髓系白血病异常NHEJ DNA修复功能的研究

论文题目: 髓系白血病异常NHEJ DNA修复功能的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 内科血液学

作者: 傅琤琤

导师: 陈子兴

关键词: 白血病,双链断裂,非同源末端连接,依赖的蛋白激酶,蛋白

文献来源: 苏州大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:设计并建立一个用于临床标本的体外NHEJ检测体系,以正常骨髓或外周血作对照,研究髓系白血病细胞非同源末端连接修复DNA双链断裂的能力和DNA断端连接的精确性。研究髓系白血病过度活跃的修复能力是否依赖NHEJ相关的主要蛋白质功能,以及髓系白血病细胞Ku蛋白和DNA依赖蛋白激酶的表达水平和基因表达情况。方法:正常骨髓或外周血单个核细胞、白血病细胞提取的核蛋白与线性的pUC18质粒DNA 在体外一定的条件下一起进行连接反应。结束后质粒DNA 经凝胶分离,用SYBR green I 染色成像。每个标本的DNA 末端连接能力以所连接的DNA 片段的辉度除以所有DNA 片段的辉度的百分比表示。以上述方法对7 种髓系白血病细胞株、淋巴系白血病细胞株Jurkat、骨髓瘤细胞株U266、5 种胶质瘤细胞株、16 例正常骨髓或外周血单个核细胞、20 例慢性粒细胞白血病细胞和19 例初诊的急性髓系白血病细胞进行检测。正常骨髓单个核细胞,初诊的慢性粒细胞白血病细胞,与K562 进行Co60辐照6Gy,培养1216 小时,进行连接实验,同时取照射后即时收集的细胞和自身对照作对比。慢粒白血病细胞用10μmol/L 三氧化二砷作用24 小时后检测DNA 连接能力。感受态大肠杆菌DH5α与正常骨髓和白血病细胞连接的质粒DNA 一起电击转化,培养于含X-gal 和IPTG 的LB 培养基琼脂板表面,质粒完整修复的菌落呈蓝色。若修复不准确菌落呈白色。错误修复率用白斑占所有形成的菌落克隆的百分比表示。设计围绕EcoR I 酶切位点的引物,对所有白斑和部分蓝斑进行PCR 分析,有意义的PCR产物进行测序。抗Ku70、Ku86 和DNA-PKcs 的抗体用来进行免疫去除后的连接实验。对髓系白血病细胞和正常骨髓细胞用Western Blot 和RT-PCR 分别检测Ku70、Ku86和DNA-PKcs 的蛋白表达水平和基因表达水平。结果: ①16 例正常骨髓或外周血单个核细胞的连接能力为0%～46.6%,平均为（18.6±13.1）%,7 种髓系白血病细胞株的连接能力为10.6%31.0%,平均为22.4%。与正常骨髓相比,无显著性差异（P>0.05）。其中SHI-1 的连接功能最差,低于正常骨髓和外周血的平均水平。Jurkat 的连接能力为32.9%, U266 的连接能力为60.6%,5种胶质瘤细胞株的连接能力为31.9%53.9%,平均为43.2%。20 例慢性粒细胞白血病

论文目录:

序言

第一部分建立无细胞的非同源末端连接检测体系并用于临床标本的检测

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分髓系白血病细胞非同源末端连接能力的检测

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分髓系白血病的 DNA 双链断裂修复易于出错且通过微小同源序列进行末端连接

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第四部分 NHEJ 相关蛋白对髓系白血病过度活跃的NHEJ 功能的调控

材料和方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述:DNA 修复与白血病

致谢

发布时间: 2006-03-24

参考文献

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髓系白血病异常NHEJ DNA修复功能的研究

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