蝴蝶兰叶片诱导类原球茎（PLB）及转抗寒基因ICE1的初步研究

论文摘要

本实验通过只采用一种培养基来对14个品种的蝴蝶兰叶片进行类原球茎（PLB）的诱导,并且类原球茎的继代增殖也可采用该培养基。研究结果表明,将14个品种的蝴蝶兰叶片接种在培养基1/2MS+3mg/LTDZ+20g/蔗糖+3g/Lphytagel（Sigma）上,均能诱导出类原球茎。诱导率分别是：V31：32%,8106：33%,729：46%,777：51%,604：21%,602-3：9%,791：28%,8169：24%,735：31%,607：21%,771：4%,608：38%,728-3：18%,788：1%。这为蝴蝶兰的大规模工厂化生产提供了技术依据,并且该培养基成分简单,成本低廉,重复性好,继代增殖效率高,大大降低了蝴蝶兰的培养成本,增加商业利润。另外,本研究从拟南芥的RNA中克隆到ICEl,连上启动子35S构建成植物表达载体OVERICE1,并构建植物表达载体pCAMBIA2300YFP,通过农杆菌介导法导入烟草叶片中做瞬时表达,证明所构建的植物表达载体pCAMBIA2300YFP具有表达能力,为下一步的将植物表达载体OVERICE1导入蝴蝶兰类原球茎做稳定表达做好技术储备,初步建立一个蝴蝶兰遗传转化系统,为进一步获得具有抗寒基因的蝴蝶兰新品种打下基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1. 兰科植物的生物学特性
• 1.1 兰科植物的生物学特性
• 1.2 蝴蝶兰的生物学特性
• 2. 我国栽培兰花的历史
• 3. 兰花的价值
• 3.1 兰花的经济价值
• 3.2 兰花的文化价值
• 4. 兰花的组织培养
• 4.1 兰花组织培养的发展史
• 4.2 利用原球茎快速繁殖蝴蝶兰的研究概况
• 5. 兰花转基因的研究进展
• 5.1 兰花转基因的受体材料
• 5.2 转化的目的基因
• 5.3 转化的方法
• 6. 抗寒基因ICE1
• 6.1 CBF转录因子
• 6.2 抗寒基因ICE1
• 7. 本研究的目的及意义
• 第二章 蝴蝶兰叶片诱导类原球茎（PLB）及转抗寒基因ICE1的初步研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 实验方法
• 2 结果与分析
• 2.1 ICE1基因的克隆
• 2.2 植物表达载体OVERICE1的构建及酶切鉴定
• 2.3 植物表达载体pCAMBIA2300YFP的构建及酶切鉴定
• 2.4 蝴蝶兰叶片诱导原球茎（PLB）
• 2.5 农杆菌介导法转化YFP基因在烟草叶片上瞬时表达
• 3 讨论
• 第三章 结论
• 3.1 克隆到抗寒基因ICE1
• 3.2 植物表达载体的构建
• 3.3 建立了诱导蝴蝶兰类原球茎（PLB）的诱导体系
• 3.4 建立了蝴蝶兰类原球茎（PLB）的快速继代增殖体系
• 参考文献
• 谢辞