神经紧张肽类似物的设计、标记及体内外评价

论文摘要

神经紧张肽（neurotensin,NT）由十三个氨基酸组成,其序列为:Glu-Leu-Tyr-Glu-Asn-Lys-Pro-Arg-Arg-Pro-Tryr-Ile-Leu。它在中枢神经系统和胃肠组织中部具有广泛的生理作用。研究表明,NT的生物学功能是它与细胞表面的神经紧张肽受体相互作用的结果。75%的肠道胰腺肿瘤过度表达NT受体,而正常的胰腺组织、胰腺炎和胰腺内分泌肿瘤不能过度表达NT受体。NT类似物可以应用于NT受体过度表达的肿瘤的显像诊断。本论文旨在根据文献报道的经验设计两条神经紧张肽NT（8-13）类似物并对其体内外特性进行评价。 [目的]设计神经紧张肽NT（8-13）类似物,NT1:Arg-Lys-Pro-Tyr-Tle-Leu和NT2:Lys-Arg-Pro-Tyr-Tle-Leu。用氯胺T法分别对NT1和NT2进行125I标记,并评价标记化合物的体内和体外的生物学特性,分别得出二者在体外与HT29细胞结合的特征常数及在正常小鼠和荷人结肠癌裸鼠体内的分布特性,根据结果推测其用于肿瘤受体显像的可能性。 [方法]①标记实验:用氯胺T法对NT1和NT2进行125I标记,用Sep-Pak C18反相柱分离纯化,用RP-HPLC检测并计算125I-NT1和125I-NT2的标记率和放化纯。②受体结合分析:通过125I-NT2与HT29细胞受体体外结合实验条件的选择,确定细胞数量、温育温度和温育时间,并在选定的实验条件下,进行体外结合实验。以125I-NT2与HT29细胞受体饱和实验,用prism4.0软件分析数据,得出Kd值;以NT1对125I-NT2进行竞争取代反应,用prism4.0软件分析数据,得出IC50值。③动物体内分布实验:分别分组以125I-NT1和125I-NT2进行在正常小鼠和荷人结肠癌裸鼠体内分布实验,标记物经尾静脉注射后不同时相取血后处死动物,取心、肝、脾、肺、肾、胃和肌肉等器官（在荷瘤裸鼠实验中还要取得肿瘤组织）,称重并测定其放射性活度,计算单位质量脏器摄取放射性活度占注入总活度的百分率（%ID/g）。 [结果]①标记实验:采用氯胺T法对NT1和NT2进行了125I标记。125I-NT1和125I-NT2标记率分别为68%和76%,纯化后放射化学纯度>98%。②受体结合分析:125I-NT2与HT29细胞受体结合实验比活度为9.71×1012Bq/mmol;125I-NT2与HT29细胞受体结合的较佳实验条件为:细胞量,106个;温育温度,25℃;温育时间,1h。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 前言
• 1.1 多肽受体显像在肿瘤诊断中的应用
• 1.1.1 肿瘤受体显像
• 1.1.2 用于肿瘤受体显像的多肽及其类似物
• 1.1.3 受体显像技术
• 1.2 神经紧张肽及其类似物的研究现状及分析
• 1.2.1 神经紧张肽及其生物功能
• 1.2.2 神经紧张肽类似物的研究现状
• 1.2.3 神经紧张肽类似物的放射性标记物
• 1.3 本论文的研究内容
• 1.3.1 神经紧张肽类似物NT1和NT2的设计
• 1.3.2 实验内容和目的意义
• 第二部分 实验部分
• 材料和仪器
• 1、材料
• 2、主要仪器
• 实验方法
• 2.1 多肽评价的实验准备
• 2.1.1 溶液的配制方法
• 2.1.2 人结肠癌细胞HT29细胞的培养
• 2.1.3 荷人结肠癌裸鼠肿瘤模型的建立
• 2.2 神经紧张肽类似物NT2的碘标记及体内外评价
• 125I标记及标记物的纯化和鉴定'>2.2.1 NT2的¹²⁵I标记及标记物的纯化和鉴定
• 125I-NT2与HT29细胞受体饱和实验'>2.2.2¹²⁵I-NT2与HT29细胞受体饱和实验
• 125I-NT2分布实验'>2.2.3 正常小鼠体内¹²⁵I-NT2分布实验
• 125I-NT2分布实验'>2.2.4 荷人结肠癌裸鼠体内¹²⁵I-NT2分布实验
• 2.3 神经紧张肽类似物NT1的碘标记和体内外评价
• 125I标记及标记物的纯化和鉴定'>2.3.1 NT1的¹²⁵I标记及标记物的纯化和鉴定
• 125I-NT2竞争HT29细胞受体竞争实验'>2.3.2 NT1与¹²⁵I-NT2竞争HT29细胞受体竞争实验
• 251I-NT1分布实验'>2.3.3 正常小鼠体内²⁵¹I-NT1分布实验
• 125I-NT1分布实验'>2.3.4 荷人结肠癌裸鼠体内¹²⁵I-NT1分布实验
• 第三部分 实验结果与讨论
• 3.1 神经紧张肽类似物NT1和NT2的HPLC图及质谱图
• 125I标记实验'>3.2 神经紧张肽类似物NT1和NT2的¹²⁵I标记实验
• 125I标记实验结果'>3.2.1 NT1和NT2的¹²⁵I标记实验结果
• 3.2.2 论论
• 125I-NT1和¹²⁵I-NT2与HT29细胞受体结合特性研究'>3.3¹²⁵I-NT1和¹²⁵I-NT2与HT29细胞受体结合特性研究
• 125I-NT2与HT29细胞受体结合实验条件的选择'>3.3.1¹²⁵I-NT2与HT29细胞受体结合实验条件的选择
• 125I-NT2与HT29细胞受体结合饱和实验'>3.3.2¹²⁵I-NT2与HT29细胞受体结合饱和实验
• 125I-NT2竞争HT29细胞受体竞争实验'>3.3.3 NT1与¹²⁵I-NT2竞争HT29细胞受体竞争实验
• 3.3.4 讨论
• 125I-NT1和¹²⁵I-NT2动物体内分布实验'>3.4¹²⁵I-NT1和¹²⁵I-NT2动物体内分布实验
• 125I-NT1和¹²⁵I-NT2在ICR小鼠体内分布及数据分析'>3.4.1¹²⁵I-NT1和¹²⁵I-NT2在ICR小鼠体内分布及数据分析
• 125I-NT1和¹²⁵I-NT2在荷人结肠癌裸鼠体内分布及数据分析'>3.4.2¹²⁵I-NT1和¹²⁵I-NT2在荷人结肠癌裸鼠体内分布及数据分析
• 3.4.3 论论
• 第四部分 结论与展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录