不同温度对虎奶菇胞内胞外蛋白差异表达的影响

论文摘要

自溶现象广泛存在于各种微生物中,但有关食药用菌虎奶菇（Pleurotustuber-regium（Fr.）Sing）菌丝体自溶的研究国内外均未见报道。本文通过筛选获得引起自溶的较佳条件,用该条件进行虎奶菇自溶处理,最终应用差异蛋白质组分析方法研究其自溶。首先利用液体发酵法培养虎奶菇菌丝体,分别研究了不同温度、pH值与渗透压等因素对其菌丝体自溶的影响。结果表明,虎奶菇菌丝体较佳的单因素自溶条件分别为温度40℃、pH 9.0、NaCl浓度3-4%。然后比较了虎奶菇菌丝体蛋白质的三种提取方法以寻找一种适用于蛋白质组学双向电泳的高分辨率的提取方法。结果表明TCA/丙酮法提取所得到的蛋白质样品的双向电泳图谱效果最佳。同时获得制备胞外蛋白样品的方法。最终以40℃处理为实验组,10℃处理为对照组,采用差异蛋白质组学方法研究虎奶菇的自溶现象,得到22个明显上调的蛋白质点,经MALDI-TOF/MS检测及肽指纹图谱（PMF）分析,其中8个蛋白质得到鉴定,表现为:蛋白酶体参与泛素-蛋白酶体通路,β-1,3-glucanosyltransferase及微管蛋白与细胞壁的更新、细胞壁的修补相关,蛋白酶和内切葡聚糖酶促进细胞壁和细胞质自然降解,14-3-3蛋白参与细胞信号转导。因此推测菌丝体自溶过程如下:当营养条件缺乏或高温下,往往出现细胞正常代谢失控,细胞内部结构解体,这时蛋白酶体承担了降解细胞内蛋白质的任务,蛋白酶和内切葡聚糖酶等水解酶的大量释放促进细胞壁和细胞质降解,获得的自溶产物为其后代生长提供营养源;大量合成β-1,3-glucanosyltransferase及微管蛋白等,参与细胞壁的更新、修补,以维持其正常形态和功能。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 缩略
• 1.前言
• 1.1 食药用真菌虎奶菇
• 1.2 真菌自溶现象
• 1.2.1 自溶现象及自溶过程
• 1.2.2 酵母菌
• 1.2.3 丝状真菌
• 1.3 真菌蛋白质组学
• 1.3.1 蛋白质组学研究的历史背景及研究技术
• 1.3.2 真菌的蛋白质组学研究现状
• 1.4 本研究的特点与意义
• 2.材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试材料
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 试剂
• 2.1.4 仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 菌体制备
• 2.2.1.1 平板培养
• 2.2.1.2 菌体制备
• 2.2.2 菌丝体自溶条件的研究
• 2.2.2.1 不同温度处理
• 2.2.2.2 不同pH值处理
• 2.2.2.3 不同渗透压处理
• 2.2.2.4 菌丝体自溶程度的表征方法
• 2.2.3 自溶相关蛋白的鉴定
• 2.2.3.1 菌丝体蛋白质提取方法比较
• 2.2.3.2 自溶相关蛋白的鉴定
• 3.结果与分析
• 3.1 菌丝体自溶条件的研究
• 3.1.1 不同温度对虎奶菇菌丝体自溶的影响
• 3.1.2 不同pH值对虎奶菇菌丝体自溶的影响
• 3.1.3 不同渗透压对虎奶菇菌丝体自溶的影响
• 3.2 自溶相关蛋白的鉴定
• 3.2.1 菌丝体胞内蛋白质提取方法比较
• 3.2.1.1 不同方法处理的蛋白产量比较
• 3.2.1.2 电泳结果的比较
• 3.2.2 自溶相关蛋白的鉴定
• 3.2.2.1 2-DE结果
• 3.2.2.2 蛋白质表达图谱的建立及差异点的确定
• 3.2.2.3 MALDI-TOF/MS（基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱）分析与鉴定
• 4.结论与讨论
• 4.1 菌丝体自溶的条件
• 4.2 自溶的相关蛋白
• 4.3 菌丝体自溶的蛋白质表达模式
• 4.4 问题与展望
• 5.参考文献
• 致谢