抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）卵黄免疫球蛋白（IgY）的制备与性质研究

论文摘要

免疫球蛋白（immunoglobulin）是具有抗体活性的一种糖蛋白,主要存在于血浆中,也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白可分为五类,即免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）、免疫球蛋白D（IgD）和免疫球蛋白E（IgE）,其中IgG是最主要的免疫球蛋白。而母鸡血液中的免疫球蛋白可传递到鸡卵黄中,并且在鸡发育过程中起保护作用,此种免疫球蛋白称为鸡卵黄免疫球蛋白（IgY）。IgG是存在于鸡卵黄中的主要免疫球蛋白,而IgM和IgA则主要存在于血清蛋白中。IgY属多克隆抗体,多克隆抗体在疾病的诊断和防治方面具有许多特定优点,通常一次性大量制备是相当困难的,而多次制备,又导致抗体的均一性差。母鸡一经免疫应答后,可从其卵黄中不断获得特异性的抗体。IgY纯度高、特异性强,不会象其他哺乳动物产生的抗体那样会发生交叉血清反应或过敏反应,因而它是最安全的生物制剂,可替代免疫小鼠、豚鼠或兔等哺乳动物所制备的抗体而大量生产。近年来,IgY的研究和应用是免疫学领域的热点和十分活跃的课题。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是引起院内感染的重要致病菌,其致病性强,对多种抗菌药物耐药,在治疗上十分棘手。本文用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作为抗原免疫母鸡制备了抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌IgY,并对其理化性质和生物学活性进行了研究,旨在为其以后在诊断和防治方面的应用奠定基础。[目的]观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）抗体的含量、纯度、来源及稳定性。[方法]用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度;Western blot免疫印迹法测定该抗体来源;ELISA检测IgY对温度、酸碱度、胃蛋白酶、胰蛋白酶的稳定性。[结果]抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液,抗体纯度达96%;免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性;IgY具有良好的热稳定性,对酸碱、胃蛋白酶、胰蛋白酶具有一定的耐受力。[结论]改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且其有良好的生物学活性。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌培养与免疫
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第二章 抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌卵黄免疫球蛋白的分离纯化与含量测定
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第三章 抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌卵黄免疫球蛋白的性质研究
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 参考文献
• 文献综述
• 中英文对照缩略词表
• 附录 攻读硕士期间发表的论文及参加的学术会议
• 致谢