次乌头碱与甘草苷合用对心肌兴奋—收缩偶联相关基因mRNA表达的影响

论文摘要

附子具有强心、抗炎镇痛、抗肿瘤、调节免疫活性等作用,双酯型生物碱是其主要药效成分,亦是其有毒成分,其中以次乌头碱的强心作用最安全。临床常用甘草与附子配伍减轻其毒性。据文献报道甘草解附子心脏毒性作用的有效成分可能是黄酮类化合物。目前,对附子甘草的配伍大多停留在配伍后物质成分的检测以及电生理方面。心肌Ca2+调控蛋白相关基因与心肌兴奋收缩-偶联密切相关,通过深入探讨次乌头碱甘草苷配伍前后与心肌兴奋-收缩偶联相关基因mRNA和蛋白表达的变化,从分子水平解释甘草苷对次乌头碱的减毒增效作用,对附子的临床配伍用药提供了一定的实验依据。本论文选择附子中毒性较小成分次乌头碱与甘草中黄酮类化合物甘草苷配伍,从体内和体外研究次乌头碱与甘草苷配伍后对心肌兴奋-收缩偶联相关离子通道基因表达的影响。通过建立稳定培养原代乳鼠心肌细胞的方法,观察次乌头碱作用心肌细胞后心肌细胞搏动频率的变化,进一步用MTT法检测次乌头碱与甘草苷对心肌细胞的毒性作用。不同浓度次乌头碱组,甘草苷单用组以及次乌头碱高浓度与甘草苷合用组分别作用于乳鼠心肌细胞和成年大鼠体内灌胃给药,利用荧光定量PCR检测各组Cav1.2. NCX、SCN5A、RyR2mRNA的表达情况。结果显示,次乌头碱可显著加快心肌细胞的搏动频率,高于32μmol/L的次乌头碱使心肌细胞停止搏动。MTT结果表明次乌头碱和甘草苷对心肌细胞存活率无影响。荧光定量PCR结果表明,次乌头碱灌胃给药后能显著抑制NCX mRNA的表达与显著诱导RyR2 mRNA的表达；甘草苷仅对NCX mRNA的表达有显著抑制作用；甘草苷与次乌头碱合用不仅能显著抑制SCN5AmRNA的表达与显著诱导RyR2 mRNA的表达,也能显著拮抗高剂量次乌头碱对NCX mRNA表达的抑制作用。通过以上研究结果,我们推测甘草苷可能通过协同诱导RyR2mRNA的表达而增强次乌头碱的强心作用,通过抑制SCN5A mRNA的表达与拮抗NCX mRNA的异常表达而减轻次乌头碱导致的心律失常。

论文目录

摘要

Abstract

第一章绪论

1 附子研究进展

1.1 附子成分药理学研究进展

1.2 附子成分毒理学研究进展

1.3 附子甘草配伍研究进展

2 心肌离子通道与心律失常的研究进展

2.1 心室肌动作电位的形成与离子通道

2.2 心肌离子通道与心律失常

2.2.1 钠离子通道

2.2.2 钾离子通道

2.2.3 钙离子通道

+-Ca²⁺exchanger,NCX)'>2.2.4 钠钙交换体(Na⁺-Ca²⁺exchanger,NCX)

3 本论文选题依据和研究内容

3.1 选题依据

3.2 研究内容

2 mRNA表达的影响'>第二章次乌头碱与甘草苷合用对心肌细胞Cav1.2、NCX、SCN5A、RyR₂mRNA表达的影响

1 前言

2 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 实验药品与试剂

2.1.3 实验器材与仪器

2.2 实验方法

2.2.1 乳鼠原代心肌细胞的培养

2.2.2 体外给药浓度的选择

2.2.3 次乌头碱与甘草苷合用对心肌细胞Cav1.2、NCX、SCN5A、RyR2 mRNA表达的影响

2.2.4 数据统计处理

3 实验结果

3.1 心肌细胞存活率的测定

3.2 心肌细胞形态学观察

3.3 次乌头碱对心肌细胞自发搏动频率的影响

3.4 次乌头碱、甘草苷对心肌细胞存活率的影响

3.5 次乌头碱与甘草昔合用对心肌细胞Cavl.2、NCX、SCNSA、RyR:mRNA 表达的影响

4 讨论

第三章次乌头碱与甘草昔合用对心肌组织Cva1.2、NCX、 SCNSA、RyR:mRNA表达的影响