg/L、200 mg/L、225 mg/L三组OD值分别为（1.029±0.061）、（1.063±0.049）、（1.049±0.032）,各药物组对PA-1细胞株增殖的影响与对照组相比差异无统计学意义（p>0.05）。6将银杏黄酮作用于人卵巢颗粒细胞后,化学发光法检测发现,对照组E2值为（1566.00±243.00）,175mg/L、200 mg/L、225 mg/L三组E2值分别为（1541.33±107.72）、（1548.67±84.18）、（1659.67±544.42）,各药物组与对照组相比,分泌E2的差异无统计学意义（p >0.05）。结论:1银杏黄酮可以抑制人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞的体外增殖,促进凋亡。2银杏黄酮可以在体外促进人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞凋亡及细胞周期的改变,能够将PA-1细胞阻滞于G0-G1期,通过干扰DNA合成影响细胞增殖。3银杏黄酮通过下调Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白促进人卵巢恶性畸胎瘤PA-1的凋亡。4可以抑制人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞生长的剂量的银杏黄酮在体外对人卵巢颗粒细胞的增殖没有影响。5可以抑制人卵巢恶性畸胎瘤PA-1细胞生长的剂量的银杏黄酮在体外对人卵巢颗粒细胞分泌E2的值没有影响。6银杏黄酮在体外可能对人卵巢颗粒细胞没有损伤作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写
• 引言
• 第一部分 银杏黄酮对人卵巢恶性畸胎瘤细胞 PA-1 体外增殖的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 银杏黄酮对人卵巢颗粒细胞体外增殖的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 结论
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历